高效液相色谱法测定湖北栀子熊果酸含量

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高效液相色谱法测定湖北栀子熊果酸 பைடு நூலகம்量
曾令红
（黑龙江天辰药业有限公司，黑龙江哈尔滨１５００００）
摘要：本文采用高校液相测定了湖北栀子中熊果酸的含量，固定相为：安捷伦Ｃ１８（４．６ａｒｍ ×２５０ｍｍ，５ｕｍ），以乙腈一甲醇一水一磷酸一三乙胺（５０：３０：２０：０．０２：０．０４）为流动相，检测波长为２１０ｎｍ，流速１．０ｍＬ・ｍｉｎ一１，柱温：３０￣Ｃ。熊果酸在１００～５００ｇ－ｍＩ１范围内呈良好的线性关系。熊果酸的平均回收率为９９－３％，ＲＳＤ为０．６６％（ｎ＝６）；此方法简便、准确、重现性好，可用于湖北栀子中熊果酸的含量测
定。
关键遢湖北栀干锯果酸玲量栀子（学名：ＧａｒｄｅｎｉａｉａｓｍｉｎｏｉｄｅｓＥｌｌｉｓ）￣名：支子、越桃、山栀结果表明此方法的重现性良好。子、枝子、小卮子、黄栀子、山栀、木丹、鲜支、卮子、黄鸡子、白蟾，是２．７稳定性试验。茜草科植物栀子的果实。栀子的果实是传统中药，具有护肝、利胆、依照２．３项下供试品制备方法制备供试品溶液至于零摄氏度分别在０，０．５、１．０、１．５、２．０小时精密吸取供试品溶液注入液降压、镇静、止血、消肿等作用。在中医临床常用于热病心烦、湿热黄冰箱内，进样测定，供试品熊果酸峰面积积分值的ＲＳＤ为０．５８％。疸、淋证、肝火目赤、口舌生疮、扭伤肿痛等。《药性赋》记载： “ 味苦，相色谱仪，性大寒，无毒。沉也，阴也。其用有二：疗心中懊憔颠倒而不得眠，治结果表明熊果酸至于零摄氏度冰箱内至少在２小时内稳定。２．８回收率试验。脐下血滞小便而不得利。易老云：轻飘而象肺，色赤而象火，又能泻采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各６份，精密肿中之火。 ” 栀子具有保护肝脏、抑制肝癌细胞、防治动脉粥样硬化、抗血栓、镇痛解热、抗炎等作用。本文采用高校液相测定了湖北栀称定，分精密添加一定量的熊果酸对照品，按供试品制备所述方法子中熊果酸的含量。制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。６次１仪器与试药测定的平均回收率为９９．３％，ＲＳＤ为０．６６％。ＧＷ— ＵＮ超纯水器（北京普析通用仪器有限责任公司）；ＬＣ３０００２．９样品含量测定。高效液相色谱仪（安徽皖仪科技股份有限公司）；ＤＣ一０５０６Ａ高精度依照上述含量测定方法，测定湖北栀子三批样品，每批测定三液晶显示低温恒温槽（上海衡平仪器仪表厂）；ＳＰＣＣ一６一ＨＴＤ数码可次。调超声波清洗机（东莞市谱标实验器材科技有限公司）；奥豪斯Ｅｘ — ｐｌｏｒｅｒ专业型分析天平（奥豪斯仪器上海有限公司）；ＵＶ一５１００Ｈ型紫外可见分光光度计（上海元析仪器有限公司）。熊果酸对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈（现代东方（北京）科技发展有限公司海淀分公司）、冰醋酸（现代东方（北京）科技发展有限公司海淀分公司）、甲醇（格耐博生物科技（上海）有限公司）、磷酸（现代东方（北京）科技发展有限公司海淀分公司）、三乙胺（格耐博生物科技（上海）有限公司）、三氟乙酸（现代东方（北京）科技发展有限公司海３讨论淀分公司）。分别考察流动相为１％醋酸（Ａ）一乙腈（Ｂ），梯度洗脱（０ｍｉｎ，２含量测定１０％Ｂ；７ａｉｒｎ，３３％Ｂ；５５ｍｉｎ，３３％Ｂ），乙腈一甲醇一水一磷酸一三乙胺２．１色谱条件。（５０：３０：２０：０．０２：０．０４），乙腈（Ａ）一水（Ｂ）为流动相，梯度洗脱［０ｍｉｎ依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。色谱柱为安（１８％Ａ）２４ｍｉｎ（２２％Ａ）＿＋２６ｍｉｎ（２６％Ａ）一３０ｍｉｎ（３２％Ａ）一５０ｍｉｎ捷伦ｃ。规格为（４．６ｍｍｘ２５０ｍｍ，５ｕｍ）；流动相为乙腈一甲醇一水一磷（３３．５％Ａ）－－＊５５ｍｉｎ（３８％Ａ）１，流速为１．０ｍＬ／ｍｉｎ，乙腈一水一三氟乙酸酸一三乙胺（５０：３０：２０：０．０２：０．０４）；检测波长为２１０ｎｍ；流速１．０ｍＬ・（６：９４：０．０５），水一甲醇一三乙胺（６０：４０：０．０１），甲醇一水一冰醋酸（４５：ａｉｒｎ；柱温：２５￣Ｃ。理论板数按熊果酸峰计算应不得低于２０００。５５：１），乙腈一０．０８％磷酸溶液（２０：８０）不同比例的流动相，结果以乙２．２供试品溶液的制备。腈一甲醇一水一磷酸一三乙胺（５０：３０：２０：０．０２：０．０４）为流动相，供试品各取湖北栀子，低温干燥，粉碎，精密称取，加４０毫升甲醇，超声峰分离效果最好，故选用以乙腈一甲醇一水一磷酸一三乙胺（５０：３０：２０：提取ｏ．５小时，过滤，将滤液转移置５０ｍｌ棕色容量瓶中，用甲醇稀０．０２：０．４）０为流动相。此方法简便、准确、重现性好，可用于湖北栀子释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 ≮中熊果酸的含量测定。湖北栀子中熊果酸的含量按干品算不少于２．３对照品溶液的制备。０．３ｍｇｇ。试验发现对照品溶液、样品溶液要置于０￣Ｃ冰箱中贮存，测精密称取熊果酸对照品约５ｍｇ，用流动相溶解并稀释成每ｌｍｌ定时分析室的温度控制在２５￣Ｃ左右，以避免熊果酸分解对结果造成中含２００１ｘｇ的溶液，作为对照溶液。影响。２．４准曲线的制备。参考文献制备浓度为１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００￣ｇ・ｍＬ一［１］毛卫，贾玉杰，姜妙娜．栀子提取液对重症胰腺炎大鼠过氧化损伤的对照品溶液，分别精密吸取１０１￣Ｌ注入ＨＰＬＣ，记录色谱图。以峰的影响【Ｊ】．中国中西医结合外科杂志，２００４（２）．面积积分值Ａ（ｇ）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算［２］张德权，吕飞杰，台建祥，等．栀子黄色素对四氯化碳肝损伤小鼠回归方程。试验表明，熊果酸对照品在１００ — ５００￣ｇ・ｍＩ『范围内线性的影响ｆＪ】．营养学报，２００２（３）．关系良好。【３】王莎，周小琴，司徒少金，等．栀子药材环烯醚萜类和西红花酸类２．５精密度试验。成分ＨＰＬＣ指纹图谱研究［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２０１２（１９）．依照２．３项下制备对照品溶液，精密吸取熊果酸对照品溶液［４】杨奎，闵志强，石娅萍，等．栀子总环烯醚萜苷对脑出血大鼠炎症ｌＯＩｘＬ重复进样６次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的反应与神经元凋亡的影响［Ｊ］．中药新药与临床药理，２００９（１）．ＲＳＤ为０．８１％。结果表明，本实验精密度良好。［５］何兵，田吉，李春红，等．不同成熟期和不同部位栀子中４种主要２．６重珊陛试验。活性成分的含量变化叨．药物分析杂志，２０１０（５）．称取同一批的湖北栀子样品６份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的ＲＳＤ值，结果ＲＳＤ为Ｏ．５６％，