流式细胞免疫染色步骤

流式细胞免疫染色步骤
流式细胞免疫染色是一种重要的细胞分析技术，适用于对细胞表
面分子的分析和定量。

通过将细胞与荧光标记的一抗和二抗结合，可
以识别和分析细胞表面分子的含量和分布情况。

以下是流式细胞免疫
染色的具体步骤。

1.细胞收集
首先需要收集待分析的细胞，并在适当的温度和湿度下保存。

细
胞可以通过培养、小鼠脾脏或骨髓中取出，或是从血液中抽取一定量
的细胞。

细胞应该在取出后不久进行分析，避免细胞受到环境变化而
死亡。

2.细胞预处理
在收集的细胞中，可能会包含一些干扰物质比如细菌、细胞残骸、红细胞等等，需要进行预处理。

常用的方法包括通过离心、洗涤、吞
噬和细胞培养消除这些干扰物质。

3.免疫染色处理
将细胞与荧光标记的一抗和二抗结合，可以识别和分析细胞表面分子的含量和分布情况。

一抗是特异性结合细胞表面分子的抗体，是特别定制的。

二抗一般是与一抗结合的抗体，这些抗体在尾部标有荧光染料或荧光素，能够为需要分析的分子上色。

通常情况下，需要先在正在进行的试验中加入一些阻止非特定结合的抗体混合物，以防止随机结合和假阳性发生。

接下来，加入已经标记的荧光二抗以及识别物的支持物质，并充分振荡混合物以达到荧光免疫染色反应的最佳状态。

4.吸附
经过一段时间后，已经标记的细胞会在流式细胞仪的样品管中被一个探测激光照射，并通过光电传感器检测出上色的细胞。

为获得更加精准的数据和结果，需要进行荧光染色分光计算，并在样本流传过区域时使细胞与固定的支持物表面发生吸附，以便进一步加强免疫染色的效果和稳定性。

5.流式细胞仪
经过上述步骤后，样本中的细胞被免疫染色后就可以进入细胞流
式仪进行分析了。

细胞流式仪可以自动计算、捕获、分离和检测荧光
标记的细胞，将结果以散点图和二维玫瑰图展示出来。

这样，分析人
员就可以根据数据结果对细胞表面分子进行定量分析和分类，进而进
行建立等级和对比分析，来获得更详细和准确的细胞图像。

总结：
流式细胞免疫染色是一种非常先进的细胞分析技术，可以帮助研
究人员更精确地定量细胞表面分子的含量和分布情况。

通过上述步骤，我们可以成功地为细胞染色并获得所需数据。