第三章 药物的杂质检查.ppt

四、杂质的限量检查（limit test）
杂质的限量：药物中所含杂质的最大允许量。
限量表示(g/g) ：百分之几（%） 百万分之几（10-6）
限量检查： 检查所含杂质是否超过杂质限量的规定，
通常不要求测定其准确含量。
杂质限量检查方法
杂质的限量检查多数采用对照法，也可采用灵敏度法和比较 法 对照法：取一定量 (C·V) 与被检杂质相同的纯品或对照品配 成对照品溶液，与一定量(S)药物供试溶液在相同条件下处理 后，比较反应结果，以确定杂质含量是否超过规定。 采用该法注意平行原则
中国药科大学 药分教研室
第三章 药物的杂质检查
Test for purity
第三章 药物的杂质检查 Test for purity
药物杂质与限量 杂质的检查方法 药物中一般杂质检查 特殊杂质检查与鉴定方法
第一节 药物杂质与限量
一、药物杂质与纯度
药物的纯度：是指药物的纯净程度，药物中 的杂质是影响药物纯度的主要因素。
作用生成红色配位离子。
2Fe3+ + 2HSCH2COOH
Fe2+ + 2HSCH2COOH Fe(SCH2COOH)2 2OH-
2Fe2+ + SCH2COOH + 2H+ SCH2COOH
Fe(SCH2COOH)2 + H+ [Fe(SCH2COOH)2 ]2- + 2H2O
2. 说明
在加巯基醋酸溶液前，先加枸橼酸溶液，使其与铁离 形成配位离子，以免在氨碱性溶液中产生氢氧化铁沉 淀。（此法灵敏度比较高，但试剂较贵）
第三节 一般杂质检查方法
一 、氯化物（Chloride ）检查 原理：
药物：Cl AgNO3 H N O3 AgCl白色浑浊
对照：NaCl（c,V） AgNO3 HN O3 AgCl白色浑浊
条件：硝酸酸性条件（稀硝酸10ml） 反应试剂：硝酸银试液 1.0ml 杂质对照：NaCl (10µg/ml) 灵敏度范围： 50~80 g / 50ml 讨论：选择稀硝酸反应条件的意义。
第二节 杂质检查方法
药物中杂质的检查主要是依据药物与杂质在物理性 质和化学性质上的差异来进行。
一、杂质的研究规范
1、有机杂质在药品质量标准中的项目名称 杂质的化学名称、某类杂质的总称、检测方法。
2、杂质项目的确立 针对性
3、杂质限度的确定 可根据原料药每日剂量来制定质控限度。
4、是HPLC)
NaCl对照液
葡萄糖
稀硝酸10ml 稀硝酸10ml 硝酸银1ml 硝酸银1ml
对照液浊度 > 供试液浊度
杂质限量的计算：
杂质限量=
杂质最大允许量 供试品量
杂质对照液浓度 供试品量
其体积
式中：
L C V 100% S
L 杂质的限度（%） C 对照液浓度 （g/ml） V 对照液的加入体积（ml) S 供试品的量(g)
2．条件： [SO42-] 0.1mg～0.5mg/50ml, 即相当于标准 硫酸钾溶液1～5ml。 酸 度 稀盐酸2ml/50ml。
3．干扰的排除 供试品有色：可采用内消色法。
三、铁盐检查法
（一）硫氰酸盐法
1．原理 Fe3+ + 6SCN-
HC{lFe(SCN)6-]3- 红色
2．条件：[Fe3+] 0.01mg～0.05mg/50ml, 即相当于标准铁
溶液1～5ml。
酸 度 稀盐酸4ml/50ml。
3．干扰的排除
（1） 当有Fe2+存在时，加氧化剂过硫酸铵氧化Fe2+成Fe3+。 （2）当供试液管与对照溶液管色调不一致，或所呈硫氰酸铁 的颜色较浅不便比较时，可分别移入分液漏斗中，加正丁醇或 异戊醇提取，分别取提取液比色。
(二）巯基醋酸法
1. 原理 巯基醋酸还原Fe3+为Fe2+，在氨碱性试液中与Fe 2 +
C2H5 C2H5
N
CH3
供试品10µl N-甲基哌嗪10µl
50mg/ml
50µg/ml
液或水之间的色差值
K2Cr2O7 黄、绿 CoCl2 橙黄,橙红 CuSO4 棕红
十二、溶液澄清度检查法
是检查药物中的微量不溶性杂质。常采用与浊 度标
准液比浊的方法进行检查。浊 度标准液制备原理：
(CH2)6N4 + 6H2O HCHO + H2N-NH2
6HCHO + 4NH3 H2C=N-NH2 + H2O 甲醛腙白色混浊
2.贮藏过程中产生
外界条件影响：日光、空气、温度、湿度、 微生物等引起药物产生
例如： 麻醉乙醚 O 醛及有毒的 过氧化物
三、杂质的种类
按照来源分类： (1)一般杂质： （也称信号杂质）
在多种药物中普遍存在的杂质。 (Cl- SO42- Pb As Fe) (2)特殊杂质： （也称有关物质） 个别药物的生产及贮藏中引入的杂质。 按毒性分类： 有害杂质 ( Pb As )：考察生产工艺， 信号杂质 （Cl- SO42-）：反映药物的纯度水平 按化学类别和特殊性分类： 有机杂质、无机杂质、残留溶液
化学性质上差异：
酸、碱性质的差异 氧化还原性的差异 杂质与一定试剂产生沉淀 杂质与一定试剂产生颜色反应 杂质与一定试剂反应产生气体
旋光性质的差异
Ch.P规定黄体酮在乙醇中的比旋度为：＋186°～198°
黄体酮及其中间体的比旋度（溶剂：乙醇）
化合物
浓度%
黄体酮
1～1.4
醋酸双烯醇酮 0.9
醋酸妊娠烯醇酮 ～1
1法 1法 1 法或2 法 1法或2 法 1 法或2 法 1法或2 法 2法
0.038 0.02 0.0002 0.089
0.006 0.06 0.001
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十一、溶液颜色检查法
溶液颜色检查法是控制药物中有色杂质量的方法。中国药典 收载有三种方法：
1. 标准比色液进行比较的方法,标准比色液 2. 分光光度法 3. 色差计法 通过测定供试品与标准比色
四 、重金属（Heavy Metals ）的检查
1、第一法 硫代乙酰胺法
适用对象：溶于水、稀酸和乙醇的药物
原 理：
Pb2+ + 醋酸盐缓冲液
+ 硫代乙酰胺(CH3CSNH2) PbS (黄~ 棕黑)
条件：
介质：醋酸盐缓冲液 (pH 3.5) 2ml
试剂：硫代乙酰胺 (CH3CSNH2) 2ml
杂质对照液： PbNO3
C2H5
S C Ag
S
白田道夫法
As3 SHnC Cll2 As
有孔玻璃旋塞
检
导气管
查
砷
8cm 18cm
盐
仪
器
装
置
AsH3发生瓶
六、干燥失重 （ loss on drying）
干燥失重物主要指水分 (结晶水或吸附水) 或挥发性物质
恒温干燥 干燥剂干燥 减压干燥 热分析法 thermal analysis,TA
V = 2.0 ml
注意：供试品如有色，需经处理后方可检查。
1. 外消色法：在对照管中加稀焦糖溶液或其他 无干扰的有色溶液。 2. 内消色法。 3. 改用第四法，微孔滤膜过滤法。
第二法：炽灼后的硫代乙酰胺法
适用对象：含芳环或杂环的有机药物， 如苯佐卡因、甲硝唑
第三法: 硫化钠法
适用对象：溶于碱的药物或在稀酸产生沉淀的 药物，如磺胺类、巴比妥类
(10µg/ml)
灵敏度范围： 10~20 g / 27ml
例 2：
葡萄糖中重金属的检查：样4.0g溶于23ml水，加入2ml缓 冲盐，依法检查，其重金属不得超过 百万分之五，取标 准铅（ 10μg/ml），v=?
C= 10μg/ml L= 5 10-6 S=4.0g
5 106 10 V 106 4.0
温度℃ 20～25
20 常温
[а]D +193°±4° -31°±2° +20°±2°
肾上腺酮及肾上腺素的紫外吸收曲线
HO HO
O
HO
C CH2NHCH3
HO
OH CH CH2NHCH3
λmax310nm
220
260
300 nm
吸附或分配性质的差异 薄层色谱法 TLC
原点至斑点中心的距离
Rf
级号
不同级号浊度标准液
0.5
1
2
3
4
浊度标准原液（ml） 2.5 水 （ml） 97.5
5.0 95.0
10.0 90.0
30.0 70.0
50.0 50.0
第四节 特殊杂质检查
物理性质上差异： 嗅味及挥发性的差异 颜色的差异 溶解行为的差异 旋光性质的差异
吸附或分配性质的差异 对光选择吸收性质的差异
重量方法进行检查。
残渣及坩埚重 — 坩埚重
残渣% =
× 100%
供试品重
九、易炭化物检查法
是检查药物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的 微量有机杂质。这类杂质多数结构未知，常采用与标 准比色液比色的方法进行检查。(标准比色液为CoCl2, K2Cr2O7, CuSO4)
十、残留溶剂测定法
主要检查药物在生产过程中引入的有害的有机溶剂(如 苯、氯仿、二氯甲烷、吡啶、甲苯、环氧乙烷、二氧六环 等）。常采用气相色谱法方法进行检查。常用的方法有二种： ① 直接进样法和②顶空进样法（试用于挥发性大的样品测定） 色谱系统性试验的要求：
(1) N＞1000; (2) 用内标法测定时，要求R＞1.5; (3)外标法测定时，待测物的峰面积的RSD＜10%。
有机溶剂
二氧六环 吡啶 苯 甲苯 氯方 二氯甲烷 环氧乙烷
残留有机溶剂测定的方法和限量
柱温（℃） 内标 物
测定方法
限量（%）
170 170 170 170 140
140 80
吡啶 二氧六环 甲苯 苯 二氯甲烷
注 意：
1. 比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。 2. 平行操作原则。 3. 若供试品有色，需经处理后方可检查。
）干扰及排除
供试品有色处理方法
（1）外消色法：如高锰酸钾中氯化物的检查， 可先加乙醇适量，使其还原褪色后再依法检查。
（2）内消色法：倍量法
。二、硫酸盐检查法
1．原理 是利用SO42-在盐酸酸性溶液中与氯化钡试液作用， 生成硫酸钡的白色浑浊液，与一定量标准硫酸钾溶液 在相同条件下生成的硫酸钡浑浊液比较，以判断供 试品中硫酸盐是否超过限量。
七、水分测定
费休氏法和甲苯法 费休法或K-F法，是在1935年由卡尔•费休提出的测 定水分的容量方法，属于碘量法，对于测定水分最为 专一，也是测定水分最为准确的化学方法。
八、炽灼残渣检查法(residue on ignition)
BP称硫酸灰分（sulphated ash)
是检查有机药物中混入的各种无机杂质。常采用
比移值
原点至溶剂前沿的距离
一般要求：
颗粒直径10~40µm 薄层涂布：无粘合剂
含粘合剂：常加入 10~15% 煅石膏 (CaSO4·2H2O,180℃烘4h)
或0.5~0.7%羧甲基纤维素钠水溶液
常 用 方 法：
▪ 杂质对照品法 ▪ 供试品自身对照法 ▪ 对照药物法
枸橼酸乙胺嗪
I2蒸气显色
CON N
微孔滤膜过滤法检查重金属装置
C 垫圈(外径10mm,内径6mm) D 滤膜(直径10mm,孔径3.0µm) E 辅助滤板
滤器上盖
C D
A
E
B
连接头
F 滤器下部
五、砷 盐 (arsenic)
国内外常用方法：
第一法 古蔡氏法 Gutzeit 第二法 Ag-DDC法 白田道夫法 Bettendorff
杂质：ChP将任何影响药物纯度的物质均称为 杂质。 对药物纯度的认识随着分离检测技术的进步而 提高；注意区别试剂纯度与临床用药品的纯度
例：纯度要求
Pethidine Hydrochloride 盐酸哌替啶
CH3 N
CH3 N
OCH3 HCl
O
O O
CH3 HCl
C2H5 N
O O
CH3 HCl
无效异构体I
无效异构体 II
二、杂质来源
source and sorts of impurities
1. 生产过程中产生
(C6H10O5)x+ H2O H+ (C6H10O5)y H2O, H+ C12H22O11
淀粉
糊精
麦芽糖
酸度：水解试剂带入
2C6H12O6 葡萄糖
乙醇中不溶物：水解中间体(糊精)
SO32-：产品用H2SO3漂白 可溶性淀粉：水解不完全
古蔡氏法：
As 3 As O33- H2 AsH3 AsO34-
Hg Br2 砷斑
黄棕
吡 啶 Ag
Ag- DDC 红色胶态
Zn+HCl
SbH3+HgBr2→SbH2(HgBr)+HBr 锑斑
二乙基二硫代氨基甲酸银法 Ag-diethyldithiocarbamate
Ag-DDC法
C2H5 N
注意: 单位统一
例 1：
对乙酰氨基酚中氯化物的检查： 样 2.0g 溶于100ml水中，取25ml检查Cl-，与标准
NaCl溶液(10μg/ml) 5ml对照液相比，不得更深。
C= 10μg/ml V=5.0ml S= 25 2.0 100=0.5g
L 10 5.0 106 100% 0.01% 0.5