分光光度法-紫外可见分光光度计分类及特点、常见故障及排除方法

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检查保险丝（或更换保险丝）
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检查计算机主机与仪器主机连线是否正常
➢ 自检时，某项不通过，或出现错误信息
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关机稍等片刻再开机重新自检
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重新安装软件后自检
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检查计算机主机与仪器主机连接是否正常
➢ 自检时出现“钨灯能量低”的错误
检查光度室是否有挡光物 打开光源室盖，检查钨灯是否点亮：如钨灯不亮，则关机，更换新钨灯 开机重新自检 重新安装软件后自检
镜纸由上而下擦拭干净，检视比色皿外无残留液体
➢比色皿放样品室时应注意方向相同 ➢使用完毕后需洗干净，晾干，防尘保存 ➢仪器室不得存放酸、碱、挥发性或腐蚀性等物质，以免损坏仪器。
紫外可见分光光度计维护及故障
02 紫外可见分光光度计常见故障及排除方法
➢ 打开主机后发现 不能自检主机风扇不转
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检查电源开关是否正常
收池，因为普通玻璃能吸收紫外光，石英吸收池也可用于可见光区。
➢ 检测器 光敏检测器的作用是将接受的光辐射信号转换为相应的电信号，便于测量。紫外可见分光光度计常使用的检测
器是光电倍增管，响应速度快，能检测10-8~10-9s的脉冲光，灵敏度高，比一般光电管高200倍。
➢ 信号显示器 显示装置或读数装置的作用就是检测电流的大小，并将有关分析数据显示或记录下来。
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检查样品是否有光解
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检查样品是否太稀
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检查比色皿是否玷污
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是否测试时光谱带太小
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周围有无强电磁场干扰
分光光度法
紫外可见分光光度计维护及故障
分光光度法
02 紫外可见分光光度计常见故障及排除方法
➢ 钨灯是好的，但自检时出现“钨灯能量高”的错误
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检查钨灯电源电压是否超过13V以上
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检查计算机有无病毒
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长范围约在150~400nm,使用波长200~360nm。
➢ 单色器 由入射狭缝、反射镜、色散元件、出射狭缝等组成。其中色散元件是单色器的关键部件。它的的作用是从光源
发出连续光谱中分离出所需要的单色光，常用的色散原件有棱镜和衍射光栅。
➢ 吸收池 吸收池又称比色皿，其材料有玻璃和石英2种。玻璃吸收池用于可见光区的测定，紫外光的测定必须用石英吸
紫外可见分光光度计分类及特点
03 显色和反应条件的选择
➢ 显色反应
使无色或浅色的待测组分转变为有色化合物的反应。
➢ 显色剂 与待测组分反应形成有色化合物的试剂
➢ 显色反应条件的选择
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显色剂用量 — 选择吸光度最大且基本恒定（曲线变化平坦处）的显色剂用量
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反应体系的酸度 — 选择吸光度最大且基本恒定（曲线变化平坦处）所对应的pH范围
重新安装软件后自检
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检查计算机与仪器主机的连线
➢ 自检时出现“氘灯能量低”的错误
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检查光度室是否有挡光物
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打开光源室盖，检查氘灯是否点亮；如果氘灯不亮，则关机，更换新氘灯。换氘灯时注意型号
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检查氘灯保险丝（一般为0.5A),看是否松动、氧化、烧断，如有故障，立即更换
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开机重新自检
➢ 出怪峰
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试样是否有问题
量分析、纯度分析、结构分析和定性分析。但主要应用与物质的定性和定量分析。
➢ 红外分光光度计
红外分光光度计主要应用与物质的结构分析目前常用的红外分光光度计主要有两种，
即色散型红外光谱仪和傅里叶变换红外光谱仪。与紫外—可见分光光度计一样，都源于吸收光谱原理。
➢ 原子分光光度计
原子分光光度计也是源于光谱吸收原理，它是测定化合物中痕量和超痕量金属元素
或少数非金属元素的有效方法。
➢ 荧光分光光度计
其能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振
等许多物理参数，从各个角度反映了分子的成键和结构情况，可用于液体、固体样品(如凝胶条、粉末)的光谱扫描。
紫外可见分光光度计分类及特点
01 紫外分光光度计的基本构造
光源
钨灯和卤钨灯（可见光区） 氢灯和氘灯（紫外光区）
分光光度法
紫外可见分光光度计常见故障及排除方法
分光光度计概述
分光光度法
01 分光光度计的基本原理 分光光度计的基本原理是基于物质对不同波长的光的选择性吸收，不同的物质都有各
自的吸收光谱，当光经色散后的光谱通过某一溶液时，其中某些波长的光就会被溶液吸收。 如图1根据朗伯-比尔定律，当一束平行单色光照射到一定浓度的均匀溶液上时，光强的减 小程度和入射光的强度，溶液的浓度及所透过溶液的长度成正比，即 ：
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检查比色皿是否被玷污
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光栅上是否有玷污,狭缝上有无灰尘
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检查周围有无电磁场干扰
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若待测试液在测定波长处有吸收，而显色剂等无吸收，则可用“试样空白”(不加显色剂)作参比溶液
➢选择适宜的吸光度
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用仪器测定时应尽量使溶液透Fra bibliotek度值在T =15～65%，相应地吸光度 A =0.80～0.20。
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当溶液的吸光度或透光率不在此范围时，可以通过改变溶液浓度及选择不同厚度的比色皿来控制
紫外可见分光光度计维护及故障
A = Log I0/I = Kbc
其中： T：透射比 A：吸光度
I0：入射光强 I：透射光强度
K：吸收系数，1/mol·cm
b：液层厚度，cm
c：溶液的浓度，mol/L
图1
分光光度计概述
分光光度法
02 分光光度计的分类
➢ 紫外—可见分光光度计 紫外可见分光光度计目前已是世界上使用最多、覆盖面最广的分析仪器，它可做定
01 紫外可见分光光度计注意事项
分光光度法
➢分光光度计需要放在相对干燥的环境下且不宜光照，使用的时候一定要将仪器放置在较为平稳的台面上 ➢仪器使用前需开机预热30分钟 ➢开关试样室盖时动作要轻缓 ➢不要在仪器上方倾倒测试样品，以免样品污染仪器表面，损坏仪器 ➢取比色皿时，手应该拿毛玻璃面的两侧，装盛样品以池体的3/4～4/5为度，使用挥发性溶液时应加盖，透光面要用擦
分光光度法
单色器
入射狭缝、出射狭缝、色散元件、准直镜
吸收池
检测器
玻璃；石英 PMT
信号显示器
紫外可见分光光度计分类及特点
分光光度法
02 紫外分光光度计的各构造的功能
➢ 光源 光源的作用是提供激发能,使待测分子产生吸收。常用的光源有热辐射光源气体放电光源。可见光区的光源一
般用钨灯，其发射波长范围在320~1000nm，使用波长360nm~1000nm，在紫外光区的光源一般用氢灯或氘灯，发射波
分光光度法
紫外可见分光光度计维护及故障
02 紫外可见分光光度计常见故障及排除方法
➢ 测量时吸光度很大
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检查样品是否太浓检查样品是否太浓
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检察样品室是否有挡光（波长设置在546nm左右，用白纸在样品室观察光斑）
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检查光源是否点亮
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关机，重新自检
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检查电源电压是否太低
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重新安装软件
➢ 吸光度或透过率的重复性差
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显色时间与温度
• 溶剂
— 一般尽量采用水相测定
分光光度法
紫外可见分光光度计分类及特点
04 测定条件的选择
➢ 选择适合的入射波长 ➢ 选择合适的参比溶液，参比溶液的选择一般遵循以下原则：
分光光度法
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若仅待测组分与显色剂反应产物有吸收，用纯溶剂（水)作参比溶液
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若显色剂或其它所加试剂在测定波长处略有吸收，而试液本身无吸收，用“试剂空白”(不加试样溶液)作参比溶液