ELISA原理及操作注意事项

ELISA原理及操作注意事项
ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用于检测抗体或抗原的实验技术。

其原理是将待测物（抗体或抗原）通过特定的酶标记结合物与固定在
试板上的配体结合，然后用底物与酶催化出彩色或荧光产物，从而通过测
量产物的光学密度或荧光信号来定量检测待测物的含量。

1.实验仪器消毒：实验前应将使用的仪器、试剂瓶和器皿进行消毒，
以避免实验中的污染。

2.条件优化：不同的ELISA实验条件可能有所不同，包括涂被物、孵
育温度和时间、洗涤时间等，必须根据实验需要进行条件的优化。

3.阻断剂：在ELISA实验中，通常需要加入阻断剂（例如牛血清蛋白、鱼胶等）来减少非特异性的结合。

不同的样品可能需要不同的阻断剂浓度
进行优化。

4.样品处理：对于待测物的检测，样品的处理包括稀释、加入试剂、
混合等步骤。

处理时要注意对待测物的保存温度、避免阳性和阴性样品污染，以及避免样品的重复冻融过程，这可能会降低样品的稳定性。

5.孵育和洗涤步骤：酶标记物与涂被物结合的步骤通常需要进行一定
的孵育时间和温度。

此外，洗涤步骤是为了去除不结合的物质，洗涤次数
和洗涤液的成分必须根据实验需要进行优化。

6.制备酶标荧光物：在选择酶标物时，需要确保酶的活性和稳定性，
并对荧光标记物的浓度和稀释倍数进行优化。

7.底物反应：根据所选择的酶，确定底物反应的最佳时间和温度。

避
免底物超过反应时间，以防止过度反应导致结果不准确。

8.光学密度或荧光信号测定：ELISA的结果通常通过测量产物的光学密度（OD）或荧光信号来定量。

在测定前，必须确保光学和荧光仪器的正常工作，并根据实验条件和要求进行仪器校准。

9.数据分析：根据实验设计和实验目的，将ELISA的结果进行统计学分析，包括计算均值、标准差、相关系数等。

总结来说，ELISA是一种常用的实验技术，其原理基于酶催化反应。

在操作ELISA时需要注意实验仪器的消毒、条件的优化、样品的处理、酶标反应的制备和测定、以及数据的分析等方面。

操作时最好遵循实验标准操作程序，同时根据实验需要对条件进行优化，以确保实验的准确性和可靠性。