一起商品蛋鸡白血病诊断报告

山东畜牧兽医2020年第41卷
34 一起商品蛋鸡白血病诊断报告
薛晓阳王娟娟李明珠王雪敏李佳佳（华裕农业科技有限公司河北邯郸056000）中图分类号：S858.31 文献标识码：B 文章编号：1007-1733(2020)05-0034-02
2019年初山东某商品蛋鸡场130日龄的鸡出现零星死亡。

临床症状为腿部、脚部、肛周有血泡，疑似血管瘤，但剖检无肿瘤症状。

在200日龄检测11只弱鸡，无菌采集抗凝血进行病毒分离工作，培养2代，细胞上清液经ELISAP27抗原检测为60%以上阳性，该病例结合临床症状怀疑为J 亚型白血病病例。

禽白血病(A vianleukosis virus，ALV)是由禽C型反录病毒群的病毒引起的禽类多种肿瘤性疾病的统称，主要是淋巴细胞性白血病，其次是成红细胞性白血病、成髓细胞性白血病。

此外还可引起骨髓细胞瘤、结缔组织瘤、上皮肿瘤、内皮肿瘤等。

禽白血病的传播方式分为垂直传播及水平传播，其中经卵垂直传播是禽白血病的主要传播方式，家禽感染禽白血病后可造成鸡只生长发育迟缓、产蛋性能下降、免疫抑制等影响[1]。

同品种鸡的饲养呈现规模化、集约化发展，蛋鸡、地方品种鸡感染J亚群ALV的病例报道不断增多[2]。

禽白血病导致的经济损失主要有2个方面：一是产生肿瘤，导致鸡的死亡；二是产生非肿瘤综合征。

此外，禽白血病一当感染后，可引起鸡群的免疫抑制，会继发诸如马立克氏病、传染性法氏囊、鸡传贫等免疫抑制病，从而造成更严重的损失[3]。

本检测病例具有该特点，无明显肿瘤症状，就诊断过程做一分享。

1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 材料来源 DF-1细胞由山东农业大学肿瘤与免疫抑制病实验室惠赠。

肝素钠抗凝管购自江苏宇力医疗器械有限公司。

EDTA-K2抗凝管购自山东省成武县医用制品厂。

6孔细胞培养板购自美国康宁公司。

DMEM高糖培养基生产厂家gibco，产品货号8119159，有效期至2020.5。

0.25胰酶生产厂家gibco，产品货号2008319，有效期至2020.9.30。

青链霉素生产厂家gibco，产品货号2068817，有效期2020.1.30。

两性霉素B生产厂家procell，有效期至2020.6。

胎牛血清PAA品牌，生产日期SF181212。

1.1.2 实验设备二氧化碳培养箱品牌松下，型号MCO-18AC。

倒置显微镜品牌NIKON，型号TS2。

高压灭菌锅博讯品牌，型号YXQ-LS-50SII。

超纯水系统艾科浦公司生产，型号AWL-0501-H。

电热干燥箱，上海博讯生产，型号GZX-9140MBE。

超净工作台上海博讯公司生产，型号SW-CT-LFD。

医用离心机湘仪设备，型号H1850。

酶标仪BIOTeK品牌，型号ELX800，洗板机为BIOTeK品牌，型号ELX50。

移液器，eppendorf品牌。

1.1.3 试剂盒LLAg试剂盒为IDEXX产品，货号LP244，有效期至2020.5.18。

1.1.4 检测鸡11只商品蛋鸡。

1.2 方法
1.2.1 样品处理及接种细胞[4]（1）抗凝血：1500-2000r离心2min，取中间靠下层，注意不要取到红细胞.本检测使用12孔板接90μl，每孔加入过滤的肝素钠抗凝剂20μl(12.5U/ml)。

（2）接种完
则必须进行手术治疗。

对于不宜施行会阴部尿道造口术的案例，可采用耻骨前、后尿道造口，既可治疗原发性尿道阻塞一类疾病，可补救失败的会阴部尿道造口术[4]。

同时在手术后要注意药物治疗、食物治疗及细心照料，建议治疗后饲喂处方猫粮，纠正饮食习惯。

参考文献
[1] 孙勇, 李祥林, 孙锦霞. 猫下泌尿道疾病概述[J]. 山东畜牧兽医, 2017,38(2): 33-34.
[2] 李宗英, 杨荣. 猫自发性膀胱炎[J]. 北京农业, 2015(11): 101-102.
[3] 唐艳荣, 张海云, 齐海霞, 等. 猫泌尿系统综合征[J]. 中国畜牧兽医文摘, 2013,29(08): 154-155.
[4] 韩超, 齐长明. 公猫尿道造口术[J]. 中国兽医杂志, 2006,42(09): 44-45.
（收稿日期：2020–03–04）
2020年第5期（总第274期） 疾病防治
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样品后2h 更换维持液，用灭菌的PBS 清理清洗细胞板3次，每孔1ml/次，加入1%细胞维持液维持5d ，维持5d 后进行传代。

（3）共传2代，每一代的上清液留样检测。

1.2.2 细胞上清液白血病检测 试剂为IDEXX 产品，严格按照试剂说明进行。

2 检测结果
2.1 细胞上清液P27蛋白检测结果
表1 2代细胞培养液P27检测结果
孔 O.D. S/P 结果 阴性对照 0.041 - - 阴性对照 0.041 - - 阳性对照 0.726 - - 阳性对照 0.681 - - 1代-1 1.488 2.184 阳性 1代-2 1.526 2.242 阳性 1代-3 0.037 -0.006 阴性 1代-4 0.164 0.186 阴性 1代-5 0.844 1.212 阳性 1代-6 1.254 1.831 阳性 1代-7 0.035 -0.009 阴性 1代-8 1.147 1.669 阳性 1代-9 0.702 0.998 阳性 1代-10 0.238 0.297 阳性 1代-11
0.040 -0.002 阴性 1代(阴性对照) 0.037 -0.006 阴性 2代-1 1.429 2.095 阳性 2代-2 1.534 2.254 阳性 2代-3 0.061 0.030 阴性 2代-4 1.517 2.228 阳性 2代-5 1.329 1.944 阳性 2代-6 1.448 2.124 阳性 2代-7 0.140 0.149 阴性 2代-8 1.465 2.149 阳性 2代-9 1.501 2.204 阳性 2代-10 1.536 2.257 阳性 2代-11
0.064 0.035 阴性 2代(阴性对照)
0.037
-0.006
阴性
2.2 阳性率及S/P 值统计
表2 阳性率及阳性样品S/P 值统计
培养代数
阳性率(%) S/P 平均值 备注 第一代细胞培养物 63.6 1.49 第一代阴性对照 0 -0.006 第二代细胞培养物 72.7 2.16
第二代阴性对照
0 -0.006 IDEXX 产品S/P
值阳性判 定为≧0.2
3 讨论
（1）检测结果阳性鸡只占到检测鸡只63%以上，并且第一代样品S/P 值较高，远远高于试剂盒
判定标准，且第二代阳性样品S/P 值进一步提高，达到2.16，可以确定为强阳性。

可以证明该鸡群可能存在大比例阳性鸡只，生产性能可能会受到影响。

因为DF-1可以排除禽内源性白血病检出，因此检出的白血病属于致病性的可能性较大，因该检测没有进行后续病毒分型鉴定，但结合临床症状初步怀疑是白血病J 亚型的一个血管瘤症状。

（2）ALV-J 引发的肿瘤/血管瘤给中国养鸡业带来了很大的危害。

在过去十多年里，全国已报道了100多个ALV-J 毒株的分离鉴定，同时何爱飞等也有禽白血病所致血管瘤的报到[5]，王培坤等在三黄鸡临床血管瘤病例分离出A 亚群与J 亚群白血病病毒 ，说明临床血管瘤有一定的病例，但是在一般企业实验室诊断全面诊断技术较为困难，病理切片技术相对复杂，并且在结果读取专业性要求较高，一般企业员工对深层次分子理论掌握不够，PCR 方法白血病鉴定对分子理论要求较高，而细胞培养结合ELISA 联合诊断在企业应用较为适用。

（3）结合本案例白血病临床解剖不一定有明显的肿瘤症状，11只被检鸡只精神良好，但偏瘦，血管瘤也无很明显症状，临床从130d 开始出现零星死亡，持续不断，远高于正常死亡标准，从病毒分离结果，第一代便有高比例阳性检出，且S/P 值较高，因DF-1细胞可以排除内源性感染，因此初步怀疑J 亚群白血病的感染，同时也说明DF-1细胞结合ELISA 验证，高S/P 值也是鉴定标准之一，在临床检测可以攻毒重视。

参考文献
[1] 许玉静, 李翀, 韦景平等. 禽白血病P27抗原检测样品采集及处理要点[J]. 今日畜牧兽医, 2019. 7: 12.
[2] 秦卓明, 徐怀英, 马秀丽等. 从芦花鸡分离的J 亚群ALV 病毒及其gp85基因演化[J]. 浙江农业学报, 2014, 26(5): 1180-1185.
[3] 张婷婷, 符腊梅, 宁康健等. 草鸡白血病部分内脏肿瘤的病理学观察[J]. 安徽科技学院学报, 2013, 27(5): 12-15. [4] 王培坤, 秦丽莉, 韦平等. 三黄鸡临床血管瘤病例分离出A 亚群与J 亚群白血病病毒[J]. 动物医学进展, 2015, 36(3): 13-16.
[5] 何爱飞, 徐春志, 雷云华等. 蛋鸡血管瘤型禽白血病的诊断[J]. 动物医学进展, 2009, 30(1): 112-115.
（收稿日期：2020–01–13）。