中华猕猴桃遗传转化受体系统的建立
猕猴桃遗传转化研究进展
猕猴桃遗传转化研究进展猕猴桃属于猕猴桃科猕猴桃属的多年生落叶藤本植物,其果实营养丰富,人体必需的矿物质、纤维素和维生素含量较高。
此外,还具有药用价值,有水果之王之美誉。
要获得高品质的猕猴桃,遗传转化无疑成为一种有效的现代生物技术。
猕猴桃属雌雄异株,倍性复杂,雌雄株间花期不遇使种间杂交困难,育种周期长,且有不确定性。
因此,需要引进新的手段和方法进行育种。
目前,猕猴桃的遗传转化已取得很大进步,本文就猕猴桃遗传转化方面的研究进展做一综述。
1 已别离与克隆的猕猴桃目的基因目前已被别离和克隆的目的基因,主要与猕猴桃果实成熟及衰老过程有关。
从1993年开始,MacDiarmid和任小林等分别成功地从猕猴桃果实中别离和克隆出ACC氧化酶基因,导入猕猴桃,均可增强猕猴桃的耐贮藏性。
1997年王春霞等建立了由根癌农杆菌介导的西瓜高效遗传转化系统,来控制植株的寿命和果实早熟或耐储藏性。
xx年宋喜贵等利用从番茄果实中别离到的ACC合成酶c DNA基因反向置于CaMV35S启动子的控制之下,并转入美味猕猴桃的愈伤组织中从而延缓植株衰老并提高其耐贮藏性。
Atkinson等从美味猕猴桃中别离克隆出PG基因。
任小林等还从美味猕猴桃中克隆了钙调蛋白c DNA。
徐昌杰等从中华猕猴桃别离出的ACC合成酶家族四个成员的基因组DNA片段。
2 猕猴桃遗传转化的方法遗传转化主要是将外源基因导入受体细胞中,使之发生定向的遗传变异。
通常利用重组DNA,组织培养或种质系统转化等技术,其方法主要有农杆菌介导法、花粉管通道法等。
目前,在猕猴桃遗传转化中应用的方法主要有农杆菌介导法、基因枪法、DNA直接摄取法等。
2.1 农杆菌介导转化法包括根癌农杆菌和发根农杆菌介导法。
该方法研究较成熟。
农杆菌介导法获得稳定转化体的频率更高且重复性更好。
2.2 基因枪介导转化法又称微弹轰击法,其将外源DNA片段包裹在微小金粒或钨粒外表,然后在高压作用下将微粒高速射入植物细胞或组织中,微粒上的外源DNA进入细胞后整合到植物染色体上,得到阳性表达从而实现基因转化。
陇南野生中华猕猴桃组培快繁体系的建立
陇南野生中华猕猴桃组培快繁体系的建立作者:陈强田凤鸣何九军王永斌刘琼来源:《甘肃农业科技》2021年第10期摘要:以陇南野生中华猕猴桃种子为材料,在无菌条件下培养萌发产生实生苗,将无菌实生苗地上部分转接到培养基上建立的初代培养体系为基础,发现继代增殖最适培养条件为:MS+6-BA 2.5 mg/L+NAA 0.4 mg/L+GA3 0.2 mg/L,生根培养最适条件为1/2 MS+IBA 0.6 mg/L;用商品基质在温室移栽组培苗,成活率可达87.5%。
关键词:野生中华猕猴桃;无菌实生苗;组织培养;快繁体系中图分类号:S663.4;Q943.1 文献标志码:A 文章编号:1001-1463(2021)10-0035-04doi:10.3969/j.issn.1001-1463.2021.10.009Establishment of Tissue Culture and Rapid Propagation System of Wild Kiwifruit in Southern Gansu ProvinceCHEN Qiang 1, 2, TIAN Fengming 1, 2, HE Jiujun 1, 2, WANG Yongbin 1, 2,LIU Qiong 1(1. College of Life Science,Longnan Teacher College, Longnan Gansu 742500, China; 2. Center for Research and Development of Longnan Characteristic Agro-Bioresource, Longnan Gansu 742500, China)Abstract:The seeds of Actinidia chinensis var. Longnan were used as explants to produce seedlings under aseptic conditions. Based on the primary culture system established by transferring the above ground part of aseptic seedlings to the medium, it was found that the optimum conditions for subculture and multiplication were MS+6-BA 2.5 mg/L + NAA 0.4 mg/L+GA3 0.2 mg/L, and the optimum conditions for rooting culture were 1/2 MS+IBA 0.6 mg/L, The survival rate of tissue culture seedlings can reach 87.5% by transplanting in greenhouse with commercial substrate.Key words:Wild kiwifruit; Aseptic seedling; Rapid propagation system猕猴桃俗称阳桃、山洋桃、毛桃等,属猕猴桃科猕猴桃属多年生藤本植物。
猕猴桃、枣高效再生体系的建立及农杆菌介导的遗传转化研究
猕猴桃、枣高效再生体系的建立及农杆菌介导的遗传转化研究猕猴桃(Actinidia)果实风味独特,营养丰富,被誉为“水果之王”。
枣(Zizyphus jujuba Mill.)是我国第一大干果树种。
猕猴桃属雌雄异株,遗传背景复杂;枣花蕾小、自然坐果率低、胚败育率高等因素,传统杂交育种方法存在周期长、效率低等问题,获得优质多抗的猕猴桃、枣新品种困难重重。
基因工程的发展为猕猴桃、枣的育种工作开辟了一条新的途径。
本研究以河南特异红果肉猕猴桃资源中华猕猴桃‘伏牛95-2’(Actinidia chinensis’Funiu95-2’)为材料,建立了中华猕猴桃‘伏牛95-2’高效再生体系、遗传转化体系,且获得了转抗菌肽D基因的转基因植株,PCR检测、Southern 杂交检测证明外源基因已整合到猕猴桃基因组中。
灰枣遗传转化研究,本试验以灰枣(Zizyphus jujuba ’Huizao’)为材料建立了灰枣组培快繁体系、叶片直接再生体系及对灰枣遗传转化进行了初步探讨。
主要结果如下:1.以中华猕猴桃‘伏牛95-2’叶片为外植体,探讨了不同植物生长调节物质对叶片再生不定芽增殖及生根的影响,建立了高效的再生体系。
结果表明,叶片外植体在MS+ZT1.0mg/L+ NAA 0.3mg/L培养基上,不定芽分化率最高为87.5%;在MS+ 6-BA 2.0 mg/L+NAA0.5mg/L培养基中,不定芽增殖系数最高为4.2;适宜不定芽生根培养基为1/2MS+NAA2.0mg/L,生根率为100%。
2.以中华猕猴桃‘伏牛95-2’叶片为外植体,研究了抗生素对外植体生长的影响。
结果表明,中华猕猴桃‘伏牛95-2’对卡那霉素较敏感,浓度20mg/L时愈伤组织及不定芽分化率均为0,20mg/L为中华猕猴桃‘伏牛95-2’叶片遗传转化时筛选最佳浓度;生根培养基中附加30mg/L卡那霉素时,则完全抑制根的形成。
头孢霉素和羧苄青霉素对中华猕猴桃‘伏牛95-2’叶片分化均有抑制作用,但头孢霉素对叶片分化的抑制作用比羧苄青霉素小;结合遗传转化中的抑菌试验,选用400mg/L头孢霉素为中华猕猴桃‘伏牛95-2’遗传转化中适宜抑菌抗生素及浓度。
猕猴桃的遗传转化研究以及SSR分子标记在其遗传多样性中的应用
猕猴桃的遗传转化研究以及SSR分子标记在其遗传多样性中的应用摘要:猕猴桃栽培品种存在一定的缺陷,利用遗传转化技术对猕猴桃品质特性改良具有广泛的应用前景。
对猕猴桃目的基因的分离,猴桃遗传转化的基本方法和研究进展以影响猕猴桃转化效率的因素进行了总结,并对猕猴桃遗传转化需解决的问题进行了探讨。
综述了SSR标记技术在猕猴桃群体遗传多样性研究、基因连锁图谱的构建、种质资源鉴定以及分子标记辅助育种等方面的应用概况,并在此基础上提出了今后猕猴桃育种发展的方向。
关键词:猕猴桃;遗传转化;SSR;猕猴桃;遗传多样性猕猴(Actinidia)属猕猴桃科猕猴桃属植物,其风味独特,营养丰富,Vc含量高,有一定保健功效,因而倍受关注。
我国猕猴桃栽培面积居世界第一位,产量排第二位。
目前,猕猴桃的栽培品种往往存在某些性状缺陷,如耐贮藏性和抗逆性较差等。
通过常规育种方法改良往往周期长、工作量大、效率较低,很难满足生产发展的需要。
采用遗传转化技术培育新品种,有几个明显的优点:首先,它可以有目的、有计划地引入优良性状而不需要改变原有的其它特性;其次,它可以突破物种障碍,把许多原来植株中没有的基因引入;另外,它可以在幼苗期对转化植株进行筛选和鉴定,大大缩短了得到稳定遗传的新品种所需要的时间。
因此,遗传转化技术为猕猴桃种质改良开辟了一条新的途径,其将大大缩短猕猴桃的育种年限,扩展猕猴桃的育种范围,拓宽猕猴桃的基因资源,从而大力推动猕猴桃育种工作的进程。
一直以来,我国乃至世界上的主要栽培品种比较单一,引种区域相对狭小,此外,由于猕猴桃属中普遍存在自发的种间杂交和种内多倍化的现象,因此不同学者对该属植物种的界定及亲缘关系存在不同的看法。
分子标记技术是猕猴桃群体遗传结构分析、物种遗传多样性鉴定、遗传基因连锁图谱构建以及分子标记育种等方面的理想工具。
利用分子标记技术分析生物个体之间DNA序列差别并用于作图的研究始于1980年。
经过多年的发展,现在的DNA标记技术已有10多种,其中简单重复序列(SSR)或称微卫星DNA、简单串联重复序列(STRP)是高等真核生物基因组中种类多、分布广、具有高度的多态性和杂合度的分子标记技术,比RFLP和RAPD分子标记具有更丰富的多态性,呈孟德尔式遗传。
猕猴桃的研究
猕猴桃的植株是分为雌雄的,雄株多毛,而叶小,雄株花也较早 出现于雌花。然而雌株却少毛,或无毛,叶一大于雄花。猕猴桃的雌花和雄花来自雄株的花雌株的花
遗传转化的方法:根癌农杆菌或发根农杆菌介 导法、病毒介导法 、电激法、电注射法 、 LB法 、动态导入法、基因枪法、显微注射法、 超声波法、花粉管通道法 等
山茶目
命名者 :
猕猴桃科
猕猴桃属
猕猴桃种
Yangtao Kiwifruit Planch
猕猴桃的分类、地理分布以及引种历史
﹛美味猕猴桃
猕猴桃的分类 中华猕猴桃
地理分布:中国是猕猴桃的原生中心,世界猕猴 桃原产地在湖北宜昌市夷陵区雾渡河镇;猕猴 桃生 于山坡林缘或灌丛中,有些园圃栽培。我 国长江流域以南各地,北 至西北、四川、河南 等地均有分布。
猕猴桃的形态特征:落叶藤本;枝褐色,有柔毛,髓
白色,层片状。叶近圆形或宽倒卵形,顶端钝圆或微凹,很少有小突 尖,基部圆形至心形,边缘有芒状小齿,表面有疏毛,背面密生灰白 色星状绒毛。花开时乳白色,后变黄色,单生或数朵生于叶腋。萼片5, 有淡棕色柔毛;花瓣5—6,有短爪;雄蕊多数,花药黄色;花柱丝状, 多数。浆果卵形成长圆形,横径约3厘米,密被黄棕色有分枝的长柔 毛.花期5—6月,果熟期8—10月。猕猴桃的大小和一个鸡蛋差不多 (约6厘米高、圆周约4.5至5.5厘米),一般是椭圆形的。深褐色并带 毛的表皮一般不食用。而其内则是呈亮绿色的果肉和一排黑色的种子。 猕猴桃的质地柔软,味道有时被描述为草莓、香蕉、凤梨三者的混合。
农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中,自从技 术瓶颈被打破之后,农杆菌介导转化在单子叶植物中也 得到了广泛应用,其中水稻已经被当作模式植物进行研 究。
以潮霉素为筛选标记猕猴桃遗传转化体系的初步建立
关键词 : 潮霉素 ; 筛选标记 ; 猕猴桃 ; 遗传转化
中图分类号 : 6.0 . 文献标识码 : 文章编号 :O 1 0 920 )1 19 3 S634 32 A 10一OO (O8O 一O8 一O
猕猴桃( cnd ) A t i a 系猕 猴桃 科猕 猴桃属植 物 , 风 i i 其 味独特 , 营养丰富 , c V 含量高 , 有一定保 健功效 , 因而倍 受关 注。我国猕猴桃栽培面积居世界第一位 , 产量排第
不定芽分化率 。待转化苗 长至 3 m高 时, ~5c 将其切 下 接人生根培养基中进行生根培养。 12 4 转化苗 P R检 测 随机 取叶片 、 .. C 茎段和叶片的 转化苗叶片半片放人 15 . mL灭菌离心管中, 以 S S 然后 D
1 9 8
基 金项 目: 东省 科技 计划 资助 项 目(05 6311)仲 恺 农 业 广 2oB 0000 ; 技 术学 院校 基金 ( 3532 。 G 0 11) 收稿 日期 :07 9 1 20一O 一O
性状选育新 品种 方面具 有广 阔的应 用前 景。它 可以有
目的、 有计划地 向猕 猴桃 引入优 良性状 而不需 要改变它
质粒载体携带潮霉 素磷 酸转移
酶 (p) h t基因 ; 农杆菌菌株为 L A40 。 B 44
121 实生苗的获得 将种子洗净后 , 25m / .. 用 . g L的 赤霉素溶液分 别处理 5h 将经 赤霉素处 理过 的种 子分 ,
维普资讯
北 方 园 艺 28 )8 1 o ( :9 9 o I1 ~ 1
・ 生物技术 ・
以潮霉素为筛选标记猕猴桃遗传转化体系的初步建立
陈 晓 玲 秦 华 明 , 玲 艳 潘 少 英 , 周 , ,罗 翠 欢 ,梁 红
云南野生猕猴桃资源不同居群遗传多样性及遗传演化关系
676# 供 试 材 料 # 通 过 查 阅 文 献 资 料 及 实 地 调 查 发 现 !云 南 省 的 野 生 猕 猴 桃 资 源 主 要 分 布 于 滇 东 北 的 威 信 (镇 雄 (彝 良 (绥 江 (永 善 !滇 东 的 师 宗 !滇 南 的 屏 边 !滇 东 南 的 西 畴 和 麻 栗 坡 !以 及 滇 西北的云龙等地&!"&+%!"!&年的+%&"月在这&"个地区 调查 收集 野生 猕猴 桃资 源&从健 康 (无 病 虫 害 的 野 生 猕 猴 桃 植 株 上 尽 量 采 集 幼 嫩 的 能 满 足 实 验 分 析 研 究 所 需 的 材 料 !用 硅 胶 及
气候
采集 量'份
采集的猕猴桃种类
麻栗坡 &"#l%%S"&"$l&(S !!l#(S"!%l%#S 亚热带季风气候
中越猕猴桃(奶 果 猕 猴 桃(多 齿 猕 猴 桃(蒙 自 猕 猴 桃( !# 阔叶猕猴桃(红毛猕猴桃
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猕猴桃AcGLK2a基因过表达载体的构建及在番茄中的遗传转化
得猕猴 桃 Ac G L K2 a基 因, 将 该基因序列导入带有 C a MV3 5 S启动子的植物表达载体 p B I 1 2 1 上 。将所构建 的 p B l l 2 1 — 3 5 S - Ac G L K2 a表达载体采用农杆 菌介 导的方式转 入番 茄植株 中 , 得 到转基 因番茄 苗并 做 阳性 鉴定 。
半 定 量 分 析 转 基 因 番 茄 中 Ac G L K2 a的 表 达 量 , 并测定 转基 因番茄和 野生 番茄的果 实 、 叶 片 中 叶 绿 素 的 质 量
比。半定量逆转录 P C R( r e v e r s e t r a n s c r i p t i o n - P C R, R T- P C R) 分析显示 , 猕猴桃 Ac G L K2 a基 因在转基 因植株 中表达 , 转基 因番茄果实 、 叶片中的叶绿素质量 比均 比野生型高 。因此 , 将猕猴 桃 Ac G L K2 a基因在 番茄植株 中过表达有利于提高番茄果实品质 。
关键词 : 过表达 ; 遗传转化 ; 转基 因番茄 ; 果实品质改 良
中图分类号 : Q7 8 文献标 识码 : A 文章编号 : 1 0 0 3 — 5 0 6 0 ( 2 0 1 5 ) 0 2 — 0 2 4 6 — 0 4
Co n s t r u c t i o n o f Ac t i n i d i a c h i n e n s i s Ac GLK 2 a
第3 8卷 第 2期
2 0 1 5年 2月
合肥 工 业 大 学 学 报 ( 自然科学版)
J OU RNAI OF HE FEI UNI VE RS I TY OF TECHNOLOGY
Vo 1 . 3 8 NO . 2
米良一号猕猴桃遗传转化体系的建立
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,ห้องสมุดไป่ตู้
(. e t l o t 1C nr uhUnvri f oet n eh ooy C agh 4 0 0 , u a, ia 2 J h uUnv ri ,i o 1 0 0 H n n aS iesyo F rs ya dT cn lg , h n sa 10 4 H n n Chn ; .i o t r s iesy J h u4 6 0 , u a, t s Chn ; .n tue f u t pcl r utr oo yChn s Acd myo S in e, agh 1 15 Hu a , hn ) ia 3 Istt S b o i Agi l ee lg, iee ae f ce csChn sa4 0 2 , n n C ia i o r a c u
摘 要 :为建立猕猴桃基 因功能研究技术平 台并通 过生物技术改 良猕猴桃 , 选用米 良一 号叶片和茎 为外植体 , 通 过 优化培养基 , 建立 了适合转 化的高效再生系统 , 通过 农杆菌介 导将 AC ( . C 1 氨基环 丙烷 -- 1 羧酸 )氧 化酶基因 成功转化米 良一号 , 构建 了根 癌农杆菌介 导米 良一号遗 传转化体 系。结果表 明,T D培养基 为合适 的愈伤 诱导培
Abs r c :I r e o e t b ih t e t c n l g plt o m o u to nayss o e e n e e i mp o e n fk wir i t o h t a t n o d rt s a ls h e h o o y a f r f r f nc i n a l i f g n s a d g n tc i r v me t o i fu t hr ug
培养基及红阳猕猴桃的遗传转化方法[发明专利]
专利名称:培养基及红阳猕猴桃的遗传转化方法专利类型:发明专利
发明人:曾云流,徐哲明,祝曼,孙娟,李昂,刘普,程运江申请号:CN202010058883.7
申请日:20200119
公开号:CN111149699A
公开日:
20200515
专利内容由知识产权出版社提供
摘要:本发明属于猕猴桃基因工程技术领域,具体涉及培养基及红阳猕猴桃的遗传转化方法。
该遗传转化方法包括依次进行的以下步骤:农杆菌培养、叶片预培养、农杆菌侵染叶片、愈伤筛选培养、芽伸长培养、芽生根培养和阳性苗移栽;叶片预培养、农杆菌侵染叶片、愈伤筛选培养、芽伸长培养和芽生根培养步骤,均采取本发明所提供的对应的培养基。
本发明可以缩短猕猴桃遗传转化时间,提高遗传转化效率,其中特别是找到快速且高效获得阳性苗的培养基配方,对缩短红阳猕猴桃遗传转化时间,提高遗传转化效率具有重要作用。
申请人:华中农业大学
地址:430070 湖北省武汉市洪山区狮子山街1号
国籍:CN
代理机构:北京轻创知识产权代理有限公司
代理人:陈熙
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一种农杆菌介导的猕猴桃转化的方法[发明专利]
专利名称:一种农杆菌介导的猕猴桃转化的方法专利类型:发明专利
发明人:李旭,杜睿胤,鲍泽洋,杨震峰,郑清波
申请号:CN202210048784.X
申请日:20220117
公开号:CN114292870A
公开日:
20220408
专利内容由知识产权出版社提供
摘要:本发明公开了一种农杆菌介导的猕猴桃转化的方法,属于猕猴桃基因工程技术领域,其技术方案要点是:猕猴桃转化的方法包括下胚轴稳定转化和果实瞬时转化;下胚轴稳定转化的步骤如下:S1、猕猴桃种子播种;S2、下胚轴去顶保湿;S3、遗传转化载体构建;S4、农杆菌转化及侵染;S5、转基因植株鉴定;S6、稳定转化下胚轴体系建立;果实瞬时转化的步骤是:A.遗传转化载体构建;B.农杆菌转化;C.农杆菌菌液转入猕猴桃果实;D.瞬时转化果实体系建立。
本发明主要用于建立稳定转化下胚轴体系和瞬时转化果实体系,利用该方法成功实现了稳定转化和果实瞬时转化,有效改变猕猴桃遗传转化再生率普遍低下的现状。
申请人:浙江万里学院
地址:315100 浙江省宁波市鄞州区钱湖南路8号
国籍:CN
代理机构:重庆信必达知识产权代理有限公司
代理人:刘会锋
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中华美味猕猴桃复合体景观遗传结构和分子系统地理学研究的开题报告
中华美味猕猴桃复合体景观遗传结构和分子系统地理学研究的开题报告题目:中华美味猕猴桃复合体景观遗传结构和分子系统地理学研究研究背景和意义:猕猴桃(Actinidia chinensis Planch)是我国的特产水果之一,因其独特的口感和营养价值备受欢迎。
中国生态环境的多样性和地理分布使得中华美味猕猴桃具有多样的景观遗传结构和分子系统地理学属性。
猕猴桃的遗传多样性和分子系统地理学研究对猕猴桃的保护和利用具有重要意义。
研究对象:中华美味猕猴桃复合体(Actinidia chinensis Planch complex)。
研究内容:1. 系统收集中华美味猕猴桃复合体生物标本,采集样品及地理信息。
2. 应用微卫星分子标记收集中华美味猕猴桃复合体种群数据,分析景观遗传结构和种间遗传距离。
3. 应用DNA杂交、遗传多样性和分子人口遗传学方法分析中华美味猕猴桃复合体的分子系统地理学。
预期研究结果:1. 揭示中华美味猕猴桃复合体的景观遗传结构关系和种间遗传距离。
2. 探究中华美味猕猴桃复合体的分子系统地理学。
3. 为中华美味猕猴桃复合体资源的保护和利用提供理论依据。
研究方法:1. 应用微卫星分子标记技术,设计和筛选适合中华美味猕猴桃复合体的微卫星引物,收集种群数据。
2. 应用DNA杂交、遗传多样性和分子人口遗传学方法分析中华美味猕猴桃复合体的分子系统地理学。
3. 运用GIS技术,结合样品地理坐标信息进行景观遗传结构分析。
研究时间安排:1. 第一年:组织样品采集和数据处理,微卫星分子标记。
2. 第二年:分子系统地理学研究和GIS处理,景观遗传结构分析。
3. 第三年:数据分析和结果论证,论文写作和撰稿。
预期研究成果:1. 发表SCI论文2-3篇。
2. 参加国内外学术会议,交流资源保护和利用经验。
3. 为中华美味猕猴桃复合体资源保护和利用提供理论基础。
中华猕猴桃华优遗传转化系统建立研究
中华猕猴桃华优遗传转化系统建立研究陆荣生;杜晓莉;霍秀娟;韩美丽;马跃峰;覃建林;郭成林【摘要】为了更好的利用遗传转化技术进行猕猴桃品种改良研究,以中华猕猴桃华优组培苗幼嫩叶片为材料,研究了外植体分化不定芽再生途径所需的培养条件及转化效率提高方法.结果表明,在叶片不定芽诱导培养基中加入浓度为0.75~1.0 mg/L 的TDZ时,叶片愈伤发生率达85.7%~90.1%,不定芽发生率达41.8%~44.6%;在TDZ 1.0mg/L基础上,补充0.1~0.4 mg/L IAA可使叶片愈伤发生率提高到96.7%~100%,不定芽发生率提高到67.4%~71.9%;在农杆菌侵染液与共培养基中同时加入75~100 μmol/L浓度的AS,可使GUS瞬时表达率及卡那抗性芽发生率分别提高至27.9%、14.5%;外植体被农杆菌侵染前,的预培养2~3 d有利于提高GUS表达率与卡那抗性芽发生率.GUS染色与PCR扩增检测结果显示,Shiva A 基因已转化至中华猕猴桃华优转基因植株.【期刊名称】《广东农业科学》【年(卷),期】2014(041)007【总页数】6页(P38-42,封2)【关键词】猕猴桃;不定芽;再生;转化【作者】陆荣生;杜晓莉;霍秀娟;韩美丽;马跃峰;覃建林;郭成林【作者单位】广西农科院植物保护研究所/广西作物病虫害生物学重点实验室,广西南宁 530007;广西农科院植物保护研究所/广西作物病虫害生物学重点实验室,广西南宁 530007;广西农科院植物保护研究所/广西作物病虫害生物学重点实验室,广西南宁 530007;广西农科院植物保护研究所/广西作物病虫害生物学重点实验室,广西南宁 530007;广西农科院植物保护研究所/广西作物病虫害生物学重点实验室,广西南宁 530007;广西农科院植物保护研究所/广西作物病虫害生物学重点实验室,广西南宁 530007;广西农科院植物保护研究所/广西作物病虫害生物学重点实验室,广西南宁 530007【正文语种】中文【中图分类】Q789猕猴桃是一类富有较高营养与药用价值的重要水果,其果实中富含多种营养成分,不仅维生素C含量很高,而且其种子中含有大量的亚麻酸、不饱和脂肪酸等可降低血脂和血压的药用成分 [1]。
猕猴桃遗传育种及其产业化进展
: 新西兰 H ortR esearch 公司和 Genesis 研究开发有限公司的科学家将完成世界上最
∃ 176∃
福
建
林
业
科
技
第 37 卷
大的猕猴桃 DNA 序列集。育种专家可利用这些基因数据开发具有更好的抗病性及优良特性的猕猴桃新 品种。该序列集包含猕猴桃活性基因中的 130 000 个 DNA 表达序列标签 ( EST s) 。研究人员鉴定了控制 叶绿素降解和类胡萝卜素合成、 水果软化和维生素 C 合成控制基因的表达序列标签。 H o rtR esearch 公司 的育种专家将利用这一成果, 通过分子标记辅助选择 ( MAS) 方法加速猕猴桃新品种选育的进程。
[ 5]
对我国 猕猴桃 的 2 个商业 栽培物
种 # # # 中华猕猴桃和美味猕猴桃的 9个天然居群 (共 221 个样本 )的遗传多样性进行了分析 , 通过对 14对 SSR 引物的筛选 , 8 对重现性好的 SSR 引物扩增结果表现出良好的多态性, 可用于商业栽培物种的分类学 鉴定。张田等 ( 2007)
[ 13] [ 10 - 11 ]
, 但也逐步得到应用。脂氧合酶 ( LOX ) 在植物的生
[ 14]
长、 发育、 衰老以及抗机械伤、 抗病虫等过程中均发挥重要的调节作用, 陈昆松等 ( 1998) 采用 PCR 扩增 方法, 从成熟猕猴桃果实组织中成功地克隆到一个全长为 824 bp 的脂氧合酶 ( LOX) 基因片段。郭卫东等 ( 1999)
P rospect of Gen etics , Breed ing and Industrialization of K i w i Fru it
W U X iao m e i ( College of Chem istry and Lif e Sciences, L ishui Un iversity, L ishui 323000, Zhejiang, China) Abstrac t : In the paper , m uch in fo r m ation aboutm o lecular b io log ical identifica tion of kiw ifruit genetic resource d iversity , ne w varieties breed ing, physiolog ica l and b iochem ical charac ter o f its storage and industr ial utilization was summ arized It could be used as a refer ence to kiw ifruit researchers K ey word s : ki w i fru it ; gene tic diversity ; genetic breed ing; storag e; industrialization
猕猴桃叶片再生体系的建立和转抗菌肽D基因对保护酶活性的影响
猕猴桃叶片再生体系的建立和转抗菌肽D基因对保护酶活性的影响猕猴桃(Actinidia chinensis Planch.)是世界上一种重要的水果,该属有54个种,21个变种,共约75个分类单元,其中中华猕猴桃(A.chinensis Planch.var.chinensis,果肉绿色)和美味猕猴桃(A.chinensis var.deliciosa,果肉金黄色)是栽培最广泛的的两个商业种类。
而软枣猕猴桃(Actinidia arguta Planch)目前仅有零星栽培,因其果面无毛,风味独特,是一种具有发展前景的果树资源。
其中‘天源红’软枣猕猴桃果皮、果肉和果心全为红色,酸甜适口,光洁无毛,可带皮直接食用,具有重要推广经济价值。
为了建立‘天源红’软枣猕猴桃快繁体系,本试验以组培苗叶片及茎尖为材料,探讨了植物生长调节剂对叶片愈伤再生的影响。
猕猴桃细菌性溃疡病,是一种毁灭性细菌病害,对世界猕猴桃产业的发展造成了严重的威胁。
目前尚无有效方法抑制猕猴桃溃疡病害的发生,而采取基因工程技术培育抗病性强的品种是避免溃疡病带来损失的有效方法之一。
本研究以转抗菌肽D的中华猕猴桃为材料,诱导生根和移栽获得了大量的猕猴桃盆栽苗,通过喷施猕猴桃细菌性溃疡病病原菌,分析猕猴桃喷施菌液前后相关酶活性的变化,预测转基因植株的抗病性变化。
主要研究结果如下:(1)不同浓度的6-BA和NAA对‘天源红’软枣猕猴桃茎段增殖的影响分析结果表明,茎段增殖倍数随着6-BA的浓度增加而增大,在6-BA浓度为3.0 mg/L,NAA浓度为0.5 mg/L时,茎段增殖倍数达到最大,为3.29±0.03。
(2)不同浓度的ZT和6-BA对叶片形成愈伤的结果表明,6-BA和ZT对愈伤形成的影响有很大的不同。
6-BA浓度从0.5 mg/L到3.0 mg/L,叶片均不能形成愈伤组织,褐化率高,而ZT能明显诱导愈伤组织的形成,且褐化率较低。
(3)不同浓度的ZT和IAA对叶片再生率的影响结果表明,当ZT浓度为2.5 mg/L,IAA浓度为0.5 mg/L时,叶片再生率达到最高,为45.00%。
米良一号猕猴桃遗传转化体系的建立
米良一号猕猴桃遗传转化体系的建立田宏现;苑平;王曼玲;刘艺;李菁;夏新界;谭晓风【摘要】In order to establish the technology platform for function analysis of genes and genetic improvement of kiwifruit through biotechnology, the leaves and stems of Miliang-1 plants were used as explants. An efficient regeneration system was established for gene transformation by optimizing the culture medium. By using Agrobacterium-mediated method, transgenic plants containing the ACO (1-Aminocyclopropane-l-carboxylate oxidase) gene fragment were successfully obtained. The results show that the TD medium was the efficent medium for callus induction with a rate of 100%. After three times of subcultures, calli were moved into the differentiation medium, and the rate of differentiation was 90%. A total of 29 hygromycin resistant plants were obtained, and 14 of them were chosen randomly for PCR analysis. Ten of the analyzed plants were shown to be positive for the ACO gene insert (71.4 %).%为建立猕猴桃基因功能研究技术平台并通过生物技术改良猕猴桃,选用米良一号叶片和茎为外植体,通过优化培养基,建立了适合转化的高效再生系统,通过农杆菌介导将ACC(1-氨基环丙烷-1-羧酸)氧化酶基因成功转化米良一号,构建了根癌农杆菌介导米良一号遗传转化体系.结果表明,TD培养基为合适的愈伤诱导培养基,诱导率达100%,愈伤经3次继代培养转入分化培养基,分化率为90%.共获得29株潮霉素抗性植株,随机挑选14株经PCR检测,其中10株检测到ACC氧化酶基因目的条带,阳性植株占71.4%.【期刊名称】《中南林业科技大学学报》【年(卷),期】2012(032)008【总页数】5页(P81-85)【关键词】猕猴桃;根癌农杆菌;转化体系;组织培养【作者】田宏现;苑平;王曼玲;刘艺;李菁;夏新界;谭晓风【作者单位】中南林业科技大学,湖南长沙410004;吉首大学,湖南吉首416000;吉首大学,湖南吉首416000;中国科学院亚热带农业生态研究所,湖南长沙410125;吉首大学,湖南吉首416000;吉首大学,湖南吉首416000;中国科学院亚热带农业生态研究所,湖南长沙410125;中南林业科技大学,湖南长沙410004【正文语种】中文【中图分类】S663.4猕猴桃原产中国,是一种营养价值极高的水果,素有“果中之王”的美誉。
中华猕猴桃“红阳”花药和胚囊发育研究
中华猕猴桃“红阳”花药和胚囊发育研究杜燕姬;唐维;张景荣;高兰阳;刘永胜【摘要】采用石蜡切片技术对中华猕猴桃“红阳”(Actinidia chinensiscv.Hongyang)花药和胚囊的发育进行了观察研究.结果表明:中华猕猴桃“红阳”花药由4室构成,药室壁为4层结构;子房内有30~45个心室,每心室有11~45个胚珠,胚珠为倒生型,胚囊属于蓼型根据中华猕猴桃“红阳”胚囊形成的特点,可将猕猴桃胚囊发育过程分为5个时期,即孢原细胞形成期、大孢子母细胞形成期、功能大孢子形成期、胚囊有丝分裂期和胚囊成熟期.【期刊名称】《四川大学学报(自然科学版)》【年(卷),期】2016(053)003【总页数】6页(P677-682)【关键词】中华猕猴桃“红阳”;石蜡切片;花药发育;胚囊发育【作者】杜燕姬;唐维;张景荣;高兰阳;刘永胜【作者单位】四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室,水力学与山区河流开发保护国家重点实验室,成都 610064;四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室,水力学与山区河流开发保护国家重点实验室,成都 610064;四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室,水力学与山区河流开发保护国家重点实验室,成都 610064;四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室,水力学与山区河流开发保护国家重点实验室,成都610064;四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室,水力学与山区河流开发保护国家重点实验室,成都 610064【正文语种】中文【中图分类】Q944猕猴桃隶属于猕猴桃科(Actinidiaceae)猕猴桃属(Actinidia),原产于我国南部及西南地区[1],全世界猕猴桃属共有66种,中国有62种[2].猕猴桃富含丰富的维生素C、多种矿物质、17种氨基酸等人体所需要的营养成分,具有营养与保健双重功能,现今已成为一种重要的水果[3, 4].猕猴桃品种较多,果肉颜色变化各异,近年来红肉猕猴桃颇受消费者的青睐.其中“红阳”品种性状较为稳定,该品种系四川省自然资源科学研究院从自然实生群体后代中选育出的优良新品种[5].近年来,科研人员以红阳猕猴桃为材料,选出新品种且所选出后代果实产量高、性状稳定.2013年中华猕猴桃“红阳”基因组测序完成,为猕猴桃的品质改良和遗传育种奠定了基础[6].因此对中华猕猴桃“红阳”的深入研究,有助于猕猴桃新品种的选育.猕猴桃多属于雌雄异株,雄花和雌花均属于形态上的两性花,但雌花花粉粒不是功能型花粉[7].王明忠等[8]研究发现亦存在雌雄同株的植株.近年来很多研究人员对猕猴桃的性别鉴定、花粉发育过程及染色体倍性进行了研究[9-12],但对花药发育过程中的孢原细胞分裂、药室壁的形成以及药室间开裂散粉等方面的研究较少.此外,杨妙贤等[13]对中华猕猴桃性别分化进行研究,发现猕猴桃雌雄株在生物学性状和花发育上均存在差异,为早期猕猴桃性别分化提供了理论基础.安和祥等[14]对软枣猕猴桃胚胎发育过程中的细胞变化进行了描述,但没有明确划分各个时期.而“红阳”作为重要的猕猴桃品种,鲜有对其胚囊发育的研究报道[15],故本文借鉴前人对其他猕猴桃品种的研究成果,对红阳猕猴桃花药和胚囊发育过程进行了较为清晰的研究,并对胚囊发育过程进行分期,为研究中华猕猴桃“红阳”胚囊、花药发育提供理论基础.本研究所用中华猕猴桃“红阳”(Actinidia chinensis ‘Hongyang’)采自四川自然资源科学院双流实验基地,取样时间为2014年2月23日至4月27日,从2月23日每隔3d取样一次,材料用FAA固定液固定,并于4℃冰箱保存备用.参考李和平石蜡切片方法[16],并在其基础上根据材料大小调整实验条件,具体步骤如下:将不同大小的猕猴桃花样品从FAA固定液中取出,较幼嫩的材料用50%的乙醇溶液冲洗,再分别用70%、85%、95%、100%的乙醇脱水两次,脱水时间约2~4 h,二甲苯梯度透明后用常规石蜡包埋,制成厚度为8~10 μm的连续切片,经铁矾苏木精或固绿染色中性树胶干燥封片后,在光学显微镜下观察并拍照记录.中华猕猴桃“红阳”属于形态上的两性花,由萼片、花瓣、雌蕊和雄蕊组成,雄蕊由花丝和花药组成.随着花芽的发育,不久雄蕊原基逐渐形成,雄蕊原基顶端为花药发育区域,其4个角隅发育较其它部位快,因此初期的花药为四菱形(图1,a).花药表皮下方的四个角隅部位分化出孢原细胞(图1,b),孢原细胞的细胞核较周围其他细胞大,且细胞质较浓,随后孢原细胞进行平周分裂,形成初生壁细胞和初生造孢细胞(图1,c~d).初生壁细胞进行两次平周分裂形成中层细胞和绒毡层细胞,此时,花药形成3层壁结构(图1,e),从外到内依次为表皮、药室内壁、中层,绒毡层开始出现.初生造孢细胞经过两次有丝分裂形成小孢子母细胞且呈椭圆形(图1,f).随后,小孢子母细胞进行减数分裂,中层呈带状,其后,由于新细胞壁的形成,将其分割形成二分体(图1,g).二分体进行分裂形成四分体细胞 ,四分体被包藏在胼胝质壁内,呈现正四面体形,小孢子四分体的拼肌质溶解后释放出小孢子(图1,h).初生小孢子细胞中央有一核,同时, 除3 个萌发孔位置外,小孢子细胞壁继续加厚,但四个药室仍处于封闭状态(图1,i),小孢子细胞经过有丝分裂形成两个细胞,分别成为生殖细胞和营养细胞,因此猕猴桃花粉属2-细胞型,为三沟花粉,随着发育过程的推进,花药同一侧两药室间的药隔组织逐渐退化、消失,药室不断开裂释放出花粉(图1,j~l).中华猕猴桃“红阳”雌蕊由子房、花柱和柱头组成,雄蕊由花丝和花药构成(图2,a).当雌蕊原基形成后发育较快,其顶端凹陷形成花柱和柱头(图2,b),雌蕊子房膨大并明显地高于雄蕊群,子房内有30~45个心室且有多个胚珠,此时雄蕊发育极为缓慢, 最后完全被雌蕊覆盖(图2,c).而心皮与胎座缝接处的几个细胞进行局部平周分裂,产生胚珠原基.随着花的发育逐步形成胚珠,中轴胎座,在胚珠中靠近珠心表皮下形成一个孢原细胞,孢原细胞经过发育最终形成成熟胚囊,并且属于寥型,通过对胚囊发育进行观察,可将其划分为以下五个时期:孢原细胞形成期:在珠心顶端表皮下方细胞分化形成孢原细胞,孢原细胞体积比周围细胞大,且细胞核较大、细胞质较浓与珠心表皮下方其他细胞明显不同(图2,d).大孢子母细胞形成期:孢原细胞不断伸长长大而成为大孢子母细胞(图2,e).功能大孢子的形成:随后,大孢子母细胞经过两次减数分裂分别形成二分体及四分体,四分体细胞呈线性排列,随着胚囊的发育,其中3个大孢子细胞逐渐退化至消失,一个大孢子细胞体积增大形成功能大孢子(图2,f).胚囊有丝分裂期:功能大孢子经过三次有丝分裂形成8核型胚囊,首先,大孢子细胞经过第一次有丝分裂形成二核胚囊(图2,g),两个细胞分布在囊腔的两端,二核胚囊随即进入第二次有丝分裂形成四核胚囊(图2,h~i),继而四核胚囊继续发育,经过第三次有丝分裂形成8个细胞,以4个为一组位列于珠孔端和合点端,形成未成熟的8核胚囊期(图2,j).胚囊成熟期:根据对同一个胚囊进行连续切片进行的观察,发现胚囊发育过程中细胞排列发生了变化,在合点端和珠孔端分别有一个细胞向胚囊囊腔的中央移动形成2个极核(图2,k~m),珠孔端2个助细胞彼此紧靠呈茄型,与卵细胞组为卵器,卵器上方为2个极核,合点端为3个反足细胞呈品字形排列(图2,n),胚囊增至最大.中华猕猴桃“红阳”属于形态上的两性花,生理上的单性花.雌蕊原基形成后发育迅速, 但在此过程中,雄蕊原基的发育受到限制直至停止,花药瘦小呈T状并着生在花丝上,可形成2-细胞型花粉粒,但花粉粒干瘪不规则,因此花粉粒无活性.中华猕猴桃“红阳”的雌蕊发达,且子房膨大并明显地高于雄蕊群.绒毡层在花药发育过程中起着至关重要的作用,可将发育需要的营养物质和养分转运给花粉[17],绒毡层发育和适时的解体退化影响着花粉的正常发育发育.本研究观察到在花粉发育过程中一直伴随着绒毡层的发育、解体及药室壁的4层结构出现中层成带状、绒毡层空腔等变化.在花药发育过程中,绒毡层细胞发生变化最为活跃,小孢子母细胞减数分裂时,绒毡层细胞径向药室内变长,且细胞质浓厚,这一结果与杨妙贤等[13]所报道的中华猕猴桃“红阳”花药发育过程中绒毡层的变化相一致.中华猕猴桃“红阳”形成的花粉粒干瘪且形状不规则,可能与绒毡层的解体较迟,不能及时向发育中的花粉提供营养物质有关.本研究表明猕猴桃属于蓼型胚囊,胚珠为倒生型,为了进一步对胚囊发育进行研究,通常会依据细胞的结构特点及分裂活动将发育过程划分为不同阶段,刘向东等[18]将水稻胚囊发育过程分为8个阶段.但由于功能大孢子形成后,所经历的主要细胞分裂为3次有丝分裂并形成8个细胞,因此把其归结为胚囊有丝分裂期,此时胚囊为8核期,也称为8核胚囊,本文依据猕猴桃胚囊发育过程中的5个主要特点,将其划分为5个阶段,分别为:孢原细胞形成期、大孢子母细胞形成期、功能大孢子形成期、胚囊有丝分裂期、成熟胚囊期.由于功能大孢子形成单核胚囊并没有发生细胞分裂活动,因此,本文并没有将其单独划分为一个时期,在早期胚囊的8核时期,各有4个细胞分布于合点端和珠孔端,在随后的发育过程中,极核位置发生了很大的变化,两端各有一个细胞向囊腔的中央移动,最后移动到中央位置,该位置的变化为中央大细胞的形成打下了基础.此时,合点端的3个细胞形态也发生了变化,其中一个细胞的细胞核变大,形状变为卵圆形,称为卵细胞,由于卵细胞的变大,导致两侧的助细胞变为茄型,此时反足细胞也在发生有丝分裂形成反足细胞器,随着发育的进程的推进,助细胞消失,反足细胞很快解体.1997年“红阳”猕猴桃通过四川省农作品种审定以来,因其具有极高的营养价值和特殊的经济性状成为学界研究的热点[19,20].近年来,我国科研工作者以“红阳”猕猴桃为材料,通过实生选种、芽变选种、杂交育种等技术,选育出了很多新品种(系),如四川省自然资源研究院等单位以红阳猕猴桃为母本,分别选用美味猕猴桃、SF1998M、SF0612为父本,通过杂交育种选育出“红华”[21]、“红什1号”[22]、‘SF-F0807’[5]等新品种.陕西省宝鸡市陈仓区桑果工作站,湖南省农业科学院园艺研究所和长沙楚源果业有限公司分别从“红阳”猕猴桃的实生苗中选出“晚红”[23]、“源红”[24].四川农业大学从“红阳”猕猴桃中,通过芽变选种等到‘86-3’[25,26].以往对“红阳”猕猴桃的育种利用多是采用传统育种途径和方法,而关于“红阳”猕猴桃分子育种的研究鲜有报道.尽管红阳猕猴桃目前已逐步进入东南亚及欧洲等国际市场,且受到了消费者的好评,但它的产量和质量都还不能满足市场的迫切需求.据主产区四川省苍溪县报道,因红阳猕猴桃在生产栽培中受到病虫害,仅约10%的红阳猕猴桃果品能达到出口标准[27].红阳猕猴桃在生产栽培Z中易遭受病虫危害,以溃疡病害最为突出,而在传统生产中使用的农药会给猕猴桃商品化、国际化的生产带来负面影响.猕猴桃是雌雄异株的果树,通过种子实生繁育周期长且性状不稳定,嫁接繁殖速度偏慢,因此育种需要引进新的手段和方法.植物基因工程技术为猕猴桃的抗性育种提供了新途径.目前,在猕猴桃上应用的目的基因多与猕猴桃果实成熟及衰老过程有关.如ACC氧化酶基因(ACO)、ACC合成酶基因(ACS)、猕猴桃素(Actinidin) 以及脂氧合酶基因(LOX)等.此外,β-1,3-内切葡聚糖酶、OSHl等基因导入猕猴桃并获得转基因植株[28,29].这些研究结果为红阳猕猴桃再生体系的建立以及遗传转化奠定了基础.因此采用基因工程技术,向红阳猕猴桃中导入抗病、抗虫等目的基因,可能实现红阳猕猴桃的基因工程育种,解决其生产中的病虫害问题.此外,猕猴桃属功能性雌雄异株果树,种植时必须配置雄株,不同的雄株授粉对红阳猕猴桃果品的质量和产量有较大的影响[30].因此,深入研究猕猴桃雄花不育的机理,利用基因工程技术,恢复雄花的育性,选育出两性花的品种,生产上不需配置授粉株,又能保持红阳猕猴桃原有的优良性状,对提高红阳猕猴桃的产量和保持果品质量都具有重要意义.。
‘东红’猕猴桃高效再生体系的建立
‘东红’猕猴桃高效再生体系的建立吕海燕;李大卫;钟彩虹【摘要】为有力推动猕猴桃产业化种苗生产及推广,快速高效地繁育猕猴桃新种质资源,同时为猕猴桃多倍体育种、转基因育种等新兴育种技术创造新种质资源奠定基础,该研究以'东红'猕猴桃叶片、叶柄为外植体,探讨了不同植物生长调节剂种类及质量浓度组合对不定芽诱导过程中不定芽形成的影响,并研究了不同植物生长调节剂对'东红'组培苗不定根诱导的影响.结果表明:'东红'再生最佳外植体为叶柄,叶柄不定芽再生最佳培养基为MS+0.5μg·mL-16-BA+0.2μg·mL-1 NAA,不定芽平均再生率为91.2%;不定芽经过壮苗培养(MS+0.2μg·mL-16-BA+0.05μg·mL-1 NAA),取2~3 cm高幼苗进行生根诱导,不定根再生率为93%,平均根数为6条;生根后,种苗移栽成活率在80%以上.初步建立了'东红'叶柄高效再生体系,为猕猴桃快速的产业化种苗生产及推广提供了有力保证,也为后期猕猴桃育种研究提供理论依据.【期刊名称】《广西植物》【年(卷),期】2019(039)004【总页数】8页(P464-471)【关键词】猕猴桃;'东红';再生体系;叶柄;移栽【作者】吕海燕;李大卫;钟彩虹【作者单位】中国科学院植物种质创新与特色农业重点实验室, 中国科学院武汉植物园,武汉 430074;中国科学院种子创新研究院, 武汉 430074;中国科学院植物种质创新与特色农业重点实验室, 中国科学院武汉植物园,武汉 430074;中国科学院种子创新研究院, 武汉 430074;中国科学院植物种质创新与特色农业重点实验室, 中国科学院武汉植物园,武汉 430074;中国科学院种子创新研究院, 武汉 430074【正文语种】中文【中图分类】Q943.1;Q945猕猴桃资源收集、品种选育始于20世纪初,经过一百多年的生产、推广、发展已在全球形成近24.5万hm2的种植规模,年产值已在百亿以上。
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猕猴桃 种质资源 , 但 因其具有果实小 、 外观差等不足 , 因此有 待 于改 良并提高其果实品质以适应市场需求。利用 常规育种
手段进行猕猴桃 的品种改 良所需 的周期长 、 工作量 大且 效率 低, 难 以满足生产发展 的需要 , 而基 因工程技术则为猕猴桃 的
( 1 . 河南农业大学 , 河南郑州 4 5 0 0 0 2 ; 2 . 濮阳职业技术 学院, 河南濮 阳 4 5 7 0 0 0 )
摘要 : 以中华猕猴 桃伏 牛 9 5— 2的组培苗叶片为外植体 , 研究 不 同浓度 生长调节剂对 其愈伤组织 、 不定芽 诱导和
生根 的影响及其对卡那霉素的敏感性 , 从而建立高效稳定 的中华猕猴桃伏牛 9 5 — 2的受体 系统 。结果表明 , 中华猕猴 桃伏牛 9 5— 2的最佳愈伤组织及不定芽诱导培养基为 MS+1 . 0 m g / L Z T+ 0 . 3 mg / L N A A, 在此培养基条件下 , 其不定 芽分化率 、 每个 叶盘不定芽 的分化数均较 高 , 分别为 8 7 . 5 0 %、 4 . 2个 ; 最佳 生根 培养基为 1 / 2 M S+ 2 . 0 m g / L N A A, 生根
种 质改 良开辟 了一条新途径。
华猕 猴桃 的组织培养 已有 相关报 道 , 但 由于其再生受 基 因型的限制 , 因此其再生体系没有普遍性 , 而且不 同品种间的
再生效率也有很明显差异。本试验 以中华猕 猴桃伏牛 9 5—2
品系的组 培 苗 叶片 为 试 验 材 料 , 建 立 了 中华 猕 猴 桃 伏 牛 9 5— 2的叶片基 因转化 的受体 系统 , 为进行农 杆菌介导 的 中 华猕猴桃 的遗传转化奠定 了基础 。
中图分类号 : s 6 6 3 . 4 0 3 文献标 志码 : A 文章编号 : 1 0 0 2—1 3 0 2 ( 2 0 1 3 ) 0 6— 0 0 4 6— 0 3
猕猴桃属 猕 猴桃科 ( A c t i n i d i a c e a e ) 猕 猴桃属 植 物 , 由于
它们具有维生素 C含 量高 、 风味 独特 、 营养 丰富 等优点 而备
参 考 文献 :
[ 1 ] A l b e d s s o n P A, A n d e ss r o n B, L a r s s o n C, e t 1. P a h a s e p a r t i t i o n a
化工作相对简化。成 功的基 因转化系统首先依赖 良好的植物 受体 系统 的建立 , 即要求用于转化的外植体能够高效 、 稳定地
再生无性 系, 并能接受 外源 D N A的整合 , 同时 用于筛选 的转 化细胞或植株应该对抗生素具有一定的敏感性 。 目前有关 中
受关注 。中华猕猴桃 ( A c t i n i d i a ・ c h i n e n s i s ) 是猕猴 桃 的主要栽
园艺植 物 遗 传 育 种 教 学 和研 究 工 作 。E—m a i l : x i a o l i 8 2 0 2 1 8 @
1 6 3 . c o n。 r
试验材料 中华猕猴桃伏牛 9 5— 2 ( A .c h i n e n s i s F u n i u 9 5一
【 4 ] G a l l a g h e r S R, L e o n a r d R T .E f e c t o f v a n a d a t e , mo l y b d a t e a n d a z i d e
1 材 料 与 方 法 1 . 1 试 验 材 料
自1 9 8 5年 H o r s c h等发 明叶盘法 以来 , 基 因工程 的转
收稿 日 期: 2 0 1 2— 1 2 — 0 5 作者 简介 : 尚霄丽 ( 1 9 8 2 一) , 女, 河南清丰人 , 博士研究生 , 讲师 , 从事
一
4 6一
江苏农业科学 2 0 1 3年第 4 1卷第 6期
尚霄丽, 李
涵, 张建鹏 , 等.中华猕猴桃遗传转化受体系统的建立 [ J ] .江苏农业科学 , 2 0 1 3 , 4 1 ( 6 ) : 4 6— 4 8
中华猕 猴桃遗传转化受体 系统 的建立
尚 霄丽 , 李 涵 ,张建鹏 ,吴春 昊
率达 1 0 0 . 0 0 % 。当卡那霉素浓度大于 1 0 m L时 , 能够 明显抑制愈 伤组织 的生长 , 且随着浓度 的增加 , 愈 伤组织死亡 率逐渐增大 ; 当卡那霉 索浓度 为 2 0 mg / L时 , 愈伤组织及不定芽的分化率均为 0 , 因此 2 0 mg / L卡那霉素浓度为 中华猕 猴桃伏牛 9 5—2叶片遗传转 化的最佳筛选浓度 。 关键词 : 中华猕猴桃 ; 受体系统 ; 卡那霉素
o n me mb r a n e—a s s o c i a t e d ATP a s e a n d s o l u b l e p h o s p h a t a s e a c t i v i i t e s
定 提取质膜微囊的封闭性和方 向性 。质膜微囊封闭性的计算 方法为 : 加入去垢剂测 得 的 H 一A T P a s e酶 活减去未加 去垢 剂 时的酶活 , 再 除以加入去垢剂测得的 H 一 A T P a s e酶活 , 该 比值越大 , 表明膜微囊封闭性越高 , 正 向型质膜微囊所 占比例 越高 。本研究中使 用 T i r t o nБайду номын сангаас x一 1 0 0处理质膜 , 结果 发现该 比 值高达 8 4 . 3 7 %, 表明通过 两相法提取 的水 稻叶 片细胞 质膜 微囊封 闭性好 , 主要为正 向型原位质膜微囊 。