dcfh-da活性氧检测原理

dcfh-da活性氧检测原理
DCFH-DA（Dichlorofluorescein Diacetate）是一种常用的细胞活性
氧（ROS）检测试剂，常用于测量细胞内ROS的水平。

下面将详细介绍DCFH-DA活性氧检测原理。

活性氧（ROS）是包括超氧阴离子（O2^-）、过氧化氢（H2O2）和羟
基自由基（·OH）等化学物质的总称，它们在细胞内被不同的酶系统产生，并在一定程度上参与调节细胞的生理功能。

然而，当细胞内ROS的产生量
超过细胞应对能力时，ROS会产生一系列不利于细胞健康的效应，如氧化
应激、炎症反应和细胞凋亡等，从而引发多种疾病的发生。

DCFH-DA是一种脂溶性染料，可以通过细胞膜进入细胞内。

一旦进入
细胞内，细胞内酯酶会水解DCFH-DA成为非荧光染料DCFH （Dichlorofluorescein）。

DCFH在细胞内没有荧光，但当与ROS接触时，ROS会氧化DCFH成为
强荧光荧光素（DCF）。

DCF既可以通过细胞色素c还原成DCFH，也可以
通过氧化还原酶系统产生交替的氧化还原反应。

这使得DCF在细胞内荧光
物质充分利用细胞内不同环境中ROS含量变化敏感性。

DCFH-DA活性氧检测的原理主要包括两个方面：首先，DCFH-DA通过
脂溶性能够迅速进入活细胞，然后在细胞中被酯酶水解为DFCH，DFCH可
以被氧化成强荧光的DCF。

然后，DCF可以发射可见光区的绿色荧光，并且荧光的强度和ROS的
浓度呈正相关关系。

因此，通过测量DFC发出的荧光信号的强度，可以间
接反映细胞内ROS的水平。

在实际的检测过程中，研究人员通常将DFCH加入到细胞培养基中，培养一段时间以使DFCH进入细胞内。

然后，用PBS（磷酸盐缓冲液）彻底地洗涤细胞，以去除细胞外的DFCH。

然后，通过显微镜或流式细胞术等方法观察细胞内的强荧光信号，并定量测量荧光强度。

通过与一系列的标准曲线比较，可以将荧光信号转换为ROS浓度。

综上所述，DCFH-DA活性氧检测利用DFCH的荧光属性实现了细胞内ROS水平的可视化和定量测量。

这种方法具有操作简单、高灵敏度和较好的选择性等特点，因此被广泛应用于生物医学研究和药物筛选领域。