高效液相色谱法测定蘑菇酸解液中氨基葡萄糖的含量

萄糖产品大多是通过贝类或其他海洋 Arium-Pro 型纯水系统，赛多利斯（德 资源的外壳酸水解生产的 [2]。目前， 国）；0.45 μm准确是 国）；SHA-2l 冷冻水浴恒温摇床，常
临床试验结果不一致的重要原因。因 州市瑞华仪器制造有限公司（中国）；
此，如何准确测定氨基葡萄糖的含量 FE 20 型实验室 pH 计，梅特勒 - 托利
成为一个值得考虑的问题。氨基葡萄 多（瑞士）。
糖的检测方法有分光光度测定法、薄
1.1.2 试剂
层色谱法、液相色谱或毛细管电泳与
D（- +）- 氨基葡萄糖盐酸盐，纯度
分光光度法、电导率法、安培法或荧 99%，Sigma-Aldrich 化学公司（美国）； 光检测法联用等 [3]，其中最常见的方 9- 芴甲基 -N- 琥珀酰亚胺基碳酸酯，
效液相色谱法，柱前衍生化是必要的。 1.2 色谱条件
目前使用的衍生化试剂有邻苯二甲醛、
ZORBAZ ODS C18 色 谱 柱（4.6 mm×
氯甲酸，9- 芴甲基氯甲酸酯、9- 芴甲 250 mm，5 μm）；柱温：40 ℃；流速：
基 -N- 琥珀酰亚胺基碳酸酯、丹酰氯、 0.8 mL/min；进样量：10 μL；检测波
本实验是利用三乙胺将游离氨基 葡萄糖释放出来，然后用 9- 芴甲基 -N琥珀酰亚胺基碳酸酯进行衍生化。因 此，释放反应的条件即三乙胺添加量、 释放反应时间和待测样品 pH 值，探讨 游离氨基葡萄糖的最佳释放条件对衍 生化和后续的定量测定具有重要意义。
2.1.1 三乙胺添加量和释放反应 时间对检测结果的影响
与应用领域，本试验采用高效液相色 11～15 min，A ∶ B=0 ∶ 100 → 70 ∶ 30；
谱法 - 紫外检测法对蘑菇酸解液中的 15 ～ 17 min，A ∶ B=70 ∶ 30。
氨基葡萄糖进行定量分析，以期为蘑 1.3 实验方法
菇源氨基葡萄糖生产提供理论基础和
氨基葡萄糖的测定方法是在 AOAC
6- 氨基喹啉基 -N- 羟基琥珀酰亚胺基 长：265 nm；流动相 A：0.05% 三氟
氨基甲酸酯类、2- 氨基苯甲酸和异硫 乙酸水溶液；流动相 B：乙腈；梯度
氰酸苯酯。为了进一步开发蘑菇的食 洗 脱：0 ～ 6 min，A ∶ B=70 ∶ 30；
用和药用功能，拓展蘑菇的产品功能 6 ～ 11 min，A ∶ B=70 ∶ 30 → 0 ∶ 100；
分析与检测
高效液相色谱法测定蘑菇酸解液中氨基葡萄糖的 含量
□ 张 品 贵州省农业科学院油菜研究所
摘 要：本文采用高效液相色谱法测定蘑菇酸解液中的氨基葡萄糖含量，为蘑菇酸解液的开发利用提供理论基础和技 术支持。样品经三乙胺释放游离氨基葡萄糖，9- 芴甲基 -N- 琥珀酰亚胺基碳酸酯衍生化，然后采用 ZORBAZ ODS C18 色谱 柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以 0.05% 三氟乙酸水溶液和乙腈为流动相进行梯度洗脱，检测波长为 265 nm，以保 留时间进行定性分析、外标法进行定量分析。结果显示，氨基葡萄糖线性范围为 0.02 ～ 1.20 mg/mL（r2=0.999 3）， 日 内 相 对 误 差 为 0.26% ～ 2.09%， 日 间 相 对 误 差 为 0.09% ～ 3.66%， 平 均 准 确 度 为（100.88±1.26）%， 回 收 率 为 99.94% ～ 101.25%。
技术支持。
官方方法 2005.01 的基础上进行了一
些小的修改。该方法基于 9- 芴甲基 -N琥珀酰亚胺基碳酸酯柱前衍生法。将 不同用量的三乙胺加入 1 mL 的氨基葡 萄糖标准品和待测样品中，反应一段 时 间 后， 取 100 μL 溶 液 加 入 0.5 mL 的 15 mmol/L 9- 芴甲基 -N- 琥珀酰亚 胺基碳酸酯溶液，在 50 ℃的超声波水 浴中反应 30 min，冷却至室温后，加 入 4 mL 流动相 A、B 体积比为 1 ∶ 1 的混合液，过 0.45 μm 滤膜后液相色 谱法检测。 2 结果与分析 2.1 游离氨基葡萄糖最佳释放条件
三乙胺添加量和释放反应时间对 检测结果的影响如图 1、图 2 所示。由 图 1 可知，氨基葡萄糖衍生物的高效 液相色谱峰面积随三乙胺添加量的增 大而增大，当三乙胺添加量由 0.75 μL 增加至 1.00 μL 时高效液相色谱峰面积 保持不变。加入 0.75 μL 三乙胺，游离 氨基葡萄糖在 10 h 内完全释放。随着 释放反应时间的延长 16 h，氨基葡萄 糖衍生物的最终高效液相色谱峰面积 无明显变化，具体见图 2。因此，最适
法是使用适当的衍生物，然后用分光 Carlo Erba Reagent（i 意 大 利 ）； 乙
光度法或荧光分光光度法进行液相色 腈，色谱纯，Acros Organic（s 美国）； 谱分离检测 [4-5]。由于氨基葡萄糖自身 三 乙 胺， 三 氟 乙 酸， 分 析 纯，Acros
缺乏紫外吸收发色团，因此，采用高 Organic（s 美国）；实验室用水，超纯水。
关键词：氨基葡萄糖；蘑菇酸解液；高效液相色谱法
氨基葡萄糖是一种水溶性的氨基 1 材料与方法
单糖，属于已糖胺类，是结缔组织和 1.1 仪器与试剂
胃肠粘膜内糖蛋白的重要组成部分。
1.1.1 仪器
由于氨基葡萄糖对人体关节软骨再生
1200 型高效液相色谱仪，安捷伦
作用显著，无不良反应，被广泛用于 （美国），配 DAD 检测器；AL 204 电 骨关节炎的治疗 [1]。市场上的氨基葡 子 天 平， 梅 特 勒 - 托 利 多（ 瑞 士）；
和 β），这 2 种异构体在水溶液中可 以 相 互 转 化 ， [6-7] 导 致 氨 基 葡 萄 糖 的
119 Jun 2021 CHINA FOOD SAFETY Copyright©博看网 . All Rights Reserved.
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基葡萄糖衍生物的高效液相色谱峰面
积最大。
2.2 工作曲线和方法的精密度
氨基葡萄糖有 2 种天然异构体（α