荞麦蛋白质提取方法比较

荞麦蛋白质提取方法比较
荞麦中富含人体中必须的赖氨酸、精氨酸等必须氨基酸，营养价值很高。

可以用于食品加工业，制成富含蛋白质的食品及植物类蛋白质饲料。

通过碱法和盐法提取荞麦蛋白质，对蛋白质提取方法进行优选。

以蛋白质提取率为标准，碱法以提取液PH，料液比，温度，及时间做单因素试验；盐法以盐浓度，料液比，温度，及时间进行单因素实验；通过正交试验对其蛋白提取工艺进行比较，选择最佳的提取方法。

为荞麦蛋白质的综合利用和工业化生产提供参考和实验依据。

碱法提蛋白的原理:荞麦蛋白质多为碱性蛋白质，大量的二硫键和疏水基团使蛋白质的溶解度下降，而NaOH可以破环蛋白质分子的次级键和氢键，使某些极性基团发生解离，使蛋白质分子表面有相同电荷，增加蛋白质的溶解度。

盐法提蛋白的原理：利用盐溶原理（蛋白质在水溶液中，加入中性盐，如硫酸钠，硫酸铵，氯化钠等，会增加蛋白质分子表面的电荷，增强蛋白质分子与水分子的作用，从而使蛋白质在水溶液中的溶解度增大）。

提取液蛋白质含量的测定采用考马斯亮蓝法。

（荞麦蛋白质提取率=提取液中蛋白质含量/荞麦总蛋白含量X100%）
第一步：以牛血清蛋白为标准溶液绘制蛋白质标准曲线，作为定量的依据，用于以后的测定荞麦蛋白质的含量。

（以吸光光度值为横坐标，蛋白质含量为纵坐标，计算出其函数表达式）
第二步：分别以提取液PH、料液比、温度、时间为单因素，在其他条件一定的前提下，进行单因素实验，用来确定每个单因素实验最佳提取条件。

（摸索性实验）实验方法：荞麦粉——加碱液——浸提（1-5h）——3000r/min低速离心10min——取0.1ml 上清液，稀释30倍——加考马斯亮蓝，测OD值，计算蛋白质含量。

分别测定每个单因素实验的最佳提取条件，如PH单因素实验，确定料液比为1:15，温度40度，时间两小时，PH梯度为8、9、10、11、12进行试验。

然后以PH为横坐标，提取率为纵坐标绘制曲线图。

确定最佳的提取条件。

如果绘制的曲线是先上升后下降或者是先上升后保持不变，那么那个转折点就是最高的提取条件。

第三步，确定每个单因素的最佳提取条件，上下取三个水平，进行四因素上水平正交试验，进行九次实验，计算其提取率，计算方差和极差，用来确定哪个单因素对提取工艺的影响因素最大，并选择最佳的提取条件进行试验，计算最优提取率。

盐法提蛋白的过程和碱法提蛋白相似，分别以物料比，盐浓度，温度和时间做单因素实验，并进行正交试验，选择最优的提取率。

最后比较碱法和盐法的提取率，进行选择。

注：
1.（1）考马斯亮蓝原理：考马斯亮蓝中性染料，在酸性溶液中与蛋白质中的碱性氨
基酸和芳香族氨基酸结合，使染料的吸收峰位置变为595nm，同时溶液的颜色也由
棕黑色变为兰色。

在595nm下测定吸光度值，与蛋白质的浓度成正比。

（2）考马斯亮蓝注意事项：不可用石英比色皿，因染色不易洗去，可用塑料或者
玻璃比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇荡洗，以洗去染色。

塑料比色皿绝不可
用乙醇或者丙酮长时间浸泡。

2.各因素对蛋白提取率的影响：
(1)料液比：料液比对蛋白提取率影响不大，随料液比增加提取率增加，达到一定
程度后提取率保持不变。

开始保持不变的点即为单因素下的最佳提取率。

(2)温度:随温度升高，溶液的粘度开始增大，分子运动的速度减慢，阻止蛋白质继
续溶解，从而造成提取率下降。

另外，温度过高，导致蛋白质变性，蛋白质沉淀使蛋白质溶解度降低，从而降
低提取率。

（3）时间:时间过短，荞麦蛋白质不能与碱性溶度充分接触，使蛋白质不能与
纤维素成分分离；时间长，会增加非非蛋白成分与蛋白质共沉机会，降低产品
质量。

（4）PH：PH过高，导致蛋白质变性沉淀，降低其溶解度。

并且使蛋白质色泽
成深褐色，降低产品质量。

（5）盐浓度：盐浓度增加到一定程度，会产生盐析现象，蛋白质溶解度降低，
导致蛋白质提取率下降。

并且过高的盐浓度会破坏蛋白质的结构。

3.碱法提蛋白优缺点：提取率高，生产工艺简单，成本始终。

但提取蛋白的色泽较差，过强的碱提取液会造成环境污染。

是当前工业应用的主要方法。

盐法提蛋白优缺点：提取率较低但是提取蛋白的色泽较好，不破坏蛋白的结构，营养价值较高。

酶法提蛋白:成本较高且条件苛刻，不利用工业生产。

4.常用蛋白质的含量测定方法
考马斯亮蓝比色法，紫外分光光度法，双缩脲试剂比色法，凯氏定氮法
5.其他：Southerrn blot 检测DNA
Northern blot 检测RNA
Western Blot 检测蛋白质
.实验前景及目的：荞麦中的蛋白质含量比较丰富，并且富含赖氨酸，用于食品工业，制作成富含氨基酸的食品或者蛋白质饲料，可用于防治婴幼儿的“赖氨酸缺乏症”。

并且荞麦中的蛋白质含有人体中必需的八种必需氨基酸，与鸡蛋的蛋白质含量相似。

荞麦蛋白具有抗衰老，抗癌；防治高血压，冠心病；促进排泄，缓解便秘等重要的作用。

以往荞麦蛋白多直接食用，或者制作成荞麦发酵产品，如：荞麦发酵酸奶，荞麦啤酒，酱油等。

深加工利用较少，通过此实验，找到荞麦蛋白的最佳工艺参数，提升荞麦蛋白的提取率，提高荞麦的综合利用。

为荞麦蛋白的深加工，综合利用和工业化生产提供参考和实验依据。

摘要：通过碱法和盐法提取荞麦蛋白质，对荞麦蛋白的提取方法进行优选。

以荞麦蛋白的提取率为标准，碱法以提取液的PH，料液比，温度、时间为单因素进行实验；盐法以盐质量分数、料液比，温度，时间为单因素进行实验。

通关单因素摸索性实验的基础上，进行四因素三水平正交实验，优化提取工艺，并对提取方法进行比较，找到最佳的工艺参数。

实验是导师给出课题，自己通过查阅相关文献，设计实验，对以往的实验方法进行优化。

在老师的指导下单独完成。

荞麦蛋白质含量较高，高于大米，小麦，玉米和高粱，主要成分为水溶性清蛋白，谷蛋白次之，醇溶蛋白含量最低。

荞麦所含蛋白质品质较好，组成蛋白质的氨基酸种类齐全，尤其是人体必需的八种必须氨基酸接近鸡蛋蛋白的组成比例。

所含赖氨酸含量高达0.69%，是大米的2.7倍。

因此荞麦食品可以改善我国膳食结构导致的“赖氨酸缺乏症”对幼儿和儿童的生长比例有力。

同时与其他谷物混合，能够充分发挥食物的互补作用，弥补营养的不足，提高食物的营养价值。

另外荞麦粉蛋白质具有良好的消化性。

实验创新点：（1）用考马斯亮蓝法代替之前所用的凯氏定氮法，紫外分光光度法，考马斯亮
蓝法相对于凯氏定氮法和菲林酚试剂法具有灵敏度高；测定快速，方便；干扰物质少等特点。

（2）之前提取荞麦蛋白多用酶法和碱法，而酶法所用的条件要求较高，并且酶制剂保存困难，制备较难，这次所用的盐法提取的荞麦蛋白色泽好，对荞麦的破坏少，很好的保存了荞麦的营养价值）
（3）之前对于苦荞麦的研究较多，而对于甜荞麦的研究较少。

甜荞麦相对于苦荞麦蛋白质含量较高，且分布更广。

东北地区种植以甜荞麦为主，来源上更容易获得。

荞麦良好的保健和药用价值
1.防治高血压，冠心病。

（丰富的矿物质元素，如：镁，钙，硒，锌
2.防治糖尿病和便秘（抗性淀粉，对降低饭后血糖的升高具有明显作用；大量的膳食
纤维可刺激肠胃蠕动，加速粪便排除，降低肠道内致癌物质的浓度）
3.可抗癌，防衰老（荞麦蛋白复合物能提高体内抗氧化酶的活性，对脂质过氧化物有
一定的清除作用。

提高机体抗自由基能力，具有延缓衰老作用）
微生物学主要内容：1.微生物的分类
2.微生物的形态，结构（原核，真核，病毒）
3.微生物的营养及培养基（碳源，氮源，无机盐，水，生长因子，能源）
4.微生物的遗传，变异，育种
5．微生物的生态
6. 微生物的分类，鉴定
生物化学主要内容：生物化学是关于生命的科学，运用化学的原理和方法来研究生命现象。

可分为静态生物化学（如糖类，脂质，蛋白质，核酸的组成，结构，功能）；动态生物化学（他们之间的能量代谢，信息传递，物质代谢，分子基础）；功能生物化学（蛋白质、酶和核酸等生物大分子研究上）。

植物组织培养主要内容：一种将植物体的部分细胞或组织与母体分离，在适当的条件下加以培养，使它们能够生长，发育，分化与增值的技术。

原理：植物组织的全能性。

分子生物学主要内容：在分子水平上研究生命现象的科学。

（通过研究生物大分子（核酸、蛋白质）的结构，功能，和生物合成等方面来阐述各种生命现象的本质。

如：光合作用，发育的分子机制，神经活性机理，癌症的发生等）。

相关的分子生物学实验：ＰＣＲ技术——核酸的快速克隆、琼脂糖凝胶电泳、蛋白质的分离纯化。

质粒ＤＮＡ的提取及鉴定等。

生物科学：研究生物的结构，功能，发生，发展规律。

解决一些疾病、粮食、环境、生态、等方面的问题。

譬如当下的禽流感病毒的研究，杂交水稻，基因突变食品等。

研究领域包括动植物等宏观的，微生物微观的及生态环境等方面
相关的问题：
1.毕业设计的内容
2.本科做过的主要实验,做这些实验的主要目的。

上过什么课程
3.专业方面的著名杂志（如Science、Nature、微生物学通报）
4.蛋白质分离提取的具体步骤
（一）蛋白质的提取：盐析法或等电点法。

（二）蛋白质的分离纯化
蛋白质溶液中如含有无机盐离子，用葡聚糖凝胶过滤法可使蛋白质与无机盐分离，效果理想。

（三）蛋白质的定量----考马斯亮蓝法（Bradford法）测定蛋白质含量
5.将来想从事哪方面的工作以及从哪些方面努力。

（硕士毕业后想进一步攻读博士，对自己领域方面的内容做进一步的了解。

毕业后希望做一些科研方面的工作。

比如制药方面，开发相关的产品等。

对自己主要是加强实验技能及自己独立思考，能够进行一些实验设计。

多注意自己相关领域的研究进展，阅读相关的文献，同时增强自己的英文阅读能力。

6.研究生计划
7.谈谈你的学校
8学校老师的研究方向
9为何考华理。