【CN110257335A】单层或多层的3D脑胶质瘤细胞培养模型及其构建方法和应用【专利】
三维细胞模型的制备与应用
三维细胞模型的制备与应用细胞是构成生命的基本单位。
在过去的几年中，随着科技的发展，人们逐渐开始通过三维打印技术制备三维细胞模型，以更好地了解细胞的结构和功能。
本文将介绍三维细胞模型的制备方法和应用前景。
一、三维细胞模型的制备方法1.肝细胞三维模型肝脏是人体重要的代谢器官，肝脏细胞的形态、结构、组成和功能对于肝脏的代谢、解毒、排泄等功能具有重要的影响。
通过三维打印技术制备肝细胞模型，可以更精确地研究肝细胞的构造和机能。
肝细胞三维模型的制备过程比较复杂，需要进行细胞培养、材料制备、模型打印等多道工序。
其中，细胞培养要求细胞生长繁殖良好，材料制备要求生物材料具有良好的生物相容性和生物活性，模型打印要求打印设备精度高、速度快。
2.肿瘤细胞三维模型肿瘤是人类的重大健康问题之一，研究肿瘤细胞的结构和功能对于肿瘤的治疗与预防具有重要的作用。
通过三维打印技术制备肿瘤细胞模型，可以更好地了解肿瘤细胞的组织结构和生长机制。
肿瘤细胞三维模型的制备过程与肝细胞模型类似，需要进行细胞培养、材料制备、模型打印等多道工序。
不同的是，肿瘤细胞的生物学特性与正常细胞不同，导致其培养和性质研究更加困难。
二、三维细胞模型的应用前景1.药物筛选通过三维细胞模型可以更好地了解细胞的形态、构造和功能，从而更准确地预测药物的药效和副作用。
目前，三维细胞模型在药物筛选领域已经取得了很多成功的应用，成为药物创新和开发的重要手段之一。
2.组织工程组织工程是一种通过细胞培养和生物材料构建组织或器官的技术，具有重要的生物医学应用前景。
通过三维打印技术制备细胞模型可以更好地了解人体细胞的三维结构和生理功能特征，为组织工程技术的发展提供了一种新的技术手段。
3.医学教育和科普通过三维打印技术制备的三维细胞模型可以更直观地呈现细胞的生物学特性和构造，从而更好地进行医学教育和健康科普。
未来，在医学教育和科普领域，三维细胞模型将成为一种重要的教学工具和科普文章的内容。
脑胶质瘤动物模型的建立步骤-概述说明以及解释
脑胶质瘤动物模型的建立步骤-概述说明以及解释1.引言1.1 概述脑胶质瘤是一种具有较高发病率和致死率的恶性肿瘤，常见于中枢神经系统中的胶质细胞。
其治疗难度大，预后差，目前尚无有效的治疗手段。
在研究脑胶质瘤的发病机制和寻找治疗方法方面，动物模型的建立是至关重要的。
本文将重点介绍建立脑胶质瘤动物模型的步骤，希望能为进一步的研究提供参考。
1 概述部分的内容1.2 文章结构本文主要分为三个部分，分别是引言、正文和结论。
在引言部分，将简要介绍脑胶质瘤以及建立动物模型的必要性和意义。
通过引出问题和目的，为接下来的内容做铺垫。
在正文部分，将详细介绍脑胶质瘤的特点，以及建立脑胶质瘤动物模型的必要性和方法。
通过解析脑胶质瘤的病理生理特征和研究现状，为建模提供理论基础。
同时，介绍具体的建模步骤和关键技术，为读者提供全面的了解。
在结论部分，对全文内容进行总结，并强调建立脑胶质瘤动物模型的重要性和意义。
展望未来研究的方向和发展趋势，为相关领域的研究提供参考。
1.3 目的建立脑胶质瘤动物模型的目的是为了更好地理解脑胶质瘤的发病机制、病理生理过程以及潜在的治疗方法。
通过模拟人类脑胶质瘤在动物体内的发展过程，可以深入研究脑胶质瘤的发生、发展和转移机制，有助于找到新的治疗策略。
同时，建立脑胶质瘤动物模型也为临床试验提供重要的参考依据，促进基础科研和临床实践的有效结合，推动脑胶质瘤治疗领域的持续发展。
因此，本文旨在探讨建立脑胶质瘤动物模型的步骤和意义，为相关领域的研究提供参考和借鉴。
2.正文2.1 脑胶质瘤的特点脑胶质瘤是一种常见的颅内恶性肿瘤，它主要起源于神经胶质细胞。
脑胶质瘤通常具有高度异质性和侵袭性，不仅对患者的生命造成威胁，而且还可能引起神经功能障碍。
在临床上，脑胶质瘤的治疗难度较大，复发率高，预后通常较差。
脑胶质瘤的特点主要包括以下几个方面：1. 组织异质性：脑胶质瘤组织通常由不同类型的细胞组成，如星形细胞、少突胶质细胞等，使其在形态上呈现出多样性。
3d肿瘤细胞培养步骤
3d肿瘤细胞培养步骤三维细胞培养是一种模拟体内环境的技术，用于研究肿瘤细胞的生长、侵袭性和治疗反应等特性。
与传统的二维细胞培养相比，三维细胞培养可以更好地模拟组织或肿瘤内部的细胞间相互作用和信号传递，更准确地反映细胞在体内的生物学行为。
下面是三维肿瘤细胞培养的一般步骤：1.基质选择：选择一种适合于三维细胞培养的基质。
常用的基质包括基质凝胶（例如明胶、蛋白质基质或聚合物凝胶）和无基质的培养系统（例如自我聚合细胞培养系统）。
2.基质预处理：将所选基质进行预处理，例如用消毒剂消毒，并将其放入培养器中。
3.细胞处理：将细胞处理成单细胞悬浮液。
可以通过胰蛋白酶或酶解液等方法将细胞从培养皿中解离，然后通过离心或筛网将细胞沉淀或过滤收集。
4.细胞计数：使用细胞计数器或显微镜对收集到的细胞进行计数，以确定接种细胞的浓度。
5.细胞接种：将细胞悬浮液均匀地接种到预处理好的基质上。
可以使用不同的方法进行接种，如滴定法、注射法或转接法。
6.细胞培养：将接种好的细胞培养器放置在细胞培养箱或培养箱中，控制好适宜的培养条件，如温度、湿度和二氧化碳浓度等。
7.培养液更换：根据需要和实验要求，定期更换培养液，以保持培养环境的稳定。
8.细胞培养时间：根据实验的目的和要求，将细胞在三维培养体中培养适当的时间。
培养时间的长短取决于所研究肿瘤细胞的特性和所需的实验结果。
9.细胞观察和实验操作：根据实验的需要，进行细胞观察和相关实验操作。
可以使用显微镜观察细胞形态、细胞聚集和细胞-基质相互作用等。
也可以进行细胞增殖、侵袭性实验、药物筛选以及信号通路研究等。
10.结果分析和讨论：根据实验结果，进行结果分析和讨论。
可以通过图像分析、荧光检测、PCR分析等方法，对实验结果进行定量或定性的分析。
总之，三维肿瘤细胞培养是一种模拟体内环境的培养技术，可以更好地模拟细胞在体内的生物学行为。
通过合理选择基质、适当的细胞处理和培养条件，结合相关实验操作和结果分析，可以对肿瘤细胞的特性、行为和治疗反应等进行深入研究。
人体瘤细胞三维培养模型的建立与应用
人体瘤细胞三维培养模型的建立与应用在医学领域，肿瘤是一种常见的疾病，因为其复杂性和多样性，难以完全理解和治疗。
过去，研究人员通常使用二维培养方法来研究癌细胞的行为和生长规律，在这种理论下，研究中经常使用动物模型来验证其结果的准确性。
但是，这种方法具有欠缺真实环境的缺点，其所研究的过程存在很多与人类生物学特性不同的缺陷。
有鉴于此，人们逐渐认识到需要一种更真实的肿瘤研究方法。
三维培养细胞模型应运而生，人体瘤细胞三维培养模型是其中的一种。
该模型的构建方式不同于传统的二维培养方法，通过在支架或基质中种植癌细胞，使其从周围环境创造出更接近人体环境的三维组织结构，并在此之上分析细胞增殖、转移等生理活动。
人体瘤细胞三维培养模型的建立需要考虑许多因素。
首先，应选择合适的支架或基质，以便瘤细胞更好地定植在其中，并排列成均匀的细胞层。
其次，所选的细胞是十分重要的。
因为不同种类的癌细胞表现出的生物学特性有很大的不同，例如，有些癌细胞的增殖速度非常快，而有些则相对慢。
为了获得真实的模拟结果，应该选择与实际情况相似的种类。
同时，在种植之前，需要对细胞进行一定的前处理，以排除干扰结果的因素。
人体瘤细胞三维培养模型的优势在于其自主性，这是它超越传统方法的最大特点。
这种自主性使其能够在真实的背景中独立行动，并在无外界条件下自行进化。
同时，三维培养模型可以更真实地模拟癌细胞在人体中的发展、转移与响应药物等生理过程。
这种模型的愈合和转移效应的发展是病理生理学研究的重要方向。
培养模型可以为人们提供揭示瘤的发展规律，探索抗癌药物等药物筛选特性的基础。
但是，与普通二维培养相比，在三维培养中，液态成分和气氛的调节都是必须的，因此，问题的解决方案也增加了许多。
总之，人体瘤细胞三维培养模型是一种更真实、准确的癌细胞研究方法。
它可以更好地反映细胞生长环境和生物学特性，为癌症研究提供了更加全面的理论支持。
相信在未来，这种模型将会在癌症研究和临床应用中得到广泛的应用。
《2024年脑胶质瘤分割与三维重建方法研究》范文
《脑胶质瘤分割与三维重建方法研究》篇一摘要随着医学影像技术的不断进步，脑胶质瘤的诊疗日益依赖于精准的图像分割与三维重建技术。
本文旨在研究并探讨脑胶质瘤分割与三维重建的先进方法，为临床诊断和治疗提供可靠的依据。
首先，对当前的研究背景及意义进行阐述；其次，对所采用的技术方法和实验设计进行详细介绍；最后，通过实验结果分析，验证了所提方法的有效性和可靠性。
一、引言脑胶质瘤是中枢神经系统常见的肿瘤之一，其诊断与治疗对医学影像技术有着极高的要求。
脑胶质瘤的精准分割与三维重建是医学影像处理的重要环节，能够为医生提供更加直观、准确的肿瘤信息，从而有助于制定合理的治疗方案。
因此，研究并优化脑胶质瘤分割与三维重建方法具有重要意义。
二、文献综述近年来，随着医学影像技术的快速发展，脑胶质瘤的分割与三维重建方法得到了广泛研究。
目前，主流的方法包括基于阈值的分割、基于区域生长的分割、基于机器学习的分割以及三维重建技术等。
这些方法在一定的程度上提高了分割的精度和三维重建的效果，但仍存在一些挑战和局限性，如噪声干扰、边界模糊、计算复杂度高等问题。
因此，本研究旨在探索更加高效、准确的脑胶质瘤分割与三维重建方法。
三、方法与技术本研究采用了一种结合深度学习和三维重建技术的脑胶质瘤分割与三维重建方法。
具体包括以下步骤：1. 数据预处理：对医学影像数据进行去噪、增强等预处理操作，以提高后续分割的准确性。
2. 深度学习模型构建：采用卷积神经网络（CNN）构建分割模型，通过大量训练数据对模型进行训练和优化。
3. 脑胶质瘤分割：利用训练好的模型对医学影像进行脑胶质瘤的自动分割，同时结合手动微调，提高分割的精度。
4. 三维重建：基于分割结果，利用三维重建技术对脑胶质瘤进行立体展示，为医生提供更加直观的诊断依据。
四、实验与结果分析1. 实验数据与环境：实验采用公开的医学影像数据集，并在高性能计算机上进行实验。
2. 实验过程：首先对医学影像数据进行预处理，然后利用深度学习模型进行脑胶质瘤的自动分割，最后进行三维重建。
一种新型胶质瘤干细胞的三维培养方法及其应用[发明专利]
![一种新型胶质瘤干细胞的三维培养方法及其应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/bcb359f7b7360b4c2f3f642a.png)
专利名称：一种新型胶质瘤干细胞的三维培养方法及其应用专利类型：发明专利
发明人：吕东来,卞修武,陈叶苗
申请号：CN201410129815.X
申请日：20140402
公开号：CN103898058A
公开日：
20140702
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明利用三维胶原支架在低血清浓度下完成胶质瘤干细胞的富集培养，为胶质瘤体外试验研究提供了一种新型的，更接近体内真实环境的干细胞培养方法及应用。
所述三维培养方法中选用胶原作为制作3D支架的材料，胶原是细胞外基质最主要的成分，可为细胞提供良好的粘附与迁移环境，并具有良好的生物相容性、机械强度、降解系数和低免疫原性。
本发明研究多孔胶原支架三维培养对胶质瘤细胞干性的影响，探讨其机制，摸索更接近于体内肿瘤干细胞环境的靶向GSCs药物试验方法，并进行了药敏试验，继而对胶质瘤耐药机制进行进一步的研究，为丌发GSCs靶向药物提供了新的思路奠定基础，其成果具有一定的理论意义和应用价值。
申请人：中国人民解放军第三军医大学第一附属医院
地址：400038 重庆市沙坪坝区高滩岩正街30号
国籍：CN
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体外肿瘤细胞3D集体侵袭模型及其构建方法[发明专利]
![体外肿瘤细胞3D集体侵袭模型及其构建方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/f0603df488eb172ded630b1c59eef8c75fbf952f.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810570308.8(22)申请日 2018.06.05(71)申请人 南方医科大学地址 510515 广东省广州市白云区沙太南路1023号(72)发明人 梁莉 王斐斐 朱孝辉 丁彦青 (74)专利代理机构 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224代理人 万志香(51)Int.Cl.C12N 5/10(2006.01)(54)发明名称体外肿瘤细胞3D集体侵袭模型及其构建方法(57)摘要本发明提供了一种肿瘤3D集体侵袭模型及其构建方法，制备肿瘤多细胞类器官团，细胞中含有光转换荧光蛋白，将其包被于I型鼠尾胶中进行3D培养，体外模拟肿瘤细胞的生长状态、增殖方式和侵袭方式，该模型研究的是肿瘤多细胞球体类器官的集体侵袭作用，更能模拟肿瘤细胞在体内集体侵袭方式，采用激光共聚焦显微镜进行光漂白后，可以在缺乏特异性生物学标记物的情况下对集体侵袭细胞中的Leader Cells与Follower Cells进行区分，并可通过荧光流式分选获得目的区域的肿瘤细胞进行后续实验研究。
权利要求书2页 说明书7页 附图3页CN 108795872 A 2018.11.13C N 108795872A1.一种体外肿瘤细胞3D集体侵袭模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)培养得到肿瘤多细胞球体；所述肿瘤多细胞球体中的肿瘤细胞可表达光转换荧光蛋白；(2)向培养皿中加入I型鼠尾胶原与所述肿瘤多细胞球体的混合液；待凝固后，加入培养基、继续培养；(3)所述肿瘤多细胞球体在I型鼠尾胶原内伸展侵袭生长，至出现明显的集体侵袭细胞群时，使用激光共聚焦显微镜对所需区域的肿瘤细胞进行激光漂白荧光蛋白光转化，使所需区域的肿瘤细胞中的光转换荧光蛋白由绿色荧光转换为红色荧光；(4)加入胶原酶消化、离心、重悬，制得细胞悬液；(5)流式细胞仪分选以获得所需区域的肿瘤细胞。
《脑胶质瘤分割与三维重建方法研究》范文
《脑胶质瘤分割与三维重建方法研究》篇一一、引言脑胶质瘤是一种常见的中枢神经系统肿瘤，其分割与三维重建对于临床诊断、治疗计划以及预后评估具有重要意义。
随着医学影像技术的不断发展，如何准确地进行脑胶质瘤的分割与三维重建成为了研究的热点。
本文旨在研究并探讨脑胶质瘤分割与三维重建的有效方法，以期为临床应用提供理论支持和技术支持。
二、脑胶质瘤分割方法研究2.1 传统分割方法传统的脑胶质瘤分割方法主要依赖于人工操作，如手动勾画、阈值分割等。
这些方法虽然可以取得一定的效果，但耗时耗力，且受操作人员主观因素影响较大，难以保证分割的准确性和一致性。
2.2 机器学习分割方法随着机器学习技术的发展，基于机器学习的脑胶质瘤分割方法逐渐成为研究热点。
该方法通过训练模型学习胶质瘤的特征，实现自动分割。
常见的机器学习方法包括支持向量机、随机森林、深度学习等。
其中，深度学习在脑胶质瘤分割领域取得了较好的效果。
2.3 深度学习分割方法深度学习通过构建多层神经网络，自动提取图像特征，实现端到端的分割。
在脑胶质瘤分割中，深度学习模型可以学习到胶质瘤的形态、边界、纹理等特征，提高分割的准确性和鲁棒性。
常见的深度学习模型包括卷积神经网络、生成对抗网络等。
三、脑胶质瘤三维重建方法研究3.1 表面重建法表面重建法是脑胶质瘤三维重建的常用方法之一。
该方法通过提取胶质瘤的轮廓信息，构建表面模型，实现三维重建。
表面重建法具有计算量小、易于实现的优点，但难以反映胶质瘤的内部结构。
3.2 体素重建法体素重建法是一种基于体素的三维重建方法，可以更准确地反映胶质瘤的内部结构。
该方法通过将图像划分为多个体素，对每个体素进行分类，实现胶质瘤的三维重建。
体素重建法具有较高的精度和细节表现力，但计算量较大。
3.3 融合法融合法是将表面重建法和体素重建法相结合，取长补短，实现更准确的三维重建。
该方法首先通过表面重建法获取胶质瘤的大致形态，然后通过体素重建法对内部结构进行精细刻画，从而实现更准确的三维重建。
《脑胶质瘤分割与三维重建方法研究》范文
《脑胶质瘤分割与三维重建方法研究》篇一摘要随着医学影像技术的不断发展，脑胶质瘤的精准诊断与治疗变得越来越重要。
本论文提出了一种新型的脑胶质瘤分割与三维重建方法。
通过研究分析现有的脑胶质瘤图像分割技术和三维重建技术，我们旨在提出一种能够更精确、更快速地实现脑胶质瘤分割与三维重建的算法。
本文详细阐述了该方法的研究过程、方法、实验结果和结论，以期为相关领域的研究与应用提供有益的参考。
一、引言脑胶质瘤是一种常见的脑部肿瘤，对于患者的生存质量有着重大影响。
医学影像技术在诊断和治疗脑胶质瘤中发挥着重要作用。
然而，由于脑部结构的复杂性，脑胶质瘤的分割与三维重建一直是一个挑战。
为了更好地实现精准医疗，有必要对脑胶质瘤分割与三维重建方法进行深入研究。
二、研究现状与问题目前，脑胶质瘤的分割与三维重建主要依赖于医学影像技术，如MRI（磁共振成像）和CT（计算机断层扫描）。
然而，现有的分割方法往往存在精度不高、耗时较长等问题。
同时，三维重建过程中，由于脑部结构的复杂性，重建的准确性和效率也亟待提高。
因此，研究更有效的分割与三维重建方法是当前的研究热点。
三、方法与算法为了解决上述问题，我们提出了一种新型的脑胶质瘤分割与三维重建方法。
该方法主要包括两个部分：脑胶质瘤分割和三维重建。
（一）脑胶质瘤分割我们采用深度学习的方法，通过训练神经网络模型来实现脑胶质瘤的精确分割。
首先，我们收集大量的MRI图像数据，并进行预处理，包括去噪、对比度增强等操作。
然后，我们使用深度卷积神经网络（CNN）来训练模型，使其能够自动识别和分割出脑胶质瘤区域。
在训练过程中，我们采用了损失函数优化算法，以提高模型的准确性和鲁棒性。
（二）三维重建在完成脑胶质瘤的分割后，我们采用基于体素的三维重建技术来实现脑部结构的可视化。
我们首先将MRI图像中的每个像素或体素进行空间排列和定位，然后根据其位置信息和颜色信息生成三维模型。
为了实现更准确的重建结果，我们还采用了多模态影像融合技术，将不同影像数据的优势融合在一起，从而提高三维重建的准确性。
一种原代肿瘤细胞的3D培养体系及其培养方法和应用[发明专利]
![一种原代肿瘤细胞的3D培养体系及其培养方法和应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/a3cdca5b7f21af45b307e87101f69e314332faef.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910994591.1(22)申请日 2019.10.18(71)申请人 深圳优圣康医学检验实验室地址 518000 广东省深圳市龙华区观湖街道观澜高新科技园区观清路4号金美威第二工业园A栋5楼(72)发明人 喻德华 肖艳归 (74)专利代理机构 北京品源专利代理有限公司11332代理人 巩克栋(51)Int.Cl.C12N 5/09(2010.01)C12Q 1/02(2006.01)(54)发明名称一种原代肿瘤细胞的3D培养体系及其培养方法和应用(57)摘要本发明提供了一种原代肿瘤细胞的3D培养体系及其应用，所述3D培养体系包括下层凝胶、中层细胞基质和上层培养基；所述中层细胞基质包含改良的琼脂糖胶、含有添加因子的条件培养基和肿瘤细胞，所述改良的琼脂糖胶中包含低熔点琼脂糖、多聚赖氨酸和细胞外基质；所述下层凝胶包含琼脂糖胶和条件培养基；所述上层培养基为含有添加因子的条件培养基。
本发明提供的3D培养体系，能够筛选肿瘤细胞和正常上皮细胞，同时实现肿瘤细胞优势生长，培养成功率高，能够更加真实地反映整个肿瘤细胞群体的特性，精确地代表体内肿瘤的生长状况，将其应用于药敏检测所得到结果可靠性高，利于临床推广。
权利要求书2页 说明书13页 附图9页CN 110607279 A 2019.12.24C N 110607279A1.一种原代肿瘤细胞的3D培养体系，其特征在于，包括下层凝胶、中层细胞基质和上层培养基；所述中层细胞基质包含改良的琼脂糖胶、含有添加因子的条件培养基和肿瘤细胞，所述改良的琼脂糖胶中包含低熔点琼脂糖、多聚赖氨酸和细胞外基质；所述下层凝胶包含琼脂糖胶和条件培养基；所述上层培养基为含有添加因子的条件培养基。
2.根据权利要求1所述的3D培养体系，其特征在于，所述细胞外基质包含粘多糖、蛋白聚糖、层粘连蛋白、纤维蛋白、胶原蛋白或透明质酸中任意一种或两种以上的组合，优选为胶原蛋白、层粘连蛋白和透明质酸的组合；优选地，所述胶原蛋白为I型胶原蛋白。
一种人脑胶质瘤细胞系及其建立方法和应用[发明专利]
![一种人脑胶质瘤细胞系及其建立方法和应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/0ab6ec6dec3a87c24128c4a1.png)
专利名称：一种人脑胶质瘤细胞系及其建立方法和应用
专利类型：发明专利
发明人：秦宵然,王科,张一心,谢付波,王建红,闻丹忆,季从飞,赵奇红
申请号：CN201210299549.6
申请日：20120821
公开号：CN103627673A
公开日：
20140312
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种人脑胶质瘤细胞系及其建立方法和应用。
该人脑胶质瘤细胞系保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:C201115。
该人脑胶质瘤细胞系通过来自临床标本中的脑胶质瘤细胞经原代培养和传代培养建立，可直接用于体外药物筛选，或在哺乳动物中产生人脑胶质瘤，建立人脑胶质瘤动物模型，用于筛选治疗人脑胶质瘤的候选药物。
该人脑胶质瘤细胞系性状稳定，可稳定多次传代，体外传代至第50代性状保持稳定；可在体外、体内分析人脑胶质细胞瘤的发病机制，药物敏感性及转移性等相关特性，进而建立体外、体内两个相互关联的抗脑胶质瘤药物筛选平台，为人脑胶质瘤研究提供新的更接近于临床肿瘤生物学特性的实验材料。
申请人：上海睿智化学研究有限公司,南通市肿瘤医院
地址：201203 上海市浦东新区张江高科技园区哈雷路965号301室
国籍：CN
代理机构：上海智信专利代理有限公司
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一种基于生物3D打印构建三维胶质瘤组织的方法[发明专利]
![一种基于生物3D打印构建三维胶质瘤组织的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/ff58c4ad69eae009591bec3a.png)
专利名称：一种基于生物3D打印构建三维胶质瘤组织的方法专利类型：发明专利
发明人：崔晓峰,程卓,高桂芳
申请号：CN201711453257.2
申请日：20171228
公开号：CN108130313A
公开日：
20180608
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种基于生物3D打印构建三维胶质瘤组织的方法，步骤为：1）制备海绵支架材料，并检测其力学特性，利用生物3D打印技术将海绵加入到多孔板内，通过24h的冻干过程，再进行紫外灭菌2h以得到用于构建胶质瘤的三维组织支架；2）将人胶质瘤细胞用培养基混匀后3D打印到海绵支架材料上，然后在含有10%FBS培养液中培养7天，制备成三维胶质瘤组织工程化单元；3）检测三维胶质瘤组织的细胞活性和糖胺聚糖分泌量；4）采用生物等效性组化方法检测2D及3D第7天时的生长状态。
其优点在于：本发明有效促进胶质瘤组织功能的形成，为脑组织工程的科学研究以及脑癌的临床治疗提供有益的参考，并且为生物打印技术的临床化提供有效的方法及技术支撑。
申请人：杭州枫霖科技有限公司
地址：310000 浙江省杭州市萧山区宁围街道宁泰路27号江宁大厦1幢803室
国籍：CN
代理机构：北京一格知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：滑春生
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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910285959.7
(22)申请日 2019.04.10
(71)申请人 首都医科大学附属北京天坛医院
地址 100067 北京市丰台区南四环西路119
号
申请人 首都医科大学附属北京世纪坛医院
(72)发明人 李文斌 崔磊 王灿 李晓玉
(74)专利代理机构 北京思元知识产权代理事务
所(普通合伙) 11598
代理人 余光军 张瑞雪
(51)Int.Cl.
C12N 5/09(2010.01)
C12Q 1/02(2006.01)
(54)发明名称
单层或多层的3D脑胶质瘤细胞培养模型及
其构建方法和应用
(57)摘要
本发明公开了单层或多层的3D脑胶质瘤细
胞培养模型及其构建方法和应用。
包括：将脱细
胞的大脑组织冰冻处理后切片；切片冷冻干燥后
灭菌得到支架；将脑胶质瘤细胞接种到单片或多
片的切片支架上培养得到单层或多层的脑胶质
瘤细胞3D培养模型。
本发明所用构建3D脑胶质瘤
模型的脱细胞脑切片支架，脱除细胞完全，核酸
残留少，能部分保存原有脑基质的立体网状结构
和生物成分，适合脑胶质瘤细胞的生长，能模拟
体内脑胶质瘤细胞生长的微环境，多层的脑胶质
瘤细胞3D培养模型还能模拟体内脑胶质瘤的乏
氧和营养梯度梯度，更接近在体生长的脑胶质瘤
细胞，适用抗肿瘤药物的筛选、脑胶质瘤细胞与
肿瘤相关细胞共培养、脑胶质瘤细胞与ECM作用
机制的研究。
权利要求书2页 说明书6页 附图4页CN 110257335 A 2019.09.20
C N 110257335
A
权 利 要 求 书1/2页CN 110257335 A
1.一种单层或多层的3D脑胶质瘤细胞培养模型，其特征在于，其构建方法包括：
(Ⅰ)将实验动物的大脑组织或人的大脑组织脱去细胞得到脱细胞的大脑组织；
(Ⅱ)将脱细胞的大脑组织进行冰冻处理；
(Ⅲ)冰冻处理后的脱细胞大脑组织用冰冻切片机切片；
(Ⅳ)切片冷冻干燥后灭菌得到支架；
(Ⅴ)将脑胶质瘤细胞接种到单片的支架上培养得到单层的脑胶质瘤细胞3D培养模型；或者将脑胶质瘤细胞接种到多片叠加的多层支架上培养得到多层的脑胶质瘤细胞3D培养模型。
2.按照权利要求1所述的3D脑胶质瘤细胞培养模型，其特征在于，所述的实验动物是大鼠、小鼠或猪，优选为大鼠；所述脑胶质瘤细胞是LN229或U87。
3.按照权利要求1所述的3D脑胶质瘤细胞培养模型，其特征在于，步骤(Ⅰ)中将实验动物或人的大脑组织脱去细胞得到脱细胞的大脑组织的方法包括：
(1)将大脑组织在-80℃和常温下进行交替冻融；
(2)在摇床上，将冻融处理后的大脑组织用去离子水处理；
(3)在摇床上，将去离子水处理后的的大脑组织用1％Triton-X100处理得到初步脱细胞的脑组织；
(4)在摇床上，将初步脱细胞的大脑组织再用去离子水处理；
(5)在摇床上，将用去离子水处理后的大脑组织用4％的脱氧胆酸钠处理得到脱细胞的大脑组织。
4.按照权利要求3所述的3D脑胶质瘤细胞培养模型，其特征在于，步骤(1)中将大脑组织用1×PBS冲洗一遍后再于-80℃和常温进行冻融交替；优选的，所述的冻融交替是在-80℃放置20-45min再于常温放置20-45min，如此交替冻融4次；所述的常温是18-27℃的温度。
5.按照权利要求3所述的3D脑胶质瘤细胞培养模型，其特征在于，
步骤(2)中，将冻融处理后的大脑组织以30-120rpm的转速，室温下用去离子水处理1-8h；优选的，将冻融处理后的大脑组织以60rpm的转速，室温下用去离子水处理4h；
步骤(3)中将去离子水处理后的的大脑组织以30-120rpm的转速，4℃下用0.5-3％Triton-X100处理4-24h，得到初步脱细胞的脑组织；优选的，步骤(3)中将去离子水处理后的大脑组织以60rpm，4℃下用1％Triton-X100处理12h，得到初步脱细胞的脑组织；
步骤(4)中将初步脱细胞的大脑组织以30-120rpm，室温下用去离子水洗2-5遍，5-15min/遍；优选的，将初步脱细胞的大脑组织以60rpm，室温下用去离子水洗3遍，10min/遍；
步骤(5)中将用去离子水冲洗处理后得到的大脑组织在30-120rpm的转速条件下，室温下用2-6％的脱氧胆酸钠处理8-24h，得到脱细胞的大脑组织；优选的，步骤(5)中将用去离子水洗后得到的大脑组织在60rpm的转速条件下，室温下用4％的脱氧胆酸钠处理12h，得到脱细胞的大脑组织。
6.按照权利要求3所述的3D脑胶质瘤细胞培养模型，其特征在于，进一步将所得到的脱细胞的大脑组织进行下述处理：
(1)在摇床上，将得到的脱细胞的大脑组织以60rpm的转速，室温下用去离子水洗3遍，10min/遍。
(2)在摇床上，将步骤(2)用去离子水处理后的脱细胞的大脑组织以60rpm的转速，室温
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