结球白菜高效离体子叶不定芽再生的研究
小白菜高效子叶离体植株再生体系的建立
ｄ ｎ ｗａ ｈ ｉｈ ｓ ｔ ２ ５ ％ ｉ ｄｕ ＭＳ＋１ ０ ／ ｏ ｓｔ ｅｈｇ ｅｔｗｉｈ ８ ． ３ ｎｍｅ ｉｍ ． ｍｇ Ｌ ＴＤＺ＋ ０ １ ／ ． ｍｇ Ｌ ＮＡＡ＋ ７ ５ ／ ＮＯ３ ． ｍｇ Ｌ ． ｍｇ Ｌ Ａｇ ＋Ｏ ５ ／ ＡＢＡ ｆｅ ｕ — ｕｔ ｒ ｄ ｆｒｔ ａ ｓ ｈ ｏ ｍａｉｎ ｒｔ ｆａ ｖ ｎ ｉｉｕ ｏ ｔｗａ Ｏ ｉ ／ ＭＳ ｍｅ ｉｍ ｏ ． ａｔ ｒｓ ｂ ｃ ｌ ｅ ｏ ｗｏｄ ｙ ；ｔ ｅｆｒ ｔ ａｅｏ ｄ ｅ ｔ ｏ ｓｒ ｏ ｓ １ ０ ｕ ｏ ｔ ｎ １２ ｏ ｄｕ ｃ ｎ ｔ ｉｉｇ ２ ０ ／ ＢＡ ｏ ｏ ｔｉｄ ｃｉｎ ａｎｎ ． ｍｇ Ｌ Ｉ ｆｒｒ ｏ ｎ ｕ ｔｏ ．Ｔｈ ｅｕｔ ｆａ ｔｂｏ ｉｓｓ ｎ ｉ ｖｔ ｘ ｅｉ ｎ ｓｉｄｃ ｔｄ ｔ ａ ０ ／ ｅｒｓ ｌｓｏ ｎ ｉｉｔ ｅ ｓｔ ｉ ｅ ｐ ｒｍｅ ｔ ｎ ｉａｅ ｈ ｔ２ ｍｇ Ｌ ｃ ｉ ｙ Ｈｙ ｓ ｈ ｍｏ ｔ ｐ ｒ ｐ ｉｔ ｆｒ ｅｅ ｔ ｅ ｒｓ ｕ ｅ ｎ ５ ０ ／ ｗａ ｕ ｅ ｔ ｒｓ ｒｉ ｔ ｅ ｇ ｏ ｈ ｆ ｇ ｗａ ｔｅ ｓ ａ ｐ ｏ ｒ ｅ ｏ ｓ ｌｃｉ ｐ ｅ ｓ ｒ ａ ｄ ０ ｍｇ Ｌ Ｃｂ ａ ｖ ｓ ｓｄ ｏ ｅ ｔａｎ ｈ ｒ ｗｔ ｏ
（ ａ ｇ ｉＣｒ ｐ Ｇｅ ｅ ｉ ｍｐ ｏ ｅ ｎ ｎ ｏｅ ｈ ｏｏ ｙ Ｌａ ，Ｎ ａ ｎ ｎ ３ ０ ７ Ｇｕ ｎ ｘ ｏ ｎ ｔ Ｉ ｒ ｖ ｍｅ ｔａ ｄ Ｂｉ ｔｃ ｎ ｌ ｇ ｂ ｃ ｎ ｉ ｇ ５ ０ ０ ，Ｃｈ ｎ ） ｉａ
Ａｂ ｔ ａ ｔ ｓｒ ｃ ：Ｔｈ ｏ ｙ ｅ ｏ ｓ ｗｉ ｅ ｉ ｌ ｒ ｍ ｅ ｇ ｈ ｎ Ｃｈ ｎ ｓ ａ ｂ ｇ ｒ ｓ ｄ ａ ｘ ｌｎ ｓ ｎ ｈ ｆｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｌｄ ｎ ｔ ｐ ｔ ｅ ｆｏ Ｆ ｎ ｓ ｕ ｉ ｅ ｅ ｃ ｂ ａ ｅ ｗｅ ｅ ｕ ｅ ｓ ｅ ｐ ａ ｔ ，ａ ｄ ｔ ｅ ｅ ｆ ｃｓ ｈ ｏ
结球甘蓝离体叶片不定芽的再生研究
收 稿 日期 ：２ ０ １ ３ － ０ ８ ． ２ ２
９ ，１ ０ ，１ １ ，１ ２ ｄ苗 龄 的 外 植 体 接 种 。 培 养 ３ ０—
３ ５ ｄ ，统计 不定 芽分 化率 。 ｔ ． ２ ． ４ 不定 芽生根 与植 株移 栽
菌苗。 １ ． ２ ． ２ 不 同激素 组合试 验
得 高效 高频 再生 体 系 。叶绿体 转基 因植 物作 为一 种
新 型生 物反 应器 ，具有 外源 蛋 白表 达量 高 和 环境 安 全性 好 等 优 点 ７ １ ，而 叶 片 作 为 叶 绿 体 转 基 因植 物
最 理想 的外植 体 ，研 究 其 离体 再 生 具 有 重 要 意 义 。
而 建立 稳定 可靠 的 高效离 体再 生体 系是 利用 基 因工
程 和其 他技 术育 种 的基础 。在结球 甘蓝 离体 培养 研 究 中 ，以下 胚轴 作 为外植 体 的研究 最 多 ¨ ，且 获
再 用灭 菌滤 纸吸 去种 子表 面 的水 分 ，接 种于 无激 素
的 ＭＳ基 本 培 养 基 （ 蔗糖 ３ ０ ｇ・ Ｌ ＋琼 脂 ９ ｇ・ Ｌ～， ｐ Ｈ值 ５ ． ８ ）上。于 （ ２ ５±２ ）℃ 、 光 照 强 度 １ ８ ０ ０ ｌ ｘ ，１ ６ ｈ光／ ８ ｈ暗 的 光 周 期 条 件 下 培 养 无
研 究 了不 同激素 配 比、苗 龄对 离体 子 叶不定 芽再 生 的影 响 ，以期 建立 高效 的植 株再 生 体 系 ，为今 后 通 过 叶绿 体基 因组 遗传 转化 获取 预期 优 良性状 的结 球 甘 蓝创 造条 件 ，并 为进一 步有 效地 开展 结球 甘蓝 叶
绿 体基 因工 程 的研究 奠定 基础 。现 将有 关结 果报 道
不同基因型对白菜子叶培养不定芽再生的影响
华北农学报 ２０ ，７ ３ ：４ ６ ０ ２ １ （ ）６ － ９
Ａｃ ａ Ａｇ ｉｕ ｔ ｒ ｅ Ｂ ｅ ｌ —Ｓｉ ｉａ ｔ ｒｃ ｌｕ ａ ｏｒ ａｉ ｎｃ
不 同基 因 型对 白菜 子 叶培 养 不 定 芽 再 生 的影 响 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
张凤 兰 ，高 田义人２ ，徐 家炳
．
文 章 编 号 ：０ ０—７ ９ （ ０ ２ ０ １０ ０ １２ ０ ）３—０ ６ —０ ０４ ６
白菜 包 括结 球 白菜 和 不结 球 白菜 ，是 我 国重要 的蔬 菜 作物 之 一 ，在蔬 菜 周 年 供 应 中起 着 重 要作 用 。通过 六 五 以来 的协 作 攻 关 ，我 国在 白菜 杂交 品 种选 育 、抗 病 育种 等 方 面 取得 较 大
生率较高 的品种 ，为建立 白菜基 因转化系统提供选材指导 。
１ 材 料 和 方 法
１ １ 材 料 ．
对 从 中国和 日本搜 集 的 １３个 大 白菜 品种 和 ２ 小 白菜 品种 （ １２ 进 行 了子 叶 培 养 。 ２ ０个 表 ，） 其 中 ，国 内品种 ８ １个 ， 日本 品种 ６ ２个 。 国 内品 种是 由北 京蔬 菜研 究 中心从 各 地 搜 集 的 ， 日 本 品种 由 日本泷 井 、坂 田 、协 和和 野 崎种 苗 公 司 提供 。
（． １ 北京 市蔬菜研究 中心 ，北京 １０ ８ ；２ ０ ０ ９ ．日本 国立岩手 大学 农 学部 ，盛 冈 ０ ０—８ ５ ） ２ ５ ０
摘 要 ：探讨 了基因型对 白菜子 叶培 养不 定芽 再生 的 影 响。结 果表 明 ，不 同基 因型 的不 定 芽再 生
率 和平均每 子叶生芽数 差异极大 ，在被 检索的 １ ３个大 白菜 和 ２ ２ ０个 小 白菜 品种 中 ，芽再 生率 为
结球白菜组培再生苗玻璃化问题初步研究
首都师范大学学报(自然科学版)第22卷 第3期2001年9月Journal of Capital N ormal University(Natural Science Edition )V ol.22,N o.3Sept. 2001收稿日期:20002072073北京高技术实验室科研项目资助课题.结球白菜组培再生苗玻璃化问题初步研究3成细华(首都师范大学生物系)刘 凡 曹鸣庆(北京市蔬菜研究中心)摘要 从培养基组份和培养条件两方面对结球白菜玻璃化的成因进行了研究.初步认为激素浓度和琼脂浓度是影响结球白菜玻璃化的主要原因.在一定范围内,降低BA 、NAA 浓度、提高琼脂浓度,不会影响芽的分化率,却有利于正常芽的分化形成;而改用通气性好的三角瓶或降低AgNO 3浓度,对抑制玻璃芽的发生无明显作用.关键词:结球白菜,玻璃化,组织培养.中图分类号:Q 945玻璃化是植物组织培养中特有的现象,它是影响不定芽生根和试管植株移栽成活的主要因素之一[1～3].各种内外因素,如材料种类,培养基成分和培养条件等都会影响玻璃芽的发生[5～6],但引起不同植物的玻璃化的主导因素各不相同.如甘蓝型油菜是由BA 浓度过高[2];毛白杨是相对湿度过高;石竹是琼脂、蔗糖浓度过低,且适当添加一定浓度的K NO 3,可以完全控制玻璃芽的发生[3];垂柳是铵离子浓度过高[1]等.导致试管苗玻璃化的原因还不太清楚,大多数人认为,试管苗玻璃化是内部失调的外在表现,也有人认为是形态结构上的玻璃化导致了功能上的障碍[1,4～6].叶绿素、蛋白质、木质素、酚、乙烯以及各种酶活性的变化究竟在玻璃苗的形成中起多大作用还不清楚.本研究对再生频率高的结球白菜80号玻璃芽的发生及克服途径进行了初步研究,旨在建立良好的再生体系,为以后利用该体系进行外源基因遗传转化作好准备.1 材料和方法111 实验材料本研究用再生频率高的结球白菜80号(北京市农林科学院蔬菜研究中心结球白菜育种课题组提供)为供试品种.以无菌实生苗子叶2子叶柄(带2mm 子叶柄的子叶)为外植体.112 培养方法种子用纱布包好,70%的酒精漂洗30s ;无菌水洗涤1次;215%次氯酸钠(V ΠV )溶液消毒10min ,不时摇动;无菌水洗涤3次;播种于100m L 三角瓶中(含25～30m L MS 基本培养基).3～4d 后切取子叶2子叶柄为外植体(以子叶张开变绿为准),接种于不同组份的分化培养基上,子叶柄插入培养基,分化生长两周后统计芽分化率;将带丛生芽的外植体转入MS 基本培养基,生长两周后统计出芽总数和芽玻璃化率.幼芽叶片增厚而狭长,叶表面缺少角质层,无正常茎尖为玻璃苗.所有培养均在2000lx 光照,光周期16h Π8h ,温度25±1℃的条件下进行.每一15×90mm 平皿含30～35m L 的分化培养基(pH518),以parafilm 封严;每一100m L 三角瓶含30m L 左右的分化培养基,三角瓶用通气性好的封口膜封口.外植体放置密度为:10～15个Π皿,5个Π三角瓶.每次实验重复3次,每次10～30个外植体.2 结果和分析211 激素浓度对成苗的影响表1 激素浓度对成苗的影响BA Πmg L -1NAA Πmg L -1外植体数芽分化率出芽总数芽数Π外植体玻璃化率Π%21001100470198193411167154210001503601941433197521292100011045015027016051581100015072019720121794313611000110360133901257160 分化培养基:MS +AgNO 33mg L -1+110%琼脂+不同的激素浓度配比BA 浓度在2～1mg L-1,NAA 在1～015mg L -1之间,芽分化频率都在90%以上.在这个浓度范围内,随着外源激素浓度的降低,平均每个外植体产生的芽数减少,但玻璃化程度减轻,从67154%降至43136%.当外源激素进一步降低时,虽然玻璃化程度进一步降低,但是同时芽分化率也明显降低,因此外源激素不能降得太低.以上数据表明,在结球白菜再生中,BA 、NAA 浓度高时更容易刺激芽的发生,但浓度过高会影起分化芽内内源激素水平失调而使芽玻璃化.212 琼脂浓度对成苗的影响表2 琼脂浓度对成苗的影响琼脂浓度Π%外植体芽分化率出芽总数芽数Π外植体玻璃化率Π%018440186137311193137110720197201217943137114410190751183111311639012815013826147 分化培养基:MS +BA 1mg L -1+NAA 015mg L -1+AgNO 33mg L -1+不同浓度琼脂培养基中的琼脂浓度,影响培养基中可利用水分及容器内的相对湿度.从表2可知,在一定范围内提高琼脂浓度,可减少结球白菜再生过程中玻璃苗的形成.当琼脂浓度为018%时,在几乎无正常苗的形成.当琼脂浓度提高到114%时,外植体芽发生率在90%以上,芽玻璃化程度却明显减轻.但当琼脂浓度进一步提高到116%时,不利于芽的分化,且玻璃化程度比琼55第3期成细华等:结球白菜组培再生苗玻璃化问题初步研究65首都师范大学学报(自然科学版)2001年脂浓度为114%高,可能是因为琼脂浓度太高,培养基变得很硬,营养物质和激素很难被培养的组织吸收,因而影响了芽的分化和发育.213 容器对成苗的影响表3 容器对成苗的影响容器外植体数芽分化率出芽总数芽数Π外植体玻璃化率Π%平皿a720197201217943137三角瓶a30019685218344109平皿b470198193411167154三角瓶b300197131413568190 a—分化培养基为MS+BA1mg L-1+NAA015mg L-1+AgNO33mg L-1+110%琼脂b—分化培养基为MS+BA2mg L-1+NAA1mg L-1+AgNO33mg L-1+110%琼脂由表3知,培养容器不同不是影响结球白菜玻璃化的主要原因.用两种分化培养基,同时将子叶2子叶柄均匀接种于平皿和三角瓶中,在2000lx,16hΠ8h培养两星期,相对于同一种培养基,培养皿和三角瓶中外植体形成愈伤时间、大小及产生芽的时间基本一致,芽的玻璃化程度相差不大.将带丛生芽的外植体转于MS基本培养基上生长两周,统计发现,出芽总数和芽的玻璃化率只跟激素组成有关,而与培养容器无关.214 AgN O3对成苗的影响表4 AgN O3对成苗的影响AgNO3浓度Πmg L-1外植体数芽分化率出芽总数芽数Π外植体玻璃化率Π% 1100340176581171371632100420180801190401153100720197201218343137 分化培养基:MS+BA1mg L-1+NAA015mg L-1+110%琼脂+不同浓度的AgNO3在芸薹属作物的再生过程中,常添加AgNO3来抑制乙烯的作用,促进芽的发生.由表4可浓度为1～3mg L-1时,芽分化率上升,每个外植体产生的芽数也增多,但对芽以看出,当AgNO3的玻璃化程度影响很小.3 讨 论本实验发现,激素浓度和琼脂浓度对结球白菜玻璃苗发生均有一定的影响,而降低AgNO3浓度或改用通气性好的三角瓶,对结球白菜玻璃苗形成影响不显著.朱青松在烟草髓的再生研究中发现,培养基中的BA和NAA高皆引起分化芽的玻璃化,他认为,外源激素水平影响着内源I AA的含量,从而影响分化芽的状态[8].本实验通过降低BA 和NAA两者的浓度,降低了结球白菜组织培养中玻璃苗的形成.植物细胞在体外培养过程中会产生乙烯,尤其在密闭的容器中,乙烯通过累积会达到一个过高的浓度,影响植物的生长发育.Chi认为,在B.campestris的再生中,高水平的乙烯易引起的有无,琼脂浓度的高低,影响着容器芽分化率降低,导致再生芽生长发育的玻璃化[8].AgNO3中乙烯的含量[9,10].张凤兰在对结球白菜的研究中发现,琼脂浓度越高,乙烯产生量越少,当培养基的琼脂浓度达到116%时,得到的芽发生率高,且平均每个外植体得到的芽也多.本研究所得结果与此不太一致.当琼脂浓度在018%～114%范围内,随着琼脂浓度的提高,芽分化率变化很小,芽的玻璃化率却显著降低.但当琼脂浓度升至116%时,芽分化率迅速降低.分析其原因,可能是因为琼脂浓度太高,培养基变得很硬,营养物质和激素很难扩散到培养的组织中去[11].AgNO 3同时增加了芽分化能力和乙烯产量[9],因此推测AgNO 3是通过Ag +竞争性地与乙烯在膜上的受体相结合而抑制乙烯的作用[9～11].张松认为,当AgNO 3含量高于12mg ΠL 时,对结球白菜芽分化产生抑制作用,出芽率下降,且易产生畸形苗[12].本实验在AgNO 3浓度不超过3mg ΠL 的情况下,没有观察到AgNO 3浓度的变化对结球白菜玻璃芽产生的影响.在外植体再生建立过程中,往往由于外植体产生的致死性褐化物而使实验失败.为了防止褐变和有害物质的积累,常在培养基中加入活性炭(AC )以吸收有害物,降低其不利影响[13].王家旺在培养基中加入013%的AC 降低了油菜茎尖培养过程玻璃芽的产生[13].本实验中,在分化培养基中加入110%的AC ,只有子叶的膨大,没有芽的分化,可能是AC 在吸收有害物的同时,也吸附了生长调节物质和其它培养基成分[13].在培养基中添加不同浓度的蔗糖(3%、6%、9%),观察其对玻璃芽形成的影响.实验发现,随着蔗糖浓度的增高,不但不能抑制玻璃芽的发生,反而明显抑制不定芽的分化.这与胡开林在青花菜组培再生上的研究结果一致[14].这说明提高培养基的渗透压不能有效地抑制玻璃芽的发生.参考文献1 卜学贤,陈维伦.试管植物的玻璃化现象.植物生理学通讯,1987,23(5):13～192 程振东,卫志明,许智宏.根癌农杆菌对甘蓝型油菜的转化及转基因植株的再生.植物学报,1994,36(9):657～6633 刘非燕,郭达初.重瓣丝石竹试管苗玻璃化发生原因初探.杭州大学学报,1996,23(4):282～2874 张洪胜,牟云官,辛培刚.苹果离体培养中试管苗玻璃化现象发生机理探讨.林业科学,1992,17(3):10～125 Bottcher C H ,V ogelmann T C.E ffect of righdity of gel medium on benzyladenine 2induced adventitious bud forma 2tion and vitrification in Picea abies .Physiology Plant ,1984,61:505～5126 Z im M ,Meir G,Harlevy A.Factors in fluencing the production of harded glaucous Carnation plantlets in vitro.PlantCell ,T issue and Organ culture ,1982,2(1):55～657 Leshem B ,Shaley D P ,I zhar S.The effect of cytokinins on vitrification in melon and carnation.Annals of Botany ,1988,62(2):272～2768 朱青松,梅康凤,王沙生.外源生长素对烟草髓愈伤组织分化和内源I AA 含量的影响.北京林业大学学报,1999,21(1):22～259 Chi GL ,Pua E C ,G oh C J ,et al .R ole of ethylene on de novo shoot regeneration from cotyledon explants of Bassi 2Bca campestris ssp.pekinensis (Lour )Olss on in vitro .Plant Physiol ,1991,96:17010 F L Zhang ,Y T akahata ,J B Xu.Medium and genotype factors in fluencing shoot regeneration from cotyledonaryexplants of Chinese cabbage (Brassica campesstris L.ssp.pekinensis ).Plant Cell Reports ,1998,17:780～78611 张鹏.硝酸银和脱落酸相配合影响菜心离体培养之植株再生方式的组织学研究.热带亚热带植物学报,1996,4(1):7112 张松,魏毓棠,等.利用乙烯抑制剂AgNO 3建立结球白菜高频植株再生体系.园艺学报,1997,24(1):94～96(下转第64页)75第3期成细华等:结球白菜组培再生苗玻璃化问题初步研究46首都师范大学学报(自然科学版)2001年Alien G enes T ransferred to Wheat ThroughI nduced T ranslocationHu Y ingkao(Department of Biology,Capital N ormal University)AbstractThe acheivement of alien genes trans ferred to wheat through induced translocation was reviewed. Alien gene res ources used to trans fer and methods of producing translocation were introduced.Transloca2 tion line induced methods and gene res ources were analysed.The perspective was als o given in the paper.K ey w ords:wheat,alien gene,translocation line(上接第57页)13 刘用生,李友勇.植物组织培养中活性炭的使用.植物生理学通讯,1994,30(3):214～2114 胡开林,杨瑞还.青菜花试管苗玻璃化发生及克服途径的初步研究.华南农业大学学报,1998,19(4):63～66Vitrification of R egeneration Shoots of Chinese C abbageCheng X ihua(Department of Biology,Capital N ormal University)Liu Fan Cao Mingqing(Beijing Vegetable Reseach Center)AbstractMedium gradient and culture conditions in plant tissue culture of Chinese cabbage were studied.The vitrification of regeneration shoots of Chinese cabbage in vitro was m ostly affected by horm ones concentra2 tion and agar concent.T o s ome certain,the normal shoot regeneration was facilitated by decreasing hor2 m one concentration of increasing agar concentration.But there is no evident effect for inhibiting the occur2 rence of vitreous shoot by decreasing AgNO3concentration or changing culture dishes into culture flasks.K ey w ords:Chinese cabbage,vitrification,thssue culture。
一种利用大白菜球叶获得再生植株的培养方法[发明专利]
![一种利用大白菜球叶获得再生植株的培养方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/8d55c313770bf78a6429545c.png)
专利名称：一种利用大白菜球叶获得再生植株的培养方法专利类型：发明专利
发明人：刘倩倩,刘维信
申请号：CN201410364506.0
申请日：20140729
公开号：CN104115751A
公开日：
20141029
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种取材便利、成本低、重复性好以及无畸形芽的利用大白菜球叶叶片获得再生植株的方法。
其特征包括以下步骤：(1)选取结球期大白菜外部球叶，在无菌条件下消毒灭菌。
(2)将灭菌后的叶片正面向上平置于芽诱导培养基上进行培养。
(3)外植体在芽诱导培养基中培养28d后，转入MS基本培养基中继续培养。
将外植体上长度大于1.5cm的再生不定芽切下，转入生根培养基诱导生根。
(4)再生芽基部形成大量毛根后，将再生苗根部的生根培养基洗净，栽入盛有固体基质的塑料花盆中。
本方法直接从田间生长植株取材，不需要经过种子萌发过程，对及时保存优良珍贵大白菜材料意义重大，同时为大白菜转基因育种研究提供稳定的受体新材料。
申请人：青岛农业大学
地址：266000 山东省青岛市城阳区长城路700号
国籍：CN
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大白菜子叶离体培养再生植株
近 年 来 基 因 工 程 技 术 的 开 发 为 作 物 品种 改 良开 辟 了新 的 途 径 ，但 是 成 功应 用 基 因工 程 技 术 的 前 提
ｃ ａ ｔ ｒ ，Ｂ．ｏｅ ｃａ，Ｂ．ｎ ｒ ａｃｍ￣ｔｓ ｉ ｌａｅ ｒ ｉ ａ，Ｂ． ｕｃａ，Ｂ．ｎｐ￣和 Ｂ．ｃｒ ａａ种 中 ， 白菜 种 的组 培 再 生 率 最 ｇ ｊｎｅ ａｕ ａｉ ｔ ｎ 低 。 国 内 近 几 年 来 对 白菜 子 叶 培 养 的 培 养 基 条 件 有 所 报 道 ［， ，但 对 大 白菜 的 研 究 仍 很 缺 乏 。另 外 ， ４Ｊ ５ 近几 年 研 究 发 现 乙 烯 与 离 体 组 织 再 生 关 系 密 切 。加 某 些 乙烯 抑 制 剂 ，如 Ａ ＮＯ 、 Ａ Ｇ （ ｍｉｏｔｏｙ ． ｇ ３ Ｖ Ａ ｎｅ ｘｖ ｈ ｉｇ ｌ ｉｅ氨 基 乙氧 基 乙 烯 基 甘 氨 酸 ） 和 ｐｌ ｍｎｓ （ 胺 ） 于 培 养 基 中 可 促 进 Ｂ．删 ｎｌｙ ｎ ｇｃ ｏｙ ｉｅ 多 ａ
［ ，Ｊ ６７
，
Ｌ ，Ｂ． ６ Ｊ 萝 卜 等作物 的不定芽再生 。本 研究开发 了高再生 率 的大 白菜 （ ｒ ｓ ａＣ Ｔｅ ＇ Ｌ ｓ ． ］ Ｂａ ｉ Ｚ ｓｉ ． ｓ ｓｃ ＧＩ Ｄ￥ ｐ ｐ
ｐｋｎｎｉ）子 叶 培 养 系 ，探 讨 了不 同培 养 基 条 件 对 不 定 芽 再 生 的 影 响 ，并 研 究 了 子 叶 乙 烯 释 放 量 和 芽 ｅｉｅｓｓ
以 ‘ 京 新 二 号 ’ 品 种 为 试 材 ，在 ＭＳ培 养 基 中 加 入 不 同 浓 度 的 Ｂ （ 北 Ａ Ｏ～５ｍ ／ ，Ｎ Ａ （ ｇＬ） Ａ ０～ １ｍ ／ ） 探 讨 最 佳 激 素 浓 度 。在 此 基 础 上 ，在 含 有 ５ｍｇＬＢ 和 ０ ５ｍ ／ Ａ 的 Ｍｓ培 养 基 （ ｇＬ ， ／ Ａ ． ｇ ＬＮ Ａ 以下 称 ＭＳ ５ ５培 养 基 ） 中加 入 ０～５ｍｇＬＡ Ｎ ＢＮ ／ ｇ Ｏ ，研 究 其 对 大 白菜 不 定 芽 再 生 的 效 果 ，并 以 ６个 品 种 为 试 材 ，探 讨 用 不 同浓 度 的 琼 脂 固化 培 养 基 对 大 白 菜 不 定 芽 再 生 的 影 响 。 需 注 意 的 是 Ａ Ｎ ３ 可 用 高 ｇＯ 不
菜心离体高效再生体系建立的研究
菜心离体高效再生体系建立的研究菜心作为一种重要的食用植物，具有一定的医疗价值。
因此，如何利用现有的离体技术来建立菜心的高效再生体系，以获得足够的大量和优质的菜心，已经成为当前研究人员关注的热点课题。
本文试图从菜心离体营养物质标定、菜心离体快速再生体系构建和菜心离体快速再生体系的性能分析等方面，阐述菜心离体高效再生体系建立的研究进展。
首先，菜心离体营养物质标定是菜心再生关键技术之一，其目的是为菜心离体快速再生体系的建立提供有效的技术保障。
多年来，研究人员针对菜心离体营养物质标定进行了大量的相关研究，取得了一定的成果。
其研究成果表明，在菜心离体营养物质标定中，碳水化合物、脂肪、蛋白质、矿物质、维生素和酶活性等物质在不同栽培条件下具有一定的变化，这种变化与菜心的实际生长及开花状态有一定的关系，可以为菜心建立高效再生体系提供重要的参考依据。
其次，菜心离体快速再生体系的构建也是当前菜心再生的关键技术。
文献资料显示，一般来说，菜心离体快速再生体系的构建有三大步骤：根据不同的栽培条件，首先确定合适的离体培养基配方；其次，根据不同的培养基配方，确定合适的体外再生方法；最后，在体外试验中确定优质的离体菜心。
采用上述步骤建立的菜心离体快速再生体系可以在短时间内生产大量的优质菜心。
最后，菜心离体快速再生体系的性能分析是菜心离体高效再生体系建立的一个重要环节。
研究人员对不同菜心离体快速再生体系的性能进行了深入的研究，并发现在体外培养时，菜心离体快速再生体系的营养成分与室内种植菜心的性能极为接近。
在再生率方面，研究人员发现，在恒温培养条件下，菜心离体快速再生体系的再生率可达90%以上，而种子繁殖的再生率仅为50%左右，显示出菜心离体快速再生体系的良好性能。
综上所述，菜心离体高效再生体系建立的研究已取得了一定的成果，这些成果为获得足够大量和优质的菜心提供了实质性的帮助。
未来，仍需要进一步完善菜心离体快速再生体系的研究，以获得更高的再生质量和效率。
小白菜高效子叶离体植株再生体系的建立
小白菜高效子叶离体植株再生体系的建立邓智年;魏源文;吕维莉;李杨瑞【期刊名称】《南方农业学报》【年(卷),期】2006(037)004【摘要】以丰顺小白菜带柄子叶为外植体,研究了苗龄、不同激素配比、AgNO3浓度和抗生素、共培养时间对不定芽再生的影响.结果显示,子叶不定芽再生的最佳苗龄为5～9d;经过2d的预培养,在MS+1.0mg/L TDZ+0.1mg/L NAA+7.5mg/L AgNO3+0.5mg/L ABA培养基中,带柄子叶不定芽再生率最高,为82.53%;在含有2.0mg/L IBA的1/2 MS0培养基中诱导生根,不定根形成率为100%.抗生素敏感性试验表明,可选择浓度为20mg/L Hyg(潮霉素)作为最适合选择压,抑制农杆菌生长的抗生素选用500mg/L Cb(羧卞青霉素).不同浓度农杆菌菌液对子叶再生不定芽的影响不大,但共培养时间的长短却明显地影响不定芽的分化.【总页数】5页(P350-354)【作者】邓智年;魏源文;吕维莉;李杨瑞【作者单位】广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室,南宁,530007;广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室,南宁,530007;广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室,南宁,530007;广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室,南宁,530007【正文语种】中文【中图分类】S434.3【相关文献】1.单子叶高效表达载体的构建及玉米植株再生体系的建立 [J], 冯玉兰;王汉宁;张金文;孔维萍2.骆驼刺高效离体植株再生体系的建立 [J], 步怀宇;贾敬芬;郝建国3.两步法高频率小白菜子叶离体植株再生体系的建立 [J], 唐慧;肖兴国;陈珈4.四倍体茄子叶片离体培养和植株再生体系的建立 [J], 范适;连勇;刘志敏;邓明华;宋燕5.辣椒子叶高效植株再生体系的建立 [J], 黎定军;张宝玺;赵开军;谢丙炎;罗宽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
大白菜离体再生中LBD基因的作用和春化相关BrVIN3基因的遗传转化
利用本研究组基于全基因组关联分析GWAS(Genome-Wide association study)和传统QTL(Quantitative trait locus)遗 传定位,在A02染色体上定位了 一个与白菜抽薹开花密切相关的 候选基因—BrVIN3(Bra006824)。为验证Bra006824功能,本研究 利用上述筛选获得的再生频率高的自交系材料,采用农杆菌侵染 转化法将目的基因Bra006824转入相应植株中;利用相同的农杆 菌采用浸花法将基因导入拟南芥并进行表型调查分析,结果显 示:1.在再生过程中,外植体再生芽对潮霉素的最高耐受浓度是3 mg/L;利用该浓度进行抗性芽筛选,初步获得5株经过PCR验证的 转基因植株。
主要结果如下:1.选用白菜类(大白菜和小白菜)作物子叶再生体 系进行芽再生频率统计,结果表明不同品系材料的不定芽再生率 差异巨大,再生率最低为0%,最高可达到67.2%。2.选用再生率为 2.4%的21#(来源于杂一代品种’刑都优丰’)和55.7%的29#(源 于杂一代品种’夏宝’)自交系为材料,利用荧光定量PCR在愈伤 培养的0d、7 d、14 d、21 d四个时间点检测白菜LBD基因的表 达。
2.利用农杆菌浸花法将抽薹相关基因Bra006824导入拟南芥,结 果表明Bra006824基因的异位高表达可以促进植株提早进入抽薹 开花阶段。
结果表明,白菜外植体在诱导产生愈伤组织的过程中,LBD基因四 个时间点的表达量呈现先上升后下降的趋势;再生频率不同的材 料其LBD基因的表达量也不同。3.选用4份再生率有明显差异的 自交系材料,进一步验证了上述LBD基因在愈伤组织发生过程的 表达规律。
并且研究表明外源激素能显著诱导白菜LBD基因表达量的增高, 有效促进材料愈伤组织的形成。在建立的子叶再生体系的基础 上,本研究成功建立大白菜子叶培养农杆菌的遗传转化体系。
结球白菜抗逆基因遗传转化方法的研究的开题报告
结球白菜抗逆基因遗传转化方法的研究的开题报告前言随着社会经济的发展以及人们生活水平的提高，白菜等蔬菜作物的需求量逐年增长。
然而，作物生长期间面临着气温、湿度、盐碱度等多种环境胁迫，导致产量下降和品质变差。
因此，如何提高白菜抗逆性能已成为蔬菜栽培中急需解决的问题。
本研究将探究结球白菜抗逆基因遗传转化方法，以期提高其抗逆性能，降低其环境胁迫下的产量损失。
一、研究背景白菜作为重要的蔬菜之一，在我国栽培历史悠久，且味道鲜美、营养丰富，深受人们喜爱。
然而，作为一种非耐逆性蔬菜作物，白菜在种植过程中面临着气温、湿度、盐碱度等多种环境胁迫，导致产量下降和品质变差。
当前，为了提高作物的产量和质量，许多科学家都在探索利用基因工程技术来吸纳优异基因，从而改善作物生长环境的变异性。
然而，自然基因突变和重组是不可预测的，许多常规转基因作物对于环境因素的调节能力也存在不少局限性。
因此，如何提高作物的抵御环境胁迫的能力，降低环境因素下作物的生产损失，是种植业面临的一个重要问题。
本研究拟以结球白菜为对象，运用基因编辑技术和生物技术手段，探究结球白菜抗逆基因遗传转化方法，以期提高结球白菜的抗逆性能，降低环境因素下的生产损失。
二、研究目的和意义通过对结球白菜抗逆基因遗传转化方法的研究，可以探索结球白菜在遗传水平上的适应性，提高其抗逆性能，降低环境因素下的生产损失。
具体的研究目的和意义如下：1. 探索结球白菜抗逆基因转化方法，为蔬菜栽培提供技术支持。
2. 通过基因编辑技术，吸纳抗逆基因，提高结球白菜在极端环境下的生存能力和产量。
3. 为蔬菜生产提供新的种植策略，促进蔬菜行业的可持续发展。
三、研究内容和方法1. 结球白菜抗逆基因筛选初步筛选抗逆基因并鉴定其作用机制。
依据白菜抗逆生理特点设计抗逆表型筛选程序，采用标准环境和模拟环境对抗逆性强的品种进行SDS-PAGE蛋白质组分析、RNA-seq分析等，发现与抗逆性相关的代表性蛋白质及其基因，进一步验证其在抗逆性中的作用。
不结球白菜再生体系、遗传转化及耐热性调控研究的开题报告
不结球白菜再生体系、遗传转化及耐热性调控研究的开题报告一、研究背景白菜是我国著名的蔬菜之一，已有几千年的种植历史。
目前，白菜品种已经相当丰富，其中不结球型品种受到越来越多的关注，因其更加适合多样化的种植和消费需求。
然而，不结球型白菜存在着低产、低品质、抗病性差等问题，这制约了其产业化发展。
基因工程技术在中国农业中的应用已被明确提出，是提高农作物产量和品质的重要途径。
在不结球型白菜的生产中，目前缺乏合适的遗传转化技术和有效的耐热性调控策略，这阻碍了其高效、稳定生产和市场化推广。
因此，开展不结球白菜再生体系、遗传转化及耐热性调控研究，具有重要的理论和应用价值。
二、研究目的和内容本研究旨在建立不结球型白菜再生体系，构建遗传转化体系，探索适用于不结球型白菜的耐热性调控策略，以推动其产业化发展。
具体内容包括：1. 筛选合适的白菜愈伤组织作为再生体系的起始材料；2. 优化外源基因转化的体系，比较不同载体和基因导入量对基因表达的影响；3. 选取有效的遗传标记对转基因植株进行鉴定；4. 建立耐热性检测体系，分析转基因白菜的耐热性变化及其与基因表达的关系；5. 探讨开发针对白菜耐热性的基因组编辑技术。
三、研究方法1. 通过组织培养的方法，筛选优质白菜的愈伤组织，建立再生体系；2. 利用农杆菌介导法等遗传转化技术，导入外源基因，研究转化效率和稳定性；3. 选择与转化基因拓扑结构相似的叶绿体基因作为参照，利用PCR或Southern杂交等方法，检测转化植株中外源基因的存在；4. 以不同温度和湿度条件下的表型为评价指标，分析转化植株的耐热性差异，研究耐热性的分子机制；5. 借助CRISPR/Cas9等基因组编辑技术，针对耐热相关基因进行基因组编辑。
四、预期成果1. 系统地建立不结球型白菜的再生体系和基因转化体系；2. 研究白菜不结球性状的遗传规律，建立鉴定转基因植株的方法；3. 研究转化植株在环境压力下的反应，探索改善其抗热应答机制的可能性；4. 建立耐热性相关基因的编辑技术并初步应用。
结球白菜游离小孢子培养与植株再生
１２ 孢 子 分 离 与 培 养 ．
养总 体难 度较 大 ，影 响胚 状体诱 导率 因素 多 ，小孢
子培 养过 程某些 作用 机制 还没有 彻底 弄清 楚 ，在 花 蕾取 材 时期 、温度处 理 、转胚成 苗影 响 因素上研 究 较少 。本试 验采 用 了 ６个结 球 白菜材 料进行 小孢 子 离体 培养 ，对基 因型 、取 材时期 温度 处理 、转胚 成
结 球 白菜 （ ｒｓ ｃ ａｉ ｎ ｓ
Ｌ ｕ ） 又称大 白菜 、胶菜 、黄 芽菜 ，是 十字 花科 芸 ｏｒ
薹属 芸薹 种 的一个亚 种 ，原产我 国 ，是 我 国栽培 历 史最 悠 久 、种 植 范 围 最 广 泛 、栽 培 面 积 最 大 的 蔬
苗 因素等 条件 进行 比较研 究 ，优 化小 孢子 培养 的基 本技 术 ，并 培 养 了大 量再 生植株 。
１ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 ．
从 供 体 植 株 中 选 取 处 于 单 核 靠 边 期 的 花 蕾
（ ． ５～ ． ５ｃ ，进 行 ４℃ 低 温不 同时 问预 处 理 ０ ２ ０ ３ ｍ）
澎 雇 学 ２２ 第 期 江 千 ０ 年 ４ １
文 献 著 录 格式 ：李 必 元 ，叶 国 锐 ， 王 五宏 ，等 ． 结 球 白菜 游 离小 孢 子培 养 与植 株 再 生 ［ ］ 浙 江农 业 科 学 ，２ １ （ ：５ ３—５ ６ Ｊ． ０ ２ ４） ０ ０
图
结 球 白菜游 离 小 孢 子培 养 与植 株 再 生
通 信 作 者 ：钟新 民 ，研 究 员 。 Ｅｍａ ：ｘ ｌ ＠ ｈｔ ａｌｃｒ。 － ｉ ｚｍ ｌ ｏｍ ｉ ｏ ｌ ｙ ． ｎ
结球白菜高效离体子叶不定芽再生的研究
平均每子叶再生不定芽数
Average number of shoot regeneration per exp lant C1 0 a 0 a 113 b 110 b 115 b 211 c 314 f 312 f 215 cd 216 cde 219 def 311 ef C2 0 a 0 a 0 a 0 a 114 b 116 b 313 e 311 de 213 c 216 cd 218 cd 217 cd
结球白菜 (B rassica cam pestris ssp. pek inensis ( L. ) O lsson ) 是我国最重要的蔬菜作物之一 。目前 , 为了进一步提高结球白菜的品质 、抗病虫性和抗逆性等 , 采用基因工程将目的基因导入结球白菜 , 在保 持其原有优良性状的基础上改良结球白菜的遗传特性 , 为结球白菜遗传育种提供了新技术 。但是基因工 [1] 程技术的应用要求高效的不定芽再生系统 , 而结球白菜属于芸苔属 , 是离体不定芽再生困难型植物 。 近年来 , 国内外学者已作了许多尝试来提高白菜类的离体不定芽再生率 , 但多数报道中不定芽再生率都 很低 , 且材料专一性强 , 使得基因工程技术的应用受到限制
1 12 方法
将种子在 75%乙醇中表面消毒 30 s后 , 再用 011%的 HgC l2 溶液消毒 10 m in, 用无菌水冲洗 5 次 。 将消毒好的种子在无菌滤纸上吸干水后 , 接种在含 1 /2 M S培养基的培养皿中 , 每皿 (直径 9 cm ) 20 粒 ,
收稿日期 : 2004 02 23 基金项目 : 教育部留学回国人员科研启动基金资助项目 ( [ 2001 ] 498)
激素 /
mg・L - 1 Hormone NAA + 6 2 BA 011 + 110 011 + 310 011 + 510 011 + 710 015 + 110 015 + 310 015 + 510 015 + 710 110 + 110 110 + 310 110 + 510 110 + 710
结球白菜带柄子叶外植体不定芽离体再生能力的遗传分析
叶 为外 植体 ， 建立 了高频 率离 体 不定 芽再 生 技术 。 据此 我 们还 对 白菜 不 定芽 再生 能 力进 行遗 传 分析 ， 并开 展 亲 本 与后 代 杂 种 的离 体 培 养 及 反应 研 究 ， 括 对 培养 基 的激 素 需 求 ， 定 芽 形成 频 率 ， 定 芽 形 成 数 包 不 不 量， 芽形 态 等系 列特 征 。研 究 结果 表 明 ， 杂种 与 亲本 在 培养 基 的激 素浓 度 上有 类 似 需求 ； 杂交 后 代 的不 定
芽 再生 率均 至 少高 于一 方 亲本 ， 一 些组 合 中可 以高于 双 亲 ； 适 宜 的杂 交组 合 及 培养 条 件 下 ， 在 在 结球 白菜 带柄 子 叶外 植体 的不定 芽 再生 率 可 以达 １０ ， ～外 植 体上 的不 定芽 数 达 ３ ７个 。方 差 分析 表 明 ， 球 ０％ 每 ～ 结 白菜 的不定 芽 离体 再生 能 力存 在基 因的加 性 效应 。 关键 词 结球 白菜， 植体， 外 不定芽 再生， 传分 析 遗
通 讯 作者 ，ｉｆｎ ｅｃ ． ｇ ｌ ａ＠ｎ ｒｖ ｒ ｕ ｏ
摘
要
解 析 控 制植 物 不 定芽 离 体再 生 能 力 的遗传 因素 ， 助 于 从根 本 上提 高离 体培 养 困难 材 料 的不 定 有
芽 再 生能 力 ， 是植 物基 因工程 遗传 改 良的基 础 。本研 究 以结球 白菜 ４个 纯 合亲 本 及其 杂 交 后代 的带柄 子
， 一 一
Ｙ ａ ｇ Ｈｕ ｙ ｎ ｎ ｉ ｉ ｇ 。 Ｗ ａ ｉｇ ｎ ｎｇＭ ｎ ｇａ ｇ
Ｗ ｕ Ｌｉ ａ ｎ
Ｚｈａ ｇ Ｆ ｎ ｌ ｎ ｎ ｅ ｇａ
Ｌｉ ห้องสมุดไป่ตู้ ｎ ｕ Ｆａ
三种生菜离体快繁的初步研究
三种生菜离体快繁的初步研究作者：李梅陆玉建边文静张换换石东里来源：《湖北农业科学》2018年第06期摘要：以3种生菜子叶为外植体，研究了不同植物生长调节剂对生菜（Lactuca sativa）不定芽的诱导和植株离体再生的影响。
结果表明，意大利生菜、玻璃生菜和结球生菜不定芽诱导最适培养基分别为MS+0.1 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA、MS+0.1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA和MS+0.2 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA；3种生菜生根最适培养基分别为1/2 MS+0.05 mg/L NAA、1/2 MS和1/2 MS+0.1 mg/L NAA。
通过分析影响3种生菜高频离体再生体系建立的因素，为进一步利用基因工程技术开发功能性蔬菜奠定了基础。
关键词：生菜（Lactuca sativa）；离体快繁；植物生长物质；不定芽；生根；再生中图分类号：S636.2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2018）06-0111-05DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2018.06.028Abstract： In this experiment，three kinds of cotyledons from Lactuca sativa were used as explants to study the effects of different plant growth substances on the induction of adventitious buds and the in vitro regeneration. The results showed that the optimal medium for the induction of adventitious buds from Lactuca sativa L. var. ramosa Hort.，Lactuca sativa L. var. crisha Hort. and Lactuca sativa var capitata L. were MS+0.1 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA，MS+0.1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA，and MS+0.2 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA，respectively. The optimum rooting medium for the three kinds of Lactuca sativa were 1/2 MS+0.05 mg/L NAA，1/2 MS，and 1/2 MS+0.1 mg/L NAA. By analyzing the factors that affect the establishment of high-frequency regeneration system of three kinds of Lactuca sativa，it laid a foundation for further development of functional vegetables by using genetic engineering technology.Key words： Lactuca sativa； rapid propagation in vitro； plant growth substance；adventitious buds； rooting； regeneration植物疫苗将基因工程技术与机体免疫原理相结合，具有生产简单、成本较低、使用安全方便、易贮存等优点。
一种大白菜真叶离体再生培养方法[发明专利]
![一种大白菜真叶离体再生培养方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/29254f17f705cc17542709d9.png)
专利名称：一种大白菜真叶离体再生培养方法
专利类型：发明专利
发明人：张鲁刚,刘学成,茹磊,李海萍,惠麦侠,张明科申请号：CN201110045595.9
申请日：20110225
公开号：CN102144561A
公开日：
20110810
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种大白菜真叶离体再生培养方法，该方法在传统大白菜组织培养的基础上首次采用了以真叶为外植体，从适宜苗态、切割方式和接种方式及激素浓度几个方面，优化了大白菜真叶离体再生体系。
该培养方法仅需在常规的MS基本培养中添加6-BA和NAA，方法简单、易操作；同时，培养出来的不定芽数目多、质量好、健壮、没有畸形，再生率高，再生周期短。
为获得大白菜转基因的受体新材料提供了新的途径，对利用现代基因工程技术创新大白菜种质和新品种将具有重要的现实意义。
申请人：西北农林科技大学
地址：712100 陕西省西安市杨凌示范区邰城路3号
国籍：CN
代理机构：西安恒泰知识产权代理事务所
代理人：李郑建
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大白菜子叶离体培养再生植株的研究
大白菜子叶离体培养再生植株的研究
张艳萍;陈玉梁;张正英
【期刊名称】《甘肃农业科技》
【年(卷),期】2005(000)003
【摘要】以大白菜品种北京小杂60子叶为外植体探讨了培养基中不同激素配比、加入不同量AgNO2和不同苗龄子叶、子叶带柄及不带柄接种对大白菜子叶离体培养植株再生的影响.实验结果表明,最佳分化培养基为MS+6-BA 2 mg/l+NAA 1 mg/l+AgNO3 4 mg/l,最佳苗龄为4 d,最佳的外植体处理方式为不带柄的半子叶;在1/2 MS培养基中加入1 mg/L IAA或2 mg/L IBA对幼苗生根非常有利.
【总页数】3页(P28-30)
【作者】张艳萍;陈玉梁;张正英
【作者单位】甘肃省农业科学院生物技术中心,甘肃,兰州,730070;甘肃省农业科学院生物技术中心,甘肃,兰州,730070;甘肃省农业科学院生物技术中心,甘肃,兰
州,730070
【正文语种】中文
【中图分类】S634.1;Q813.1
【相关文献】
1.芥蓝子叶离体培养再生植株的研究 [J], 胡志群;江远彩;陈淳
2.甘蓝CMS下胚轴和子叶的离体培养与植株再生研究 [J], 许念芳;张恩慧;李殿荣;许忠民;程永安;王小艳;马勇斌
3.不结球白菜子叶离体培养与植株再生的研究 [J], 卞莹莹;颜彬;崔丽洁;潘静娴;开国银
4.菊苣子叶离体培养与植株再生的研究 [J], 梁美霞;戴洪义
5.大白菜子叶离体培养再生植株 [J], 张凤兰;高田畑粦;徐家炳
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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3
NAA and 1 mg・L
-1
TDZ . Adding 5 mg・L
-1
AgNO3 into the above medium could further
increase the frequency of shoot regeneration up to 9617% and 8010% respectively, and seedling age from 5 to 8 days was the best . Ke y wo rd s: B rassica cam pestris ssp. pek inensis (L. ) O lsson; cotyledon; shoot regeneration
平均每子叶再生不定芽数
Average number of shoot regeneration per exp lant C1 0 a 0 a 113 b 110 b 115 b 211 c 314 f 312 f 215 cd 216 cde 219 def 311 ef C2 0 a 0 a 0 a 0 a 114 b 116 b 313 e 311 de 213 c 216 cd 218 cd 217 cd
升高 , 不定芽再生率下降 , 每一外植体上的平均不定芽数略有上升 , 但畸形芽的数目也增加 。M S + 015 - 1 - 1 mg・L NAA + 510 mg・L 6 2 BA 的培养基中 , C1 和 C2 不定芽的再生率最高为 5813%和 4510% 。培养 过程中还发现 , TDZ处理子叶时 , 培养 7 ～10 d就可见到密集的绿色丛生芽点 , 而 6 2 BA 则在 10 d 后才 能见到芽点 。 试验中还发现 NAA 浓度也影响不定芽再生 。 011 mg・L
不定芽再生率 / %
Frequency of shoot regeneration C1 313 a 813 a 916 a 1117 a 5617 bc 7510 f 7116 ef 6313 cde 4813 b 6010 cd 6318 cde 6717 def C2 117 a 617 a 715 a 813 a 3813 bc 5510 e 5211 de 4510 cd 3010 b 4313 cd 4015 c 3617 bc
S tudie s on high effic ient in vitro shoo t regene ra tio n from co tyledon of Chine se cabbage
FAN M ing2qin , ZHU Yue 2lin , ZHU L i2hua
( College of Horticulture, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China ) Ab s tra c t: The cotyledons were used as exp lants from two excellent quality Chinese cabbage cultivars, A ichi Hakusai ( C1 ) and Shinriso Hakusai (C2 ) , introduced from Japan. Effects of hormone combinations, AgNO3 concentration and seedling age on shoot regeneration from cotyledon were studied. The results were as follow s . Compared w ith 6 2 BA , TDZ was more effective in inducing shoot regeneration. The shoot regeneration percentage from cotyledons of the two cultivars reached 7510% and 5510% respectively in M S medium containing 015 mg・L
- 1
・2 1 ・
置于 ( 25 ± 2 ) ℃, 光照时间 12 h ・d , 光照度 2 500 lx的培养室中培养 。发芽 4 ～5 d 后切取带有 1 ～2 - 1 - 1 mm 子叶柄的子叶插入加有不同激素的 M S分化培养基中 , 附加蔗糖 30 g・L , 琼脂 7 g・L 。用培养 皿 (直径 9 cm ) 进行培养 , 每皿接种 10 个外植体 。每处理接种 30 个外植体 , 重复 3 次 。培养 20 d 后 , 调查子叶不定芽的生长情况 。
南京农业大学学报 2005, 28 ( 1 ) : 20 ～23
Jou rna l of N an jing A g ricu ltu ra l U n iversity
结球白菜高效离体子叶不定芽再生的研究
樊明琴 , 朱月林 , 朱丽华
(南京农业大学园艺学院 , 江苏 南京 210095 )
3
不定芽再生率 / %
Frequency of shoot regeneration C1 0 a 0 a 510 a 310 a 3010 b 4117 cd 5813 f 5615 f 3510 bc 4617 de 5313 ef 5516 f C2 0 a 0 a 0 a 0 a 1813 b 3117 c 4510 e 4413 e 2313 b 3510 cd 4010 de 3812 cde
激素 /
mg・L - 1 Hormone NAA + 6 2 BA 011 + 110 011 + 310 011 + 510 011 + 710 015 + 110 015 + 310 015 + 510 015 + 710 110 + 110 110 + 310 110 + 510 110 + 710
注 : 1) 基本培养基均为 MS。 The basic medium isMS .
2) 用 Duncan ′ s多重比较在 α = 0105 水平上做显著性测验 , 字母相同者表示差异不显著 。Duncan′ s multip le range test, treatm ents with the same letter indicated no significant difference at 5% level . 3) C1 : 爱知结球白菜 A ichi Hakusai; C2 : 新理想白菜 Shinriso Hakusai . The same as follows .
结球白菜 (B rassica cam pestris ssp. pek inensis ( L. ) O lsson ) 是我国最重要的蔬菜作物之一 。目前 , 为了进一步提高结球白菜的品质 、抗病虫性和抗逆性等 , 采用基因工程将目的基因导入结球白菜 , 在保 持其原有优良性状的基础上改良结球白菜的遗传特性 , 为结球白菜遗传育种提供了新技术 。但是基因工 [1] 程技术的应用要求高效的不定芽再生系统 , 而结球白菜属于芸苔属 , 是离体不定芽再生困难型植物 。 近年来 , 国内外学者已作了许多尝试来提高白菜类的离体不定芽再生率 , 但多数报道中不定芽再生率都 很低 , 且材料专一性强 , 使得基因工程技术的应用受到限制
NAA + 1 mg・L
-1
TDZ培养基中 , 2 个品种的子叶不定芽再生率分别达到 7510%和 5510% 。在此基础上 , 添加 5
AgNO3 时 , C1 和 C2 子叶不定芽再生率分别达到 9617%和 8010% , 并以 5 ～8 d为子叶不定芽再生的最佳苗龄 。
关键词 : 结球白菜 ; 子叶 ; 不定芽再生 中图分类号 : S63411; Q81311 文献标识码 : A 文章编号 : 1000 2030 ( 2005 ) 01 0020 04
[ 1, 2 ]
。
本试验以 2 个从日本引进的优质结球白菜品种为材料 , 研究了不同激素配比 、AgNO3 浓度和苗龄对 离体子叶不定芽再生的影响 , 为进一步有效地开展结球白菜基因工程的研究奠定基础 。
1 材料与方法
1 11 材料
日本结球白菜品种爱知结球白林种苗公司 。
2 结果与分析
2 11 不同激素浓度对子叶不定芽再生的影响
从表 1 可知 , 与 NAA 结合 , TDZ比 6 2 BA 对子叶不定芽再生的效果更好 。M S + 015 mg・L
110 mg・L
- 1
- 1
NAA +
TDZ培养基上的子叶不定芽再生率最高 , C1 和 C2 分别为 7510%和 5510% 。随 TDZ浓度的
2 1 2 AgNO 3 浓度对子叶不定芽再生的影响
由表 2 可知 , 在分化培养基 M S + 015 mg ・L NAA + 110 mg ・L TDZ中分别添加 3、 5、 8 和 10 - 1 - 1 mg・L 的 AgNO3 后 , 子叶不定芽再生率升高 。当 AgNO3 为 5 mg・L 时 , C1 和 C2 的不定芽再生率由 原来不加 AgNO3 时的 7510%和 5510%分别增高到 9617% (图 1 ) 和 8010% 。平均再生不定芽数 C1 和
平均每子叶再生不定芽数
Average number of shoot regeneration per exp lant C1 110 a 118 a 118 a 119 a 312 b 615 de 617 e 611 cde 512 c 515 cd 519 cde 617 e C2 013 a 115 b 116 b 117 b 312 c 516 fgh 610 h 518 gh 319 cd 415 de 419 ef 512 efg