液相色谱-串联质谱检测饲料中16种氟喹诺酮类药物

缘乞科枚
Journal of Green Science and Technology
2021年4月第23卷第8期液相色谱一串联质谱检测饲料中16种氟唾诺酮类药物
林小贞，周嵋仪，贾晓菲,何思聪，招铉娟,谭淑铃
（中山市农产品质量安全检验所，广东中山528437）
摘要：为检测饲料中16种氟喳•诺酮药物的残留量，样品经酸化乙睛提取，除脂分散萃取净化剂净化，盐包盐
析分层后，以甲醇一0.1%甲酸水溶液作为流动相，用LCMS/MS法检测，同时检测了饲料中16种氟摩诺
飼类药物残留。

结果表明：16种氟喳诺飼类药物在质谱中呈现了较好的分离效果，三组加标的回收率在
64.31%〜98.08%之间，相对标准偏差在0.042%〜13.58%之间。

该方法快速、简单，能满足兽药残留分
析的要求，适用于测定饲料中16种氟奎诺酮类抗生素残留。

关键词：饲料；液相色谱一串联质谱法；氟奎诺酮类药物
中图分类号:S816文献标识码：A文章编号：1674-9944（2021）08-0113-04
1引言
氟座诺酮类（Fluoroquinolones,FQNs）药物属第三代座诺酮类抗菌药,其抗菌谱进一步扩大，抗菌活性更强，对革兰氏阳性菌如金色葡萄球菌、链球菌及革兰氏阴性菌等有效，也是兽医临床中广泛应用的抗革兰氏阳性菌与阴性菌及霉形体的有效抗菌药。

氟座诺酮类药物通过抑制细菌DNA的合成来杀灭细菌，属于杀菌剂，在临床上应用广泛，用于治疗各种细菌感染，还用于治疗支原体、衣原体感染和结核病。

因为其具有抗菌谱广、抗菌作用强、体内分布广、在体内药物浓度高、蛋白结合率低、血半衰期长、使用方便、疗效良好、药物不良反应轻微及价格便宜等特点m,在兽医临床和畜禽水产养殖中被大量应用。

现在市面上的鸡、鸭、鹅等畜禽产品基本都是来源于养殖场，养殖产业发展迅速，在这样的背景下,很多动物的疾病逐渐涌现出来，渐渐的衍生出了含有各类抗菌药物的饲料。

动物在食用了这类饲料后,治疗好疾病的同时也在体内产生了大量的药物残留，这对人类健康和环境污染都有一定的影响。

目前，测定FQNs的方法有酶联免疫法⑵、微生物法⑷、高效液相色谱法、高效毛细管电泳法间、高效液相色谱一串联质谱法"7等。

其中，液相色谱一串联质谱法具有选择性好、灵敏度高等优点，能使多种药物在色谱柱上都有很好的分离效果，因此近年来，高效液相色谱一串联质谱法在兽药残留的检测分析中被广泛应用。

本方法建立了一种使用液相色谱一串联质谱仪同时测定饲料中16种氟唾诺酮类药物的方法，为饲料中的兽物残留检测方法提供参考。

2材料与方法
2.1仪器、试剂与实验样品
（1）仪器：Agilent G6495三重串联四级杆质谱仪（美国Agilent公司），配Agilent1290高效液相色谱仪；Poroshell120EC—Cl8色谱柱（2.1X100mm,2.7pim,美国Agilent公司）；涡旋振荡器（德国IKA公司）；高速离心机（3-18KS,德国Sigma公司）；干式氮吹仪（HGC -24A,天津市恒奥科技发展有限公司）；超声清洗仪；电子天平；除脂分散净化管（15mL,安捷伦）；盐析包（4g无水硫酸钠+1g氯化钠）；微孔滤膜（0.22pm）；水为一级用水等。

（2）试剂：毗哌酸、麻保沙星、氧氟沙星、培氟沙星、依诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、单诺沙星、洛美沙星、二氟沙星、沙拉沙星、西诺沙星、奥索利酸、蔡喘酸、氟甲座等标准物质；甲酸（色谱纯）；乙睛（色谱纯）；甲醇（色谱纯）；乙酸乙酯（色谱纯）；磷酸氢二钠（AR500g）；柠檬酸（AR500g）；乙二胺四乙酸二钠（AR500g）。

EDTA-Macllvaine缓冲溶液（0.1mol/L,将625mL0.2mol/L磷酸氢二钠溶液与1000mL 0.1mol/L柠檬酸溶液混合，再称取60.5g乙二胺四乙酸二钠溶解）
（3）样品：鸡配合饲料，搅拌机粉碎处理，置于通风干燥处保存备用。

2.2标准溶液的配制
分别准确称取16种氟座诺酮类药物标准物质，置于容量瓶中，用甲醇溶解定容，配制成100M g/mL的标准储备液,再将标准储备液稀释，配成混合标准溶液，各组分为1“g/mL。

由于饲料样品的基质较为复杂，基质会对所检测的目标化合物存在一定的干扰，所以使用空白基质添加作标准系列曲线，其浓度为2、5、10、20、50、100ng/mL。

2.3样品前处理
称取样品2.00g于50mL塑料离心管中，加入2mL EDTA—Macllvaine缓冲溶液，涡旋30s,再加入10mL1.5%甲酸乙睛，涡旋1min,超声提取10min
收稿日期=2021-02-05
作者简介:林小贞（1993-）,女，助理工程师，主要从事食品及农产品质量安全检测工作。

通讯作者:贾晓菲（1988-）,女,工程师，主要从事食晶及农产品质量安全检测工作。

113
林小贞，等：液相色谱一串联质谱检测饲料中16种氟喳诺酮类药物环境与安全
后,10000r/min离心5min,上清液转移至已活化(加入3mL水活化)的除脂分散净化管中，涡旋1min, 10000r/min离心5min,将上清液全转移至另一离心管中，加入盐析包，振荡5min,10000r/min离心5min,取2mL±清液于试管中，于40°C下氮气吹干。

用1mL 初始流动相复溶，涡旋震荡，过0.45“111滤膜后，上机检测。

2.4仪器检测方法
2.4.1液相色谱条件
色谱柱：Poroshell120EC—Cl8 2.1X100mm, 2.7fim；柱温40°C;流速0.4mL/min；进样量1.00#L；流动相：A为甲醇,B为0.1%甲酸水；流动相梯度洗脱条件见表1。

表1分离16种氟瞳诺酮药物的洗脱梯度时间/m in A（甲醇）/%B（0.1%甲酸水）/%
0.0080.0020.00
1.0080.0020.00
2.0074.0026.00
3.0072.0028.00
4.0053.0047.00
5.0045.0055.00
6.003
7.0063.00
6.503
7.0063.00
7.0010.0090.00
&0080.0020.00
2.4.2质谱条件
电喷雾离子源(AJS ESI)，正离子模式扫描;多反应监测(MRM),离子温度：350°C；干燥气流速14L/min；雾化器压力30psi；鞘气温度350°C；鞘气流速11L/min。

16种氟唾诺酮药物的详细质谱参数见表2,总离子流图见图lo
3结果与分析
3.1样品前处理提取方法的优化
饲料的原料来源比较多，包扩大豆、玉米、豆粕、鱼粉、杂粕、氨基酸、乳清粉、肉骨粉、油脂、谷物、饲料添加剂等十余个品种的饲料原料，因此在检测兽药残留的过程中，干扰物质较多，所以选择一种比较好的提取液尤为重要，本实验分别比较了 1.5%甲酸的乙睛溶液、乙酸乙酯、1%甲酸甲醇3种提取液，图2为3种提取液的回收率比较，实验结果显示1.5%乙酸的乙月青溶液提取效果较好。

3.2质谱条件的优化
分别在正、负离子模式下对16种氟座诺酮类药物进行扫描，发现在正离子模式下响应强度更强。

在甲醇-0.1%甲酸水溶液(80:20,V:V)等度流动相条件下，采用MassHunter Optimizer(自动参数优化软件)进行优化，确定母离子和子离子，优化CE电压。

3.3色谱条件的优化
实验比较了甲醇一水、乙睛一0.1%甲酸水溶液、甲醇一0.1%甲酸水溶液为流动相时待测化合物的峰型和响应值，实验表明在以甲醇一0.1%甲酸水溶液为流动相时各种药物的峰型优于另外两种流动相条件,且响应值也略高于其他两种流动相下的响应值，因此，本实验采用甲醇一0.1%甲酸水溶液作为流动相。

表216种氟It诺酮药物残留测定的值质谱测定条件参数化合物定性定量碎裂碰撞保留时名称离子对离子对电压能量间/min 二氟沙星400.01>356,1400.01>29938017 3.459 400.01>29929
沙拉沙星386.01>368386.01>29938021 3.759 386.01>29933
麻保沙星363>320363>34538015 2.010
363>34519
氧氟沙星362.0>31&1362.0>261.038017 2.482 362.0>261.029
恩诺沙星360.01>316.2360.01>245.138016 3.086 360.01>245,125
单诺沙星358.l>340.1358.1>82.138025 3.167 358.1>82.149
洛美沙星352.0>265.0352.0>30&138013 3.286 352.0>30&125
培氟沙星334.01>290,1334.01>233,138017 2.498 334.01>233,129
环丙沙星332.01>314332.01>245.138025 2.911 332.01>245,129
依诺沙星321.01>303321.01>23238021 2.566 321.01>23245
诺氟沙星320.01>301320.01>276.138021 2.699 320.01>276,117毗哌酸304.11>286304.11>21738021 1.772 304.11>21725
西诺沙星263.01>217263.01>18&938025 4.657 263.01>18&933
奥索利酸262.01>216262.01>16038033 4.937 262.01>16045
氟甲座262.01>202262.01>12638037 5.879 262.01>12657
蔡睫酸233.01>215233.01>186.938013 5.667 233.01>186,925
3.4方法学验证
3.4.1标准曲线和检出限
方法采用空白基质添加的方法作标准曲线，其浓度为2、5、10、20、50、100ng/mL,通过定量软件分析得出16种药物的标准曲线与其线性回归方程(表3)。

结果表明，16种氟座诺酮类药物的标准曲线有较好的线性关系。

样品的检出限以3倍信噪比计算，得到16种化合物的检出限范围为0.035〜1.127“g/kg,满足国内和国际对氟座诺酮类药物残留监控的要求。

3.4.2回收率和精密度
为确保方法的可行性，对空白饲料进行3个浓度水平的添加，并且分别做6个平行样品，同时做空白对照，分析结果见表4。

3.5实际样品的测定
随机抽取5间饲料店面的饲料样品，采用本实验方法进行16种氟座诺酮类药物含量的测定，结果均未检
114
2021年4月绿色科技第8期
出。

考虑在实际生产中，一般在投喂前才在饲料中加入料,所以在这个环节中存在一定的监控风险。

各种药物添加剂，而饲料样品抽取的是未开封的包装饲
Counts vs.Acpuisition Time(min)
注•毗哌酸;2.麻保沙星;3.氧氟沙星;4.培氟沙星;5.依诺沙星;6.诺氟沙星;7.环丙沙星;&恩诺沙星,9.单诺沙星JO.洛美沙星；11.二氟沙星订2.沙拉沙星;13.西诺沙星；14.奥索利酸;15.蔡睫酸;16.氟甲瞳
图1 16种氟嚨诺酮药物的总离子流
酸沙沙沙沙沙沙沙抄沙抄抄沙利酸哇星星星星星星星星星星星星權
1.5%甲義乙翩-■-1%甲酸甲醇
乙酸乙酣
图23种提取液的回收率比较
表3 16种氟瞳诺酿药物的线性方程、相关系数与检出限化合物线性回归方程相关系数R2检出限毗哌酸Y=896ia8X-11957.550.99910.598
麻保沙星Y=H346.18X-7456.410.99950,035
氧氟沙星Y=24136.74X—21214.600.99960.106
培氟沙星Y=10387・76X—2738.650.99990.211
依诺沙星Y=9837・67X—6286.960.99940.633
诺氟沙星Y=5209・88X—6441.270.99940.489
环丙沙星Y=4506・82X—6370.370.99920.269
恩诺沙星Y=5349.61X—488.030,99970.225
单诺沙星Y=10709.79X-10827.370.99930.803
洛美沙星Y=20209.70X-11380.550,99960.074
二氟沙星Y=12123.78X-13609.910.99930.094
沙拉沙星Y=6671・56X-988&940.99880.709
西诺沙星Y=3897.45X-3001.080.99950.814
奧索利酸Y=1848・28X-97&650.99950.236
奈睫酸Y=4072.43X-910・400.99991,127
氟甲壓Y=3710.03X-1659.640.99970.079
4结论
本实验建立了液相色谱一串联质谱法测定饲料中16种氟嗤诺酮类药物残留的方法。

方法操作简单，快速可靠、灵敏度高、重现性好，满足兽药残留检测分析的要求，适用于饲料中氟唾诺酮类药物的残留检测。

表4饲料中16种氟瞳诺酮药辆的平均加标回收率与精密度化合物
添加量
/(ng/mL)
平均回收率
/%
相对标准偏差
RSD/%毗哌酸596.7112.58
1581.81 3.58
5071.3411.55
麻保沙星590.550.042
1576.41 1.91
507&5013,61
氧氟沙星593.8813.58
1579.480.56
5075.437.93
培氛沙星586.6911.06
1577.948.81
5075.6611.30
依诺沙星581.6011.59
1571.62 1.80
506&2912.65
诺氟沙星593.0911.08
1583.720.86
5073.3012.29
环丙沙星592.95 4.73
1581.52 4.67
5069.0911.28
恩诺沙星579.4311.98
1581.700.36
5075.7110.26
单诺沙星581.93 2.31
1574.01 5.13
5072.33 6.00
洛美沙星584.5111.41
1574.11 4.29
5073.3413.30
二氟沙星592.65 6.36
1580.82 2.49
5073.5812.80
沙拉沙星59&08 2.78
115
林小贞，等：液相色谱一串联质谱检测饲料中16种氟喳诺酮类药物环境与安全续表4
化合物
添加量
/(ng/mL)
平均回收率
/%
相对标准偏差
RSD/% 1582.45 3.84
5070.737.64
西诺沙星594.53 4.03
1576.31&67
5069.4010.06奥索利酸582.1912.99
1566.46 3.74
5064.319.94奈旄酸584.1912.52
1574.787.63
5079.33 6.20氟甲摩577.19 5.74
1571.48 2.36
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Determination of16Fluoroquinolones Residues in Feeds—Method Using
Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry
Lin Xiaozhen,Zhou Wanyi,Jia Xiaofei,He Sicong,Zhao Yujuan,Tan Shuhua
(Zhongshan Agricultural Products Quality and Safety Inspection Institute,Zhongshan9Guangdong528437,China)
Abstract:A liquid chromatography tandem mass spectrometry(LCMS/MS)method for the determination of16Flu­oroquinolones Residues in feeds was established・Samples were extracted by acidified acetonitrile and purified by de­greasing dispersion purifying agent.After salt一out stratification,methanol一0.1%formic acid aqueous solution was used as the mobile phase・LCMS/MS method was used to detect16fluoroquinolones in feed residue.The results showed that16kinds of fluoroquinolone drugs showed good separation effect in mass spectrometry.The recoveries of three groups ranged from64.31%to98.08%,and the relative standard deviations ranged from0.042%to13.58%. The method is rapid and simple,which can meet the requirements of veterinary drug residue analysis,and it is suit­able for the determination of16fluoroquinolones residues in feeds.
Key words:feeds；liquid chromatography tandem mass spectrometry(LCMS/MS)method；fluoroquinolones
(上接第112页)
Study on Preparation of Sludge Adsorbent Modified by Carboxymethyl Chitosan and its Adsorption Performance for Methylene Blue
Liang Hao1,Xian Enqi1,Li Hao1,Ling Chenming1,Pan Zhihui1,2
(1・School of Civil Engineering,Guangzhou University,Guangzhou,Guangdong510006,China;
2.Key laboratory for Water Quality and Conservation of the Pearl River Delta,Guangzhou University,
Guangzhou,Guangdong510006,China)
Abstract:In this study,carboxymethyl chitosan(CMC)from natural sources was loaded on the surface of sewage sludge adsorbent(SSA)after carbonization to prepare an adsorbent(CMC一SSA)with high efficiency for removing the dye methylene blue(MB).The adsorption kinetics and thermodynamics of MB by CMC—SSA and the effect of pH on the adsorption efficiency were investigated・The results showed that the adsorption performance of CMC—SSA was greatly enhanced after the modification of SSA；Furthermore,combined with specific surface area and pore structure,FT一IR and Boehm titration,it is concluded that the adsorption mechanism of CMC—SSA is mainly chemical adsorption,and the loading of CMC enhances the SSA chemical adsorption capacity.
Key words:methylene blue；adsorbent；carboxymethyl chitosan；chemical adsorption
116。