流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群在儿科的临床应用
淋巴细胞亚群检测在儿科疾病诊疗中的应用进展
应答 。 使大量病原体复制与存活 ， 导致了机体慢性感染状
态 的持续 。
Ｔ ｈ １ 分 泌 干扰 素 、 自细胞 介素 ２ （ Ｉ Ｌ ． ２ ） ； Ｔ ｈ ２ 分泌 Ｉ Ｌ 广 ４ 、 ５ 、
文章编 号 １ ０ ０ ４ － ０ １ ８ ８ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ６ ０ － ６ ８ ２ ０３ － ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ￣ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ４ － ０ １ ８ ８ ． ２ ０ １ ５ ． ０ ６ ． ０ ４ ２
淋 巴细 胞是免 疫系统 中起 核心作用 的主要细 胞 ， 在人
强 免疫应 答 ， 促使 其他 Ｔ细胞 分 化成 熟 。Ｃ Ｄ ４ 降低 ， 反 映 机 体免 疫 功能 低下 ； Ｃ Ｄ ４ ｂ ￣高 ，反 映机体 免疫 功 能亢 进 。
童较常见。人体 Ｂ细胞上具有 Ｅ Ｂ Ｖ受体 ， 故 Ｂ细胞先受
累。 受 累的 Ｂ细胞增 殖激 发 Ｔ细 胞及 Ｎ Ｋ细胞 ， 随之发 生 强 烈 的免疫 反 应 。 使患儿 出现高 热 、 咽 颊炎 及淋 巴细胞 增 生 等一 系列 症状［ ８ １ 。 在病 程进 展 中 ， 由于免 疫功 能不 足 ， 可
导 致 机会 性感 染 ． 甚 至有 发 生肿 瘤 的危 险［ ９ １ 。 陆巧 英 等『 ’ ０ １
Ｔ ｃ 能够特异性杀伤靶细胞 ， 具有抗病毒、 抗肿瘤等调节作
用： Ｔ ｓ 有 重要 的免 疫 负调 节 功 能 ； Ｔ ｒ ｅ ｇ 在 抑 制 免疫 应 答 、 维 持机 体免疫 耐受及 肿瘤 免疫 中起重要 作用 翻 。 儿 童淋 巴细胞免 疫表 型的表 达与胸 腺发 育密切 相关 ，
流式细胞术的基础和临床应用
流式细胞术的基础和临床应用流式细胞术是一种在单个细胞水平上进行多参数快速测定的技术，它利用流体力学原理和荧光化学技术，对细胞进行快速、准确地分析和分类。
流式细胞术具有高速度、高精度和高分辨率的特点，因此在生物学、医学和生物技术等领域得到了广泛应用。
流式细胞术的基础包括细胞物理特性、荧光化学特性以及现代光学、计算机和电子技术的应用。
细胞物理特性是指细胞的大小、形状、粒度等物理性质，这些性质可以通过流式细胞术进行测量。
荧光化学特性是指利用荧光物质标记抗体或核酸等分子，对细胞进行标记和染色，然后通过流式细胞术进行检测。
现代光学技术、计算机技术和电子技术的应用则使得流式细胞术能够实现多参数、高精度和高分辨率的检测。
在临床应用方面，流式细胞术被广泛应用于淋巴细胞亚群分析、功能性T淋巴细胞亚群分析、肿瘤免疫分析等方面。
淋巴细胞亚群分析是流式细胞术最常用的检测项目之一，通过对淋巴细胞亚群的检测和分析，可以了解机体的免疫状态和疾病发病机制，对于免疫相关性疾病的诊断和治疗具有重要意义。
功能性T淋巴细胞亚群分析则可以进一步了解T淋巴细胞的免疫功能和分化特点，对于肿瘤、感染性疾病和自身免疫性疾病等的治疗和预后评估具有指导作用。
肿瘤免疫分析则通过流式细胞术检测肿瘤细胞表面的抗原和抗体，了解肿瘤细胞的免疫逃逸机制和免疫应答情况，为肿瘤的免疫治疗提供依据。
此外，流式细胞术还被应用于干细胞研究、基因表达分析、药物筛选和毒理学研究等领域。
例如，通过对干细胞的表面标志物进行检测和分析，可以了解干细胞的特性和分化能力；通过对基因表达谱的检测和分析，可以了解基因的表达水平和调控机制，为疾病治疗和药物研发提供依据。
总之，流式细胞术作为一种强大的细胞分析工具，其基础包括细胞物理特性、荧光化学特性以及现代光学、计算机和电子技术的应用。
在临床应用方面，流式细胞术已经成为医学研究和诊断中不可或缺的工具之一，其应用范围涵盖了淋巴细胞亚群分析、功能性T淋巴细胞亚群分析、肿瘤免疫分析等多个方面。
流式细胞术在临床与科研中的应用
Ö÷Û¹ ÐÔ Ç¿ £¬ ¸É ÈÅ Òò ËØ ¶à £¬ ¼Ù Ñô ÐÔ ¸ß Æä Ëü Àà ÐÍ µÄ ÈÜ Ñª ÐÔ ¶Æ Ѫ £¬ Éõ ÖÁ ¼±ÔÐ °×ªÑ ²¡ »¼ Õß Ò² Ϊ Ñô ÐÔ ÌØ Òì ÐÔ ¸ß , µ« Ö÷Û¹ ÐÔ Ç¿ , Áé Ãô ¶È µÍ
淋巴细胞亚群
T淋巴细胞(CD3+) CD3+CD4+
CD3+CD4+CD29+ CD3+CD4+CD29CD3+CD8+ CD3+CD8+CD28CD3+CD4+CD29CD3+CD4+CD8+ CD3+CD4-CD8CD4+/CD8+比值 CD45RA+CD45RO-
CD45RA-CD45RO+
淋巴细胞亚群与疾病
疾病
自身免疫性疾病 系统性红斑狼疮 类风湿性关节炎 自身免疫性溶血性贫血 重症肌无力
免疫缺陷病 爱滋病
病毒感染 传染性单核细胞增多症
慢性活动性肝炎 活动性肝硬化
肿瘤 消化道癌, 肝癌, 肺癌
再生障碍性贫血 粒细胞减少症
CD3
CD4
CD8
CD4/CD8
NK
监测细胞免疫状态
1.CD4+、CD8+T细胞减少：见于r免疫球蛋白缺乏症、胸腺 发育不良、严重联合免疫缺陷病。
传递； （4）细胞分化过程中的调控； （5）细胞亚群的功能。
临床与科研常见应用
1.检测淋巴细胞亚群，监测细胞免疫状态 2.白血病/淋巴瘤免疫分型 3.HLA组织配型及HLA与某些疾病的关系 4.干祖细胞的定量及成分分析. 5.其它:血小板PAIg：粘附分子;TCR多态性检测; 肿瘤癌基因及 抑癌基因蛋白产物的检测;细胞内酶; 耐药蛋 白的分析等等。
流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群在儿科的临床
流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群在儿科的临床背景流式细胞术检测T、B、NK淋巴细胞亚群已较为广泛的应用于儿科临床许多疾病涉及儿童相应免疫功能异常临床工作中更有效的理解和应用流式细胞术以评估儿童的免疫状况，指导疾病的诊断、治疗还缺乏系统的学习材料尤其是临床一线的儿科医务工作者对流式细胞术的临床应用更有待进一步加强认识和学习。
检测对象原则：免疫功能受损者均应常规评估淋巴细胞亚群免疫功能包括：免疫防御功能免疫自稳和耐受功能免疫监视功能免疫防御功能受损易发生感染反复感染严重感染多种病原与特殊病原感染常规治疗效果不佳的感染除了宿主免疫防御受损容易造成上述少见感染状况之外，感染本身也可造成继发性免疫防御受损，因此免疫评估应注意原发和继发两方面的问题。
免疫自稳和耐受功能受损过敏性疾病：并非所有这类患者都需要进行淋巴细胞亚群的检测。
对于一些严重的过敏患者应考虑淋巴细胞亚群的检测。
①婴幼儿时期全身严重湿疹样表现。
②嗜酸性粒细胞显著增多③血清IgE水平明显增高（IgE>1000IU/L）④伴有反复、严重感染的患者自身免疫和自身炎症性疾病①存在难以控制的自身免疫反应情况及出现明显的自身免疫性淋巴增殖情况②合并反复感染的患者③存在自身炎症反应④长期免疫抑制药物、生物制剂使用前后免疫监视功能受损主要引起肿瘤血液系统肿瘤：儿童时期最为多见的是血液系统肿瘤其他肿瘤及实体瘤：其他系统肿瘤患者也应酌情进行淋巴细胞亚群的检测，既可能存在原发性淋巴细胞亚群的异常，也可能出现继发性改变，尤其是进行各种化疗时，淋巴细胞亚群大多会受到影响其他特殊情况血常规中淋巴细胞明显异常家族成员中有免疫缺陷病史长期使用免疫抑制剂者基本数据判断应进行绝对计数和相对数的判别相对数的三个基本公式[公式a] CD3+%+CD19+%+CD16/56+%=100%±5%[公式b] CD4+%+CD8+%=CD3%[公式c] CD4+/CD8+比值>1绝对计数的判断绝对数标准不同仪器和年龄段及人群存在差别。
外周血淋巴细胞亚群的临床应用_理论说明
外周血淋巴细胞亚群的临床应用理论说明1. 引言1.1 概述外周血淋巴细胞亚群是指在外周血液中存在的不同类型的淋巴细胞，它们在免疫系统中起着重要的作用。
随着医学技术的进步，越来越多的研究将外周血淋巴细胞亚群与各种疾病之间的关系联系起来。
通过对外周血淋巴细胞亚群进行分析和检测，可以为临床诊断、治疗和预后评估提供有价值的信息。
1.2 文章结构本文将会围绕外周血淋巴细胞亚群的临床应用展开介绍和探讨。
首先，将详细介绍外周血淋巴细胞亚群的定义和分类方法。
其次，将重点讨论外周血淋巴细胞亚群在炎症性疾病中的应用以及在肿瘤诊断和治疗中的应用。
同时，本文还将从理论角度对免疫学原理与外周血淋巴细胞亚群之间的关系进行说明，并介绍流式细胞术在外周血淋巴细胞亚群分析中的原理与方法。
最后，将对外周血淋巴细胞亚群变化与临床意义展开理论探讨。
1.3 目的本文的目的是系统性地总结和阐述外周血淋巴细胞亚群对临床应用的重要性。
通过对相关理论知识的说明和实际应用案例的引用，旨在增进读者对该领域的理解和认识，并为临床医生、研究人员以及其他感兴趣的读者提供有关外周血淋巴细胞亚群的全面知识以及其在各种疾病中的应用前景展望。
2. 外周血淋巴细胞亚群的临床应用2.1 外周血淋巴细胞亚群的定义与分类外周血淋巴细胞是体内主要的免疫细胞之一，包括T细胞、B细胞和自然杀伤(NK)细胞。
这些淋巴细胞可以进一步分为不同的亚群。
T细胞是外周血淋巴细胞中最常见的类型，其亚群有CD4+辅助T细胞、CD8+杀伤性T细胞和调节性T 细胞。
B 细胞在体内生成抗体以对抗感染。
而NK 细胞则能直接识别并杀伤癌细胞和病原体感染的靶标。
根据特定表面标记物的表达，如CD4、CD8、CD19和CD56等，可以将外周血淋巴细胞进一步分为不同的亚群。
每个亚群具有不同功能，并在机体免疫应答中发挥重要作用。
2.2 外周血淋巴细胞亚群在炎症性疾病中的应用外周血淋巴细胞亚群在炎症性疾病的诊断和治疗中发挥着重要作用。
流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群在儿科的临床应用专家共识(2019完整版)
流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群在儿科的临床应用专家共识（2019完整版）流式细胞术（flow cytometry,FCM）是一种对单细胞或生物颗粒进行多参数、定量分析的技术，具有速度快、精度高、准确性好等优点。
目前FCM广泛应用于临床医学，在疾病的预防、诊断、治疗及预后判断中具有重要作用。
但是淋巴细胞亚群在不同年龄阶段有不同的正常参考范围[1]，并且其结果受多种因素的影响，造成临床判读相对困难。
为科学合理应用FCM协助诊治儿科疾病，"流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群在儿科的临床应用共识"在多个学术组织的协作下于2016年正式发表[2]。
该共识提高了医务工作者对FCM在儿科临床应用的认识，促进了临床诊疗水平的提高。
医学技术飞速发展，FCM的应用也有了一定的进展。
为适应医学发展和临床应用的需要，多个学术组织的专家讨论撰写了"流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群在儿科的临床应用专家共识（2019版）"。
一、淋巴细胞亚群分析常规检测项目和报告内容淋巴细胞亚群分析是临床开展最多的FCM检测项目，是指借助各种荧光染料标记的单克隆抗体测定各类淋巴细胞胞膜或胞内独特的分化抗原（cluster of differentiation,CD），对淋巴细胞的各个亚群进行分析。
原国家卫生部发布的FCM检测外周血淋巴细胞亚群指南（WS/T 360－2011）对于规范FCM在外周血淋巴细胞亚群分析中的应用具有重要指导意义。
检测过程需注意标本采集和运输、免疫荧光染色、检测和分析、结果报告和审核等方面。
常规检测的淋巴细胞亚群包括T细胞（CD3+）、B细胞（CD3－CD19+）和NK细胞（CD3－CD16+CD56+）；T细胞又分为2个亚群：辅助性T细胞（CD3+CD4+）和杀伤性T细胞（CD3+CD8+）。
淋巴细胞亚群分析报告应提供各个亚群细胞的相对计数（百分比）和绝对计数。
FCM可以直接测得各淋巴细胞亚群的相对计数。
淋巴细胞亚群检测在儿科的应用
目前以人群为基础的新生儿筛查(newborn screening, NBS)主要应用于遗传性疾病,但尚未开展有关PID的 NBS。SCID是一种严重的联合免疫缺陷,患儿在出生后 处于无症状期的时间很短,如果不进行有效的免疫重建,
往往在婴儿期死亡。免疫重建的时间与预后的关系密 切,如果在出生3个月内进行造血干细胞移植存活率接 近95%,如果在出生3个月后进行移植则存活率降至76%。 这是将SCID纳入NBS的重要原因。SCID的免疫表型 特点主要为严重的T淋巴细胞减少，流式细胞仪分析T 细胞亚群(包括CD3+、CD4+和CD8+)、B细胞(CD19+) 和NK细胞(CD16+/CD56+)比例是主要的实验室检查, 可对大多数患儿作出诊断。
总之，测定外周血CD3、CD4和CD8细胞亚群的水平 可以正确判断机体的细胞免疫功能，为临床提供用药指导 和判断预后的可靠指标。
正常人外周血白细胞CD45-SSC及T亚群散点图
CD3+CD4+ （Th/Ti细胞）
CD3+CD8+ （Ts/Tc细胞）
患儿男, 5个半月,以“发热、腹泻11天,皮疹7天”为主诉入院。入院后诊断为: (1)腹泻病; (2)发热待查:结缔组织病?(3)营养不良性贫血。入院后给予抗感染、补 液,调整肠道微生态,营养支持治疗,腹泻治愈,仍发热,皮疹渐增多,蔓延至上腹部、 胸前,皮疹呈棕色或棕黑色。入院第12天对患儿左大腿内侧一皮疹下结节进行活 检见:表皮角化,真皮脂肪坏死,炎性细胞浸润,考虑脂膜炎。但疗效不显。体液免疫 检查正常; T细胞亚群: CD3+ 2.41%(56%~84% ), CD4+ 0.53% (27%~51% ), CD8+ 0.50% (15%~44% ), CD4+/CD8+ 1.06。追问病史:此患儿生后接种卡介 苗部位常有渗液,不久结痂,结痂后不久又出现渗液,如此反复。遂对既往骨髓片及 组织片进行抗酸染色,均见大量抗酸杆菌。确诊为原发性T细胞免疫缺陷病合并卡
流式细胞仪检测健康儿童T淋巴细胞亚群及其绝对计数的研究
流式细胞仪检测健康儿童T淋巴细胞亚群及其绝对计数的研究【摘要】目的建立健康儿童T淋巴细胞亚群及其绝对计数的正常参考值。
方法采用流式细胞术，通过四色荧光标记，在绝对计数管（TruCount tube）内进行T淋巴细胞亚群的检测及绝对计数分析。
结果健康儿童T淋巴细胞（CD3+细胞群体）占淋巴群体的百分率为(65.16±7.05)%，绝对计数为(2029.75±718.85)个/μl全血，辅助性T淋巴细胞（CD3+CD4+细胞群体）占淋巴群体的百分率为(38.61±6.15)%，绝对计数为(1226.00±482.44)个/μl全血，抑制性T淋巴细胞（CD3+CD8+细胞群体）占淋巴群体的百分率为(23.38±7.31)%，绝对计数为(639.30±270.77)个/μl全血，CD4/CD8比值为1.86±0.80。
结论利用流式细胞仪进行外周血T淋巴细胞亚群检测及绝对计数分析，快速、客观、准确，可作为临床常规检验项目，辅助诊疗。
【关键词】流式细胞术；T淋巴细胞亚群；细胞绝对计数【Abstract】 Objective To establish the normal range of T lymphocyte subset and absolute count in child. Methods Flow cytometric analysis with four color fluorescence staining in Trucount tube.Results In child， T lymphocyte (CD3+) percentage and absolute count is 65.16±7.05 and 2029.75±718.85 r espectively， CD3+CD4+ subset is38.61±6.15 and 1226.00±482.44 respectively，CD3+CD8+ subset is23.38±7.31 and 639.30±270.77 respectively， CD4/CD8 ratio is1.86±0.80. Conclusion Flow cytemetry determined detection of T lymphocyte subset and absolute count seems to be rapid objective and precise method， and as clinical test item， it aids to diagnosis and therapy.【Key words】 flow cytometry；T lymphocyte subset；absolute countT淋巴细胞亚群与机体的免疫功能相关，当免疫功能紊乱时，T淋巴细胞亚群在相对百分含量及绝对计数的数值检测上会出现异常。
流式检测淋巴细胞亚群在临床中的应用
平均值
CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/8+ CD56+ CD127+ CD19+
化疗(n=48) 67.60 27.40 28.20 0.82 13.20 7.40 5.80
放疗(n=81) 65.30 22.30 34.10 0.73 5.90 8.10 6.90
手术(n=82) 65.20 34.00 29.00 1.20 9.10 6.30 7.70
p值
0.311 0.007 0.035 0.032 0.045 0.031 0.165
* t检验：P<0.05 显著性差异
手术、化疗和放疗对肺癌患者淋巴细胞亚群的影响
平均值
CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/8+ CD56+ CD127+ CD19+
手术 (n=152) 67.57 34.39 31.09 1.25 16.08 6.42 8.64
化疗(n=244) 67.67 33.78 32.07 1.30 16.27 7.48 7.93
放疗(n=164) 65.64 28.59 32.99 1.13 17.98 5.85 6.58
p值
0.093 0.001 0.021 0.011 0.045 0.029 0.430
* t检验：P<0.05 显著性差异
2、流式专业讲座：流式相关免疫学、流式相关血 液学、流式相关其他实验。
3、临床流式疑难病例解答：临床在职流式专家为 您解决临床检测中遇到的疑难病例问题，帮您更好 的做出诊断。
4、交流平台：丰富的交流平台可以让更多的流式 从业者在此交流心得，互相帮助，获得更多有用的 信息。
淋巴细胞亚群检测及临床应用
一、概述
二、淋巴细胞亚群检测
1、检测原理
• 把全血加入到试剂中时，荧光标记的抗体会和白细胞表面抗原特异性结合，在采集 时，细胞通过激光束使激光散射。被染色的细胞就会发出荧光。这些被仪器检测到 的散射光和荧光信号提供了关于细胞大小、内部复杂度和相关荧光强度等信息。 BD Multitest检测试剂采用了荧光触发技术，能够直接对淋巴细胞群进行荧光设门， 以减少门中的未裂解细胞或有核红细胞带来的污染。
射光照射。于室温下(20-25℃)进行此程序操作 • 盖上管盖并轻轻混匀振荡进行混匀。室温(20-25℃)环境下避光孵育15min上
机检测。
二、淋巴细胞亚群检测
3、操作步骤-品牌B（六色淋巴细胞亚群试剂）
• 取一支 Trucounttube。用反向加样法加入50μl充分混匀的抗凝全血。注意血 不要碰到试管底部的微球( Beads)。
液时，将按钮按至第二个刻度点。释放按钮时，过量样本将被吸入吸头中。 将按钮按至第一个刻度点排出精确体积的样本，将过量样本留在吸头中。
二、淋巴细胞亚群检测
3、操作步骤-品牌B（四色淋巴细胞亚群试剂）
• 盖上管盖并轻轻混匀振荡进行混匀。在室温(20~25℃)环境下避光孵育 • 向各管中添加450μl 1× Multitest溶血素，注意：小心保护样本管，免受直
不能使用。室温保存的抗凝全血，可稳定48h;染色固定后的样本在2~8℃条 件下可稳定24h。 • 患者准备：无须特殊准备，检查对象生活饮食处于日常状态，空腹为宜， 静脉采血。
二、淋巴细胞亚群检测
3、操作步骤-品牌A
流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南
488nm的 激 发 光 源 激 发 ,最 大 发 射 波 长 分 别 为
525nm、 575nm、 670nm、
675nm和
613nm。
别 藻 青 蛋 白 (APC)的 激 发 光 源 为 630nm,最 大 发 射 波 长 为 660nm。
3.2
溶血素 使 用 与 仪 器 相 匹 配 的溶 血 素 (内 含 固定 液 ),并 严 格 按 照 使 用 说 明 和 注 意 事 项 进 行 操 作 。 如 果 使 用
FCSC Count StandardtM(Flow C~vt° metry Standards Corporaton)和
TruCountTM(Becton Ekkns° ω 等 。
4
标 本 采集 和 处理 生物 安 全 血 液 和体 液 标 本 中可 能存 在致 病 性 甚 至致 死 性 的活 体 病 原 微 生 物 ,所 有 标 本 都 应 当作 潜 在 传 染 源
3.1.2
单抗对 细胞 的反应 性
CD45表 达 于 所 有 白细 胞 ;CD3表 达 于 T淋 巴细 胞 ;CD4表 达 于 T辅 助 /诱 导 淋 巴细 胞 (CD4+T细 胞 )和 单 核 细 胞 ;CD8表 达 于 细 胞 毒 T细 胞 (CD8・ T)和 NK细 胞 ;CD19表 达 于 B淋 巴 细 胞 ;CD16表 达 于 NK细 胞 、 核 巨 噬 细 胞 、 细 胞 和 树 突 状 细 胞 等 ;CD56表 达 于 NK细 胞 和 细 胞 毒 T细 胞 。 单 粒
2
术语和定 义 下 列 术 语 和定 义适 用 于 本 文 件 。
2.1
分 化 抗 原 cIuster of differentiation,CD 活 成 不 同谱 系 细 胞 在 分 化 、 熟 、 化 过 程 中 ,出 现 或 消 失 的 细 胞 表 面 标 志 。 细 胞 表 面 标 志 通 常 用 单 克 隆抗 体 来 识 别 。每 个 抗 体 都 有 指 定 的 CD编 号 ,能 被 特 定 抗 体 识 别 的特 定 抗 原 通 常 具 有 相 同 的 编 号 ,例 ” “ ” “ 如 ,被 CD1抗 体 识 别 的抗 原 称 为 tlDl抗 原 。
外周血淋巴细胞免疫亚群计数概念及应用
外周血淋巴细胞免疫亚裙计数概念及应用一、概述外周血淋巴细胞免疫亚裙计数是一种用于评估机体免疫功能的检测技术，通过对外周血中不同类型淋巴细胞数量的测定，可以帮助医生判断机体的免疫状态，诊断免疫系统相关疾病以及监测免疫治疗的疗效。
本文将就外周血淋巴细胞免疫亚裙计数的概念、检测方法以及临床应用进行介绍。
二、外周血淋巴细胞免疫亚裙计数的概念外周血淋巴细胞免疫亚裙计数是通过流式细胞术或细胞分析仪等技术，对外周血中的淋巴细胞进行亚裙分型和计数。
淋巴细胞主要包括T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞，其中T淋巴细胞可以进一步分为CD4+T细胞和CD8+T细胞，而B淋巴细胞可以进一步分为成熟B细胞和记忆B细胞。
三、外周血淋巴细胞免疫亚裙计数的检测方法1. 样本采集：外周血样本采集是进行外周血淋巴细胞免疫亚裙计数的第一步，通常采用静脉血抽取的方式获取样本。
2. 样本处理：采集到的外周血样本需要经过一定的处理才能进行免疫亚裙计数的检测，比如进行红细胞裂解等操作。
3. 流式细胞术：流式细胞术是一种通过激光仪器检测样本中细胞类型和数量的技术，可以用于进行外周血淋巴细胞免疫亚裙计数。
4. 细胞分析仪：细胞分析仪是一种用于细胞计数和分类的仪器，在外周血淋巴细胞免疫亚裙计数中也有着重要的应用。
四、外周血淋巴细胞免疫亚裙计数的临床应用外周血淋巴细胞免疫亚裙计数在临床上具有重要的应用价值，主要体现在以下几个方面：1. 免疫功能评估：通过对外周血淋巴细胞免疫亚裙计数的检测，可以评估机体的免疫功能状态，了解机体的免疫活性和免疫抑制情况，为临床治疗提供重要参考依据。
2. 免疫系统疾病诊断：外周血淋巴细胞免疫亚裙计数可以用于诊断免疫系统相关疾病，比如自身免疫性疾病、免疫缺陷病等，有助于医生进行早期诊断和治疗。
3. 免疫治疗监测：在进行免疫治疗的过程中，通过定期监测外周血淋巴细胞免疫亚裙的变化，可以了解治疗的效果和机体的免疫反应，为治疗方案的调整提供依据。
BD流式临床检测分析-外周血淋巴细胞亚群分析
BD流式细胞术临床应用研究—外周血淋巴细胞亚群分析临床背景：淋巴细胞是机体细胞免疫和体液免疫应答的重要细胞成分。
正常情况下，各淋巴细胞亚群（包括T细胞、B细胞、NK细胞等）可维持一定数量和比例，相互作用，稳定调节，维持着机体的正常免疫功能。
当不同淋巴细胞亚群的量及功能发生异常改变时，机体会产生一序列病理变化和免疫功能障碍，导致疾病的发生。
相反，测定淋巴细胞亚群的变化，也能对疾病早期诊断和控制、临床治疗指导等提供理论依据和数据支持。
利用流式细胞术对外周血淋巴细胞亚群分析已广发应用月多种疾病的辅助诊断，如恶性肿瘤、血液病、自身免疫和免疫缺陷病等，对分析发病机理、观察疗效及监测预后等也具有重要意义。
检测目的：分析外周血淋巴细胞亚群，了解患者免疫功能的异常，辅助临床诊断和治疗常用检测项目及抗体使用：总T细胞（CD3+）：正常值50-84%。
细胞降低见于恶性肿瘤、自身免疫疾病、先天性免疫缺陷等；细胞增高见于慢性活动性肝炎、重症肌无力等；所需抗体为CD3。
总B细胞（CD3-/CD19+）：正常值5-18%。
细胞增多见于自身免疫性疾病；细胞降低见于传染性单核细胞增多症等；所需抗体为CD3和CD19.T辅助/诱导淋巴细胞（CD3+/CD4+）：正常值27-51%。
细胞减少见于恶性肿瘤；抗体为CD3和CD4。
T抑制/毒性淋巴细胞（CD3+/CD8+）正常值15-44%。
细胞增多见于自身免疫性疾病；抗体为CD3和CD8T辅助：T抑制细胞（CD4+：CD8+）：正常值1.4-2.0。
比值降低见于艾滋病、SLE肾病、传染性单核细胞增多症、急性巨细胞病毒感染、骨髓移植恢复期等；逼孩子增高见于类风湿性关节炎、I型糖尿病等；NK细胞（CD3-/CD16+/CD56+）：正常值7-40%，细胞降低见于恶性肿瘤特别是中晚期伴转移的肿瘤，免于缺陷病及使用免疫抑制剂等；抗体为CD3、CD16和CD56。
自然杀伤性T细胞（CD3+/CD56+/CD16+）：正常值2-13%，具有NK细胞和T细胞的标志，参与对细菌和寄生虫的反应，在控制病毒性感染中也发挥作用；抗体同6。
流式细胞术的工作原理及其临床应用
流式细胞术的工作原理及其临床应用一、本文概述流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是一种在液流中快速检测和分析单个细胞的技术，广泛应用于生物学、医学和生物技术等众多领域。
本文将对流式细胞术的工作原理进行详细介绍，并探讨其在临床诊断和治疗中的广泛应用。
我们将概述流式细胞术的基本原理和技术特点，包括细胞染色、荧光信号检测和数据分析等方面。
然后，我们将深入探讨流式细胞术在免疫学、血液学、肿瘤学等领域中的临床应用，以及其在疾病诊断、预后评估、疗效监测等方面的重要作用。
我们将对流式细胞术的未来发展趋势进行展望，以期为读者提供全面而深入的了解。
二、流式细胞术的工作原理流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是一种在液流中快速定量分析和分选细胞的技术。
其工作原理主要基于流式细胞仪的精确设计和操作。
待检测的细胞经过预处理，如荧光标记、固定和破膜等，使其带有可检测的荧光染料或抗体。
这些细胞随后被导入到流式细胞仪中，通过喷嘴形成单细胞悬液，并以一定的流速通过检测区域。
在检测区域，细胞经过激光束的照射，激发出荧光信号。
这些信号被光电倍增管等光电转换器接收，并转化为电信号。
电信号经过放大、数字化处理后，由计算机系统进行记录和分析。
流式细胞仪可以同时检测多个参数，如细胞大小、内部结构、DNA 含量、蛋白质表达等。
这些参数的分析主要基于荧光信号的强度和波长，以及细胞的电学特性，如电阻抗。
流式细胞术还可以结合分选技术，将特定类型的细胞从混合细胞群体中分离出来。
这主要通过在流式细胞仪的出口处设置电磁场或静电场，对带有特定荧光信号的细胞进行偏转，从而实现细胞的分选。
流式细胞术的工作原理是将单个细胞在液流中快速通过激光束，通过检测和分析荧光信号，实现细胞的定量和定性分析，以及细胞的分选。
这种技术具有高灵敏度、高分辨率和高通量的特点，广泛应用于生物医学研究的各个领域。
三、流式细胞术的临床应用流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）作为一种高度灵敏且多功能的细胞分析技术，在临床医学领域的应用日益广泛。
T-淋巴细胞亚群在患儿血液病诊断中的应用研究
T-淋巴细胞亚群在患儿血液病诊断中的应用研究作者：丁素芳来源：《中外医学研究》2019年第17期【摘要】目的：研究T-淋巴细胞亚群在血液病诊断的临床价值。
方法：选取2016年3月-2018年6月在笔者所在医院就诊的60例血液病患儿为研究对象，作为观察组。
同时选取60例健康患儿作为对照组。
所有参与试验者均采用流式细胞仪检测外周T-淋巴细胞亚群。
对比两组的检测结果、不同类型血液病患儿外周T-淋巴细胞亚群与对照组间的差异性，以及血液病患儿治疗前后外周T-淋巴细胞亚群的变化情况。
结果：观察组CD3+、CD4+及CD4+/CD8+等指标的水平均明显低于对照组，CD8+水平明显高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。
相比对照组，观察组淋巴瘤、多发性骨髓瘤、慢性白血病与急性白血病患儿的CD3+、CD4+及CD4+/CD8+水平均较低，CD8+水平均较高，差异均有统计学意义（P<0.05）。
治疗后，观察组CD3+、CD4+及CD4+/CD8+等指标水平显著升高，CD8+水平显著降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。
结论：检测血液病患儿的T-淋巴细胞亚群能够有效帮助临床诊断，值得进一步研究并推广应用。
【关键词】 T-淋巴细胞亚群; 血液病; 诊断; 应用doi：10.14033/ki.cfmr.2019.17.026 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2019）17-00-02【Abstract】 Objective：To study the clinical value of T-lymphocyte subsets in the diagnosis of children with hematological diseases.Method：Sixty children with hematological diseases who were treated in our hospital from March 2016 to June 2018 were selected as the observation group.At the same time，60 healthy children were selected as the control group.All of the participating investigators used flow cytometry to detect peripheral T-lymphocyte subsets.The results of the two groups were compared and analyzed.The differences between peripheral T-lymphocyte subsets and control groups in different types of hematological patients were compared and analyzed.In addition，compared the peripheral T-lymphocyte subsets before and after treatment in patients withhematological diseases.Result：The levels of CD3+，CD4+ and CD4+/CD8+ in the observation group were significantly lower than those in the control group，and the level of CD8+ was significantly higher than that of the control group，the differences were statistically significant（P<0.05）.Compared with the control group，the levels of CD3+，CD4+ and CD4+/CD8+ in lymphoma，multiple myeloma，chronic leukemia and acute leukemia in the observation group were lower，and the level of CD8+ was higher，the differences were statistically significant（P<0.05）.After treatment，the levels of CD3+，CD4+ and CD4+/CD8+ in the observation group increased significantly，while the level of CD8+ decreased significantly，the differences were statistically significant（P<0.05）.Conclusion：The detection of T-lymphocyte subsets in children with hematological diseases can effectively help clinical diagnosis，which deserves further research and popularization.【Key words】 T-lymphocyte subsets; Blood diseases; Diagnosis; ApplicationsFirst-author’s address：Fuzhou Children’s Hospital，Fuzhou 350000，China血液病是一種常见的临床疾病，大部分患儿造血系统出现异常，严重威胁患儿的身体健康[1]。
淋巴细胞亚群检测在儿童特发性血小板减少性紫癜中的临床意义
淋巴细胞亚群检测在儿童特发性血小板减少性紫癜中的临床意义目的：探讨淋巴细胞亚群与儿童特发性血小板减少性紫癜（ITP）的关系及临床意义。
方法：采用流式细胞术分别检测儿童ITP患者和对照者外周血Th和Tc细胞亚群、B细胞、NK细胞及Treg细胞变化。
结果：持续性ITP组和慢性ITP组与对照组比较，CD8+T淋巴细胞、CD19+B细胞升高，CD3+、CD4+T细胞，CD4+/CD8+T细胞降低，CD4+CD25+/CD4+T细胞和CD4+CD25+Foxp3+细胞/CD4+T细胞降低，新诊断ITP组CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T细胞低于与对照组；与持续性ITP组和慢性ITP组比，CD19+B细胞降低，CD3+、CD4+T细胞，CD4+/CD8+T细胞，CD4+CD25+/CD4+T细胞和CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T细胞均升高，对照组CD16+56+NK细胞高于其他三组，差异均有统计学意义（P ＜0.05）。
结论：T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞和NK细胞比例失衡与儿童持续性和慢性ITP的发病有关，外周血淋巴细胞亚群变化对儿童ITP的临床诊断及预后判断有一定价值。
标签：特发性血小板减少性紫癜；T淋巴细胞亚群；B淋巴细胞；NK细胞特发性血小板减少性紫癜（idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP）发病机制尚不完全明了，目前认为可能与机体免疫功能失调、血小板相关抗体产生、免疫细胞介导的血小板凋亡等有关[1-2]，但确切机制仍未完全明确。
本文就淋巴细胞亚群与ITP发生的关系及其临床意义进行了分析。
1 资料与方法1.1 一般资料2010年3月～2011年2月在本院血液科住院的ITP患者60例，男25例，女35例；年龄1～14岁，平均（6.1±2.3）岁，诊断均符合文献标准[3]。
将其分为：新诊断ITP组（诊断后3个月以内血小板减少）35例，持续性组（诊断后3～12个月血小板持续减少）15例，慢性ITP组（血小板减少持续超过12个月）10例，所有患儿在采集标本1周内均未接受糖皮质激素等任何免疫相关治疗。
流式细胞术检测淋巴细胞亚群对发热患儿病原体判断的价值
流式细胞术检测淋巴细胞亚群对发热患儿病原体判断的价值赵文利;吴柏杨;吴丽娟;汤雪芹;邓琼仙;孙仙琳;吕洁【期刊名称】《国际检验医学杂志》【年(卷),期】2011(032)015【摘要】目的评估流式细胞术(FCM)检测淋巴细胞亚群对发热患儿病原体判断的价值.方法应用FCM检测62例发热患儿外周血淋巴细胞免疫表型(CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3-CD19+、CD3-CD16/56+),同时进行外周血常规检查,独立和联合判断患儿可能感染的病原体,并进行比较.结果 FCM检测发热患儿淋巴细胞亚群的异常率为89%,显著高于血常规法的66%,差异有统计学意义(P<0.01),两种方法联合判断时为95%;FCM、血常规法和两种方法联合判断发热患儿的病原体感染情况时,FCM能较多地发现病毒或胞内菌感染,但病原体倾向不明显,血常规法可能更容易提示为细菌感染,而联合判断能提高病原体的诊断率.单独采用FCM和血常规法判断病原体的正确率分别为82%和73%,两者差异无统计学意义(P>0.05).单独采用FCM和血常规法对62例发热患儿感染病原体的正确判断率分别为74%和66%,联合判断时升至90%.结论 FCM淋巴细胞亚群检测联合血常规可提高对发热患儿病原体判断的准确率,有利于指导临床合理用药.【总页数】3页(P1692-1693,1695)【作者】赵文利;吴柏杨;吴丽娟;汤雪芹;邓琼仙;孙仙琳;吕洁【作者单位】中国人民解放军成都军区总医院儿科,成都,610083;成都医学院,610083;中国人民解放军成都军区总医院检验科;中国人民解放军成都军区总医院儿科,成都,610083;中国人民解放军成都军区总医院儿科,成都,610083;中国人民解放军成都军区总医院儿科,成都,610083;中国人民解放军成都军区总医院儿科,成都,610083【正文语种】中文【相关文献】1.对手足口病患儿进行淋巴细胞亚群检测的临床价值分析 [J], 吴军营;石立彦2.流式细胞术检测肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群的诊断价值 [J], 洪燕燕;杨芝红3.三项呼吸道病原体核酸检测双扩增法在患儿呼吸道疾病诊断的临床价值 [J], 罗金秀; 邹海珊; 祝少凤; 胡新年; 龙辉4.血常规、T淋巴细胞亚群与hs-CRP水平检测对急性上呼吸道感染患儿的诊断价值 [J], 邢国庆5.呼吸道感染患儿非细菌病原体IgM抗体检测的临床价值 [J], 蔡瑜;高冬梅;丁锐;黄升海因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
淋巴细胞亚群检测在儿科的应用分析共27页文档
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46、寓形宇内复几时，曷不委心任去 留。
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47、采菊东篱下，悠然见南山。
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48、啸傲东轩下，聊复得此生。
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49、勤学如春起之苗，不见其增，日 有所长 。
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50、环堵萧然，不蔽风日；短褐穿结 ，箪瓢 屡空， 晏如也 。
56、书不仅是生活，而且是现在、过 去和未 来文化 生活的 源泉。 ——库 法耶夫 57、生命不可能有两次，但许多人连一 次也不 善于度 过。— —吕凯 特 58、问渠哪得清如许，为有源头活水来 。—— 朱熹 59、我的努力求学没有得到别的好处， 只不过 是愈来 愈发觉生活的道路一旦选定，就要勇敢地 走到底 ，决不 回头。 ——左
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淋巴细胞亚群变化的特点和临床价值
很多情况使用“可能”、“也可 能”等不确定词汇，说明外周血 T、B、 NK 细胞绝对计 数和相对百分比变化程度较大。
这种变化一方面来 自于儿童随年龄变化的特征，另一方面还受到许 多环 境、发育和疾病因素的综合影响。 因此评估淋巴细胞 亚群的变化不应是孤立的，应同时结合临床与其 他辅 助检查结果，对临床价值作出判断。 淋巴 与临床疾病往往是一对多或多对一的。
免疫自稳和耐受功能受损
过敏性疾病：并非所有这类患者都需要进行淋巴细胞亚群的检 测。对于一些严重的过敏患者应考虑淋巴细胞亚群的检测。 ① ② ③ ④ 婴幼儿时期全身严重湿疹样表现。 嗜酸性粒细胞显著增多 血清IgE水平明显增高（IgE>1000IU/L） 伴有反复、严重感染的患者
自身免疫和自身炎症性疾病 ①存在难以控制的自身免疫反应情况及出现明显的自身免疫性 淋巴增殖情况 ②合并反复感染的患者 ③存在自身炎症反应 ④长期免疫抑制药物、生物制剂使用前后
免疫监视功能受损
主要引起肿瘤 血液系统肿瘤：儿童时期最为多见的是血液系统肿瘤 其他肿瘤及实体瘤：其他系统肿瘤患者也应酌情进行淋巴细胞 亚群的检测，既可能存在原发性淋巴细胞亚群的异常，也可能 出现继发性改变，尤其是进行各种化疗时，淋巴细胞亚群大多 会受到影响
其他特殊情况
血常规中淋巴细胞明显异常 家族成员中有免疫缺陷病史 长期使用免疫抑制剂者
MØ
B B
Plasma
IgE
Plasma
IgE
检测对象
原则：免疫功能受损者均应常规评估淋巴细胞亚群 免疫功能包括：
免疫防御功能
免疫自稳和耐受功能 免疫监视功能
免疫防御功能受损
易发生感染 反复感染 严重感染 多种病原与特殊病原感染 常规治疗效果不佳的感染
除了宿主免疫防御受损容易造成上述少见感染状况之外，感染 本身也可造成继发性免疫防御受损，因此免疫评估应注意原发 和继发两方面的问题
两种淋巴细胞亚群变化
CD3+ T 和CD19+ B 细胞增多 CD3+ T 和CD19+ B%增高；根据基本公 式a，CD16/56+%相对降低。
例：CD3+ T 5 000 ；CD19+ B3 000 ；CD3+ T 70%；CD19+ 29%； CD16/56+ 1%。 注意：CD3+ T 增多也要参照上述“仅CD3+ T 细胞增多”时判断 CD4+和/ 或CD8+增多的情况进行进一步判断。 如部分EBV感染病例CD8+ 反应性增高，CD19+ 可因感染增高；化脓 性细菌感染可CD19+ B， CD4+ T增多，因此CD3+ T也增多； CD4+/CD8+ 比值增高。其他化学品（如苯）也可能引起类似改变。
①CD4+细胞增多为主，CD4+%增高；根据基本公式b，CD8+%相对降低；CD4+/CD8+比值 增高。如生理现象，生命早期CD4+T细胞相对较多，比例较高；一些细菌感染可使CD4+T增 多，比例增高；CD4+/CD8+ 比值也增高。锌制剂可能使CD4+ 增多。
② CD8+ 细胞增多为主，CD8+%增高；根据基本公式b，CD4+%相对降低；CD4+/CD8+ 比 值降低。如EBV感染引起的传染性单核细胞增多症；其他许多病毒感染、真菌感染及肿瘤等 也可出现此类变化。③CD4+ 和CD8+T细胞均增多，CD4+%，CD8+%无改变；CD4+/CD8+ 比值正常。
免疫细胞及发育
THYRUM CD3+ Epi.
Th CD4+ CD8+
TH1
IFN-γ、IL-2
IL-4 、5 、6、 8、9、10、13
BM
SC SL
PT
T
CD19+
TH2 CTL
IgM
Plasma
ProB
CFU
PreB
CD20 +
B
IgM
IgG
B
Plasma
IgG
IgA
IgA
RBC
Plet PMN
流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群 在儿科的临床应用
湖南师范大学附属湘东医院儿科 张卫国
背景
流式细胞术检测T、B、NK淋巴细胞亚群已较为广泛的应用于儿 科临床 许多疾病涉及儿童相应免疫功能异常 临床工作中更有效的理解和应用流式细胞术以评估儿童的免疫 状况，指导疾病的诊断、治疗还缺乏系统的学习材料 尤其是临床一线的儿科医务工作者对流式细胞术的临床应用更 有待进一步加强认识和学习。
淋巴细胞亚群变化的特点和临床价值
单一淋巴细胞亚群变化
仅CD3+T 细胞增多 CD3+T% 增高；根据基本公式a，CD19+%和CD16/56+%相对降低。 例： CD3+T 5 000 ；其他淋巴细胞无变化；CD3+T 90% ；CD19+ 8%；CD16/56+ 1%。CD3+T细 胞增多又可分为：
各个实验室所采用的标准有所不同。应根据实验室的 参考范围进行评估。
如何判断淋巴细胞亚群中哪种或几种细胞发 生了变化？
在淋巴细胞亚群结果判别中既要注意绝对计数的判别，也要判 别相对数也就是百分比的变化。 淋巴细胞亚群发生变化可以是一种也可以是几种同时发生变化。 这些变化可以是绝对计数的变化，也可以是相对数的变化，可 以增多也可以减少。 根据基本公式a和b ，一种淋巴细胞亚群绝对数的变化在检测 结果中不会影响到其他亚群绝对数变化，但可能引起自身相对 数和其他淋巴细胞亚群相对数的变化。应注意判别。
基本数据判断
应进行绝对计数和相对数的判别 相对数的三个基本公式 [公式a] CD3+%+CD19+%+CD16/56+%=100%±5% [公式b] CD4+%+CD8+%=CD3% [公式c] CD4+/CD8+比值>1（1.5 ~ 2，新生儿期可达 4）。
绝对计数的判断
绝对数标准不同仪器和年龄段及人群存在差别。 个体间变化也比较大。
谢
谢
三种淋巴细胞亚群变化
CD3+ T、CD19+ B 和 CD16/56+ NK 细胞增多 CD3+ T、CD19+ B% 和 CD16/56+ NK% 可能都正常， CD4+/CD8+ 比值可增高、 正常或降低。
注意 ：这种情况若无绝对计数会造成误判。
如仅有相对计数时，可 根据流式细胞术检测时的血常规中淋巴细 胞绝对计 数判断淋巴细胞是否增多。一些感染性疾病可能引起 一 过性类似的改变。