泛素连接酶LRSAM1对人神经胶质母细胞瘤细胞生物学行为的影响及其可能机制

• 456•中华实用诊断与治疗杂志2021年5月第35卷第5期J Chin Pract Diagn Ther，May 2021，Vol. 35，No. 5
•论著•
泛素连接酶LR SA M1对人神经胶质母细胞瘤细胞
生物学行为的影响及其可能机制
梁博，王新军，王建业，周少龙，杨卓，刘荣俊
郑州大学第五附属医院神经外科，河南郑州450052
摘要：目的探讨泛素连接酶LR SA M1在CD166降解中的作用及其对人神经胶质母细胞瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响。

方法人神经胶质母细胞瘤U-87 M G细胞，采用免疫共沉淀法检测LR SA M1与CD166是否存在结合；将对数生 长期 U-87 MG 细胞分为pcDNA3. 1-LRSAM1 组、pcDNA3. 1-NC 组和空白对照组，pcDNA3. 1-LRSAM1 组和pcDNA3. 1-NC组细胞分别转染pcDNA3. 1-LRSAM1质粒载体和PcDNA3. 1空质粒载体，空白对照组细胞正常培养，采 用实时荧光定量P C R法检测3组细胞LRSAM1 m R N A相对表达量，采用Western blot法检测LRSA M1蛋白相对表达 量，采用免疫荧光染色法检测LR SA M1与CD166表达情况，采用细胞克隆形成实验检测细胞集落形成数目，采用 Armexin V-FIT C/P I染色检测细胞凋亡率，采用细胞划痕试验检测细胞划痕愈合率，采用Tnm swell小室实验检测侵袭细胞数。

结果U-87 M G细胞中LR SA M1与CD166存在结合。

pcDNA3. 1-LRSAM1组细胞LRSAM1 m R N A和蛋白 相对表达量（3.26士0. 28、0. 72±0.06)均髙于空白对照组（1.00±0. 03、0. 18±0. 0.1)和 pcDNA3. 1-NC组（0•99士0. 02、
0. 19±0. 02)(P<0. 05)，转染成功。

U-87 MG 细胞LRSAM1 与CD166 共定位，pcDNA3. 1-LRSAM1 组LRSAM1 荧光
染色强度增加，CD166荧光染色强度减弱；转染后pcDNA3. 1-LRSAM1组细胞集落形成数目[(69.21 士 7. 54)个]、侵袭 细胞数[(33. 71 士4. 17 )个]均少于空白对照组[(142. 38 士14. 61)、（ 68. 87 ±9. 42 )个]和pcDNA3. 1-NC 组 [(152,40±15.92)、（75.54士9.06)个](/5<0.05),细胞凋亡率[(17.41士2.03)%]高于空白对照组[(8.07±0.79)%]和pcDNA3. 1-NC 组[(8. 45 ±0• 88) %] ( P<0. 05 )，细胞戈i j痕愈合率[(30. 16 ± 4. 10 ) %]低于空白对照组[(58. 22±5.82)%]和pcDNA3. 1-NC 组[(62.09±7. 13)%](P<0. 05);空白对照组与pcDNA3.卜NC 组各指标比较差异均无统计学意义（P>〇. 05)。

结论过表达LR SA M1可抑制人神经胶质母细胞瘤U-87 M G细胞增殖、侵袭与迁移，促进细胞凋亡，其机制可能与LR SA M1结合CD166有关。

关键词：神经胶质母细胞瘤；U-87 M G细胞；泛素连接酶LRSAM1;CD166;凋亡；侵袭；迁移
Effect of ubiquitin ligase LRSAM1 on the cytological function of
human glioblastoma and its potential mechanism
LIANG Bo, WANG Xin-jun, WANG Jian-ye, ZHOU Shao-long, YANG Zhuo, LIU Rong-jun Department o f Neurosurgery，the F ifth A ffilia te d Hospital o f Zhengzhou University ^Zhengzhou^ Henan 450052，China Corresponding author：WANG Xin-jun, E-mail：**************.cn
Abstract：Objective To explore the role of ubiquitin ligase LRSAM1 in the degradation of CD166 and its effects on the proliferation, invasion and migration of human glioblastoma cells. Methods Immunoprecipitation method was used to detect whether LRSAM1 and CD166 were integrated in human glioblastoma U-87 MG cells. The U-87 MG cells in logarithmic growth phase were divided into pcDNA3. 1-LRSAM1 group，pcDNA3. 1-NC group and blank control group.
The cells in pcDNA3. 1-LRSAM1 group and pcDNA3. 1-NC group were transfected with pcDNA3. 1-LRSAM1 plasmid vector and pcDNA3. 1empty plasmid vector, respectively, and the cells in blank control group were cultured normally.
Real-time fluorescence quantitative PCR was used to detect the relative expression of LRSAM1 mRNA, Western blot was used to detect the relative expression of LRSAM1 protein, immunofluorescence staining method was used to detect the expressions of LRSAM1 and CD166, cell colony formation experiment was used to detect the number of cell colonies formed, Annexin V-FITC/PI staining was used to detect the cell apoptosis rate, cell scratch test was used to detect the cell scratch healing rate, and Transwell chamber experiment was used to detect the number of invaded cells.
Results LRSAM1 was integrated with CD166 in U-87 MG cells. The relative expressions of LRSAM1 mRNA and protein were higher in pcDNA3. 1-LRSAM1 group (3. 26 ±0.28，0. 72 ±0.06) than those in blank control group
(1. 00士0. 03，0• 18士0• 01) and pcDNA3. 1-NC group (0. 99士0. 02，0• 19士0• 02) (P<C〇. 05)，and the transfection was
successful. LRSAM1 was co-localized with CD166 in U-87 MG cells. In pcDNA3. 1-LRSAM1 group, the fluorescence
doi：10. 13507/j. issn. 1674-3474. 2021. 05. 006
基金项目：国家自然科学基金（81972361)
通信作者：王新军，E-m ail:w angxj@zzu. edu. cn
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staining intensity of CD166 decreased and the fluorescence staining intensity of LRSAM1 increased. After transfection, the number of formed cell colonies and the number of invaded cells were less in pcDNA3. 1-LRSAM1 group
(69. 21 士7. 54，33. 71 士 4. 17) than those in blank control group (142. 38士 14. 61，68. 87 士 9. 42) and pcDNA3. 1-NC
group (152. 40 士15. 92，75. 54 士9. 06) (P<C0. 05)，the apoptosis rate was higher in pcDNA3. 1-LRSAM1 group ((17. 41±2. 03)%) than that in blank control group ((8. 07士0• 79) %) and pcDNA3. 1-NC group ((8. 45 士0• 88) %) (P<〇. 05)，the cell scratch healing rate was lower in pcDNA3. 1-LRSAMl group ((30. 16±4. 10)%) than that in blank control group ((58. 22士5. 82) %) and pcDNA3. 1-NC group ((62. 09±7. 13) %) (P<0. 05)，and all the above indexes showed no significant differences between blank control group and pcDNA3. 1-NC group ( P>0. 05 ). Conclusion Overexpressed LRSAM1 can inhibit the proliferation, invasion and migration of human glioblastoma U-87 MG cells, and promote the cell apoptosis, probably by the integration of LRSAM1 and CD166.
Keywords：glioblastoma；U-87 MG cells；ubiquitin ligase LRSAM1 ；CD166；apoptosis；invasion；migration
神经胶质瘤是临床常见的原发性肿瘤，神经胶质 母细胞瘤是神经胶质瘤最具侵略性的实体瘤类型，其 组织学特征表现有坏死、血管增生和血栓形成等，治疗 方法包括手术切除、化疗、放疗和抗血管靶向药物应用，但预后较差[14]。

LRSAM1是一种R IN G型E3泛 素连接酶，具有调控细胞黏附、泛素化和信号传导等作 用[5]。

研究表明，LRSAJV0基因突变与帕金森病、肌萎缩侧索硬化等神经系统疾病密切相关。

本研究探 讨LRSAM1对神经胶质母细胞瘤细胞生物学功能的影响及可能机制，报道如下。

1材料与方法
1.1 一般材料人神经胶质母细胞瘤细胞U-87MG 购自中国上海细胞研究所。

U-87M G细胞加人含体 积分数10%胎牛血清、100 u/m L青霉素和100 mgAi 链霉素的D M EM培养液，于37 °C,体积分数5%C02细胞培养箱中培养，显微镜下观察细胞融合度达80%时按1 : 3传代培养，取对数生长期进行实验。

1.2方法
1.2.1 主要试剂引物和pcDNA3. 1-LRSAM1质 粒载体由上海生工生物工程有限公司构建合成。

胎牛 血清、质量分数1%青霉素/链霉素、RPMI 1640培养 液（美国Sigm a公司）；Annexin V-FITC/P I细胞调亡 检测试剂盒、免疫荧光染色试剂（北京康为世纪生物公 司）；R N A提取试剂盒、反转录试剂盒、SYBR®Premix Ex Taq™I I试剂盒（日本T a k a r a公司）；Lipofectamine2000 试剂盒、CCK-8 试剂盒、Transw ell小室（上海碧云天生物技术有限公司）、M atrigel胶（美国B D公司）、兔抗人LRSAM1多克隆 抗体、兔抗人CD166多克隆抗体（美国Santa C ruz公 司）；H R P标记的山羊抗兔IgG、F IT C标记的羊抗兔IgG(美国 Cell Signaling公司）。

1.2.2 LRSAM1与CD166蛋白相对表达量检测
采用Western b lo t法。

收集培养的U-87 M G细胞，加 人适量R IP A裂解缓冲液裂解细胞，4 °C、12 OOOXg 离心15 11^11，收集上清。

用1^：八试剂盒测定提取的蛋白浓度，取50 蛋白进行SDS-P A G E电泳，将分 离的蛋白电转移至P V D F膜上。

在抗体孵育盒中加人质量分数5%脱脂奶粉封闭2 h，T B S T溶液洗膜；加入稀释的兔抗人LRSAM1多克隆抗体与兔抗人CD166多克隆抗体（1:1 000)，4 °C孵育过夜；TBST 溶液洗膜，加人稀释的H R P标记的山羊抗兔IgG (1 : 2 000)，室温孵育1h;T B S T洗膜后，滴加适量发 光液E C L，凝胶成像系统中曝光、拍照，应用Quantity-One软件分析蛋白含量，以G A PD H作为内 参蛋白。

1.2.3 LRSA M1与CD166蛋白的相互作用采用免疫共沉淀法。

对数生长期U-87 M G细胞加人EBC 裂解缓冲液（50 mmol/L Tris-H Cl，pH8.0、125 mmol/L NaCl，质量分数0. 5%NP-40和蛋白酶抑制剂混合物）在冰上溶解，4 °C、12 000 X g离心 30 min,转移上清液。

取500 p g蛋白与兔抗人LRSAM1多克隆抗体、兔抗人CD166多克隆抗体置于混勻的protein A/G-beads免疫沉淀磁珠，4 °C旋转 下孵育过夜；缓冲液清洗后，4 °C、4 000 X g离心 5 min，吸去上清液，使用裂解缓冲液冲洗，置100 °C水 浴锅中变性5 min,采用磁性分离器分离，进行蛋白质 印迹杂交检测。

1.2.4 细胞分组与转染将对数生长期U-87 MG 细胞分为 pcDNA3. 1-LRSAM1 组、pcDNA3. 1-NC组 和空白对照组。

调整各组细胞浓度为2X105个/m L，取100 fxL接种在6孔板，37 °C，体积分数5%C02细 胞培养箱中过夜培养后，根据Lipofectamine 2000试 剂说明进行细胞转染。

pcDNA3.1-LRSA M1组和pcDNA3. 1-NC组细胞分另IJ转染 pcDNA3. 1-LRSA M1质粒载体和pcDNA3. 1空质粒载体，培养4 h后更换 为新鲜培养基，继续培养48 h，收集细胞；空白对照组 细胞正常培养，不做任何处理。

1.2.5 LRSA M1m R N A相对表达量检测使用 Trizol试剂提取3组细胞总R N A，采用iScript cDNA 合成试剂盒对R N A进行反转录获得cDNA，按照 SYBR Premix Ex Taq n试剂盒说明，在 MyiQ™2 双 色实时荧光定量P C R检测系统进行实时荧光定量PCR反应。

反应条件：95 °C 3 mi n;95 °C20 s，60 °C 15 5,72°〇45 5,40个循环。

实验重复3次。

以(3-3£^11
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为内参，采用2 法计算LRSAM1F m R N A相对表达量。

引物序列见表1。

表1引物序列表
项目引物序列~~ LR SA M1F 上游引物5 A ACGCCTGG A G T A CC AG ATG-3 *
LR SA M1F 下游弓丨物5，-A A C C TT G A T G G TT G C C A G A C-3，
p-actin 上游引物 5 *-ATCG TC C A CCGC A A A T G C T T C T-A-3' (3-actin 下游引物______5，- A G C C A T G C C A A T C T C A T C T T G T T-3，1.3统计学处理应用SPSS 20. 0软件进行统计分 析，计量资料以均数士标准差G士s)表示，3组比较采 用单因素方差分析，组间两两比较采用L S D检验，检 验水准a=0. 05。

2结果
2. 1U-87 M G细胞LRSAM1与CD166结合关系
U-87 M G细胞中LRSAM1与CD166存在结合现象，表现为以LRSAM1抗体免疫沉淀CD166,以CD166 抗体免疫沉淀LRSAM1。

见图1。

1.2.6 LRSAM1与CD166表达情况检测采用免
疫荧光染色法。

收集转染后的细胞，P B S洗涤后滴加 在无菌盖玻片上静置2 h;加人体积分数4%多聚甲醛 溶液固定15 min;P B S洗涤后使用体积分数0. 15% Triton X-100室温透化20 min;P B S洗涤后，体积分数 10%山羊血清室温封闭2 h;P B S漂洗，分别滴加兔抗 人LRSA M1多克隆抗体与兔抗人CD166多克隆抗体 (1 : 100)，4 °C孵育过夜；P B S冲洗，加入F IT C标记 的羊抗兔IgG(l: 200)，37 °C孵育30 min,细胞核用 D A PI反染；染色完毕后P B S冲洗，中性树胶封片，光 镜观察蛋白荧光染色强度变化并拍照。

1.2.7细胞克隆形成实验检测细胞集落形成数目
各组细胞以4X103个接种到培养皿，轻晃使细胞均匀 分布，培养14 d，出现细胞集落用P B S洗涤，加人体积 分数4%多聚甲醛固定菌落，质量分数0.5%结晶紫染 色15 min,流水冲洗，干燥，光镜下观察并计数细胞集落形成数目（>50个细胞克隆团为1个集落）。

1.2.8细胞凋亡情况检测采用Annexin V-FITC/PI染色法。

各组细胞消化离心，重悬于结合 缓冲液，细胞悬浮液加入5 pL Annexin V-F IT C，然后 加人10 P I，将染色的细胞在室温下黑暗温育30 min，应用流式细胞仪检测细胞凋亡，并计算细胞凋 亡率。

实验重复3次。

1.2.9细胞划痕愈合率检测在6孔培养板背后用标记笔均匀画出横线，横线间隔0. 5 cm,每孔加人转染后细胞。

次日，用移液枪枪头沿直尺垂直于细胞培养孔背后的横线划痕，P B S清洗细胞3次，洗去划痕下 细胞，加人无血清RPM1 1640培养基，37 °C、体积分 数5%COz饱和湿度培养箱继续培养，于0、24 h取样 观察划痕愈合情况。

1.2.10 侵袭细胞数检测采用T ransw ell小室实 验。

转染48 h后，调整各组细胞浓度为2X 105个/m L，将T ran sw ell小室放人24孔板中，取 200 各组细胞悬液加人T ransw ell小室上室，下室加人600 p L含体积分数10%胎牛血清的RPMI 1640 细胞培养液，于37 °C、体积分数5%C02培养箱孵育 24 h后取出小室，弃去培养液，P B S洗涤，40 g/L甲醛 中固定15 min,质量分数0.1%结晶紫染液染色20 min,P B S洗涤，封片，显微镜下观察细胞迁移情况。

IP
Input IgG L R SA M1
CD166
LRSAM1 W9k
IP
Input IgG LR SA M I
一闕H P
CD166
LRSAMI
注：丨n p u t为对照；I P为免疫沉淀。

图1U-87 M G细胞L R S A M I与CD166结合关系的
免疫共沉淀图
2.2 3组细胞LRSAM I m R N A和蛋白相对表达量比较3组细胞LRSAM I m R N A和蛋白相对表达量 比较差异均有统计学意义（P<〇. 05 )。

pcDNA
3. 1-LRSA M1组细胞 LRSAMI mRNA 和蛋白 相对表达量均高于空白对照组和pcDNA3. 1-N C组 (P<0. 05),空白对照组与pcDNA3. 1-N C组比较差异无统计学意义（P>〇. 05)。

见表2,图2。

表23组细胞LRSAM I m R N A和蛋白
相对表达量比较d±s)
组另LR SA M I mRNA L R S A M I蛋白
空白对照组 1.00 士 0.030• 18 士 0.01 pcDNA3. 1-NC 组0. 99土0.020. 19 士 0.02
p cD N A3.卜LR SA M I 组 3.26±0.28a b0. 72士0. 06B b
F值36.78123.062
P值<0. 001<0. 001注与空白对照组比较，P<0.05;b与p cD N A3.卜N C组比较，P<0.05.
12
LRSAMI
G A P D H
注：1为空白对照组；2为pcDNA3. 1-N C组；3为pcDNA3. 1-LRSAM1 组。

图2 3组细胞L R S A M I蛋白表达的Western b l o t图
2.3 3组细胞免疫荧光染色结果L R S A M I与CD166在U-87 M G细胞中共定位。

空白对照组和PcDNA
3. 1-N C组细胞L R SA M I焚光染色强度较弱，CD166荧光染色强度较强；pcDNA3. 1-L R SA M I组细 胞L R SA M I荧光染色强度增加，CD166荧光染色强度减弱。

见图3。

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■■■mmmm
注：a为空白对照组；b为pcDNA3. l-N C组；c为pcDNA3. l-L R S A M U l〇
图3 3组细胞免疫荧光染色图（X 400)
2.4 3组细胞集落形成数目、细胞凋亡率、侵袭细胞数及划痕愈合率比较 3组细胞集落形成数目、细胞 凋亡率、侵袭细胞数及划痕愈合率比较差异均有统计学意义（P<〇.〇5)。

pcDNA
3. 1-LRSAM1 组细胞集落形成数目、侵袭细胞数均少于空白对照组和pcDNA3. 1-N C组（P<0.05)，细胞凋亡率高于空白对 照组和pcDNA3. 1-N C组（P C0.05)，细胞划痕愈合率低于空白对照组和pcDNA3. 1-N C组（P<0.05); 空白对照组与pcDNA3. 1-N C组各指标比较差异均无 统计学意义（P>〇. 05)。

见表3,图4-7。

表3 3组细胞集落形成数目、细胞凋亡率、侵袭细胞数
及划痕愈合率比较士 d
组別集落形成数H/个细胞凋亡率/%侵袭细胞数个划痕愈合率/%空白对照组士0士0士
组0士土0土00土
士000值0
值000000000000
注：与空白对照组比较，00与卜组比较，00。

注：a为空白对照组，可见明显的细胞集落；b为pcDNA3.卜N C组，可见明显的细胞集落；c为pcDNA3. 1-LRSAM1组，可见较少
量的细胞集落。

图4 3组细胞克隆形成实验图（结晶紫染色）
a b c
注：a为空白对照组；b为pcDNA3. 1-N C组；c为pcD N A3.] LRSAM1 组。

图5 3组细胞凋亡流式细胞图
注：a为空白对照组，可见大量细胞.侵袭数目多；b为pcDNA3. 1-NC组，可见大量细胞，侵袭数目多；c为
pcDNA3.卜LRSAM1组，可见较少量的细胞，侵袭数目减少。

图6 3组细胞Transwell小室实验图（结晶紫染色，X200)
i白对照组，转染48 h可见大量细胞发生迁移，划痕愈合 快；b为pcDNA3.卜N C组，转染48 h可见大量细胞发生迁移，
划痕愈合快；c为pcDNA3. 1-LRSAM1组，转染48 h可见少量
细胞发生迁移，划痕愈合较缓慢。

图7 3组细胞划痕试验图（倒置显微镜，X100)
•3讨论
胶质母细胞瘤为中枢神经系统恶性肿瘤，是弥漫 性胶质瘤恶化程度最高的类型，占脑肿瘤的12%〜 15%[2]。

因肿瘤细胞的侵袭性生长及对诱导凋亡的抵 抗，使胶质母细胞瘤治疗更困难[9]。

阐明胶质母细胞瘤的发病机制，开发新型治疗靶标或药物，对改善胶质 母细胞瘤患者的预后有重要意义。

泛素化是一种关键的蛋白翻译后修饰形式，参与 调控机体多种生理过程，如D N A损伤修复、免疫应答、自噬与凋亡、信号传导等[|°12]。

泛素化过程涉及E1泛素激活酶、E2泛素结合酶和E3泛素连接酶这3 种主要酶，其中E3泛素连接酶在泛素化过程中发挥特异性识别的关键作用。

研究[13]表明，LRSA M1 R IN G域中各种突变（如剪接、错义或移码等）
可产生
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功能缺失或异常的LRSAM1蛋白，引起神经系统疾
病或其他疾病。

H u等[8]研究表明，LRSAM1参与肌
萎缩性侧索硬化症的病理过程，其中错义
突变可干扰细胞内正常转录机制。

Y in等[14]研究发 现，小檗碱通过招募LRSAM1介导自噬溶酶体途径，
使其与BC R-A BL和BCR-ABL T315I直接结合并降
解，克服慢性粒细胞白血病对伊马替尼耐药性。

此外，
在先天性巨结肠中分离肠神经嵴细胞，下调细胞miR-431-5p表达，通过靶向LRSAM1促进肠神经嵴细
胞增殖[15]。

本研究结果显示，胶质母细胞瘤U-87 M G细胞
中LRSAM1可与CD166进行结合，LRSAM1与 CD166共定位在细胞中，过表达LRSAM1的
U-87 MG细胞中CD166荧光染色强度下降，说明 LRSAM1与CD166表达可能呈负相关，证明二者在
肿瘤细胞内的内源性相互作用。

CD166是一种糖蛋
白，也称为活化白细胞黏附分子，属黏附分子的免疫球
蛋白超家族成员，CD166表达改变与多种癌症进展和
转移相关，如前列腺癌、乳腺癌、胆管癌、结直肠癌、口
腔癌和食管癌等[1617]。

因此，了解CD166转换的潜在
机制对阐明相关疾病发病机制有重要意义。

本研究结果显示，与空白对照组和pcDN A3. 1-NC
组比较，pcDNA3. 1-LRSAM1组细胞集落形成数目和
侵袭细胞数减少，划痕愈合率降低，细胞凋亡率增加，
说明过表达LRSAM1的U-87 M G细胞克隆形成能
力下降，细胞侵袭和迁移受到抑制，细胞凋亡增加，提
所LRSAM1过表达可促进其进一步与CD166结合，
使CD166发生降解，抑制胶质母细胞瘤细胞恶性生物
学行为的发生。

本研究结果提示，U-87 M G细胞中LRSAM1与 CD166是相互作用的蛋白，LRSAM1可抑制
U-87 MG细胞增殖、侵袭和迁移，促进细胞凋亡。

LRSAM1与CD166可能是神经胶质母细胞瘤诊断和
治疗的潜在靶点，但其在神经胶质母细胞瘤中的作用
仍需进一步深人研究。

参考文献
[1]许妍，韩倩，雒建超.等.测定胶质瘤〇/p值对立体定向放射治疗
中正常脑组织保护的意义[J].中国实用医刊，2014,41 (12): 70-
72.
[2]范英杰.恩度联合替莫唑胺及放疗治疗胶质母细胞瘤的疗效分
析[J].医药论坛杂志，2015,36(7) :166-168.
[3]孙伟子，吴求吉，柳麒，等.胶质母细胞瘤治疗研究进展[J].中华
实用诊断与治疗杂志，2019,33(10): 1037-1040.
[4] W ANG D, ZH EN G J,LIU X B, et al. Knockdown of USF1
inhibits the vasculogenic mimicry of glioma cells via stimulating
SN H G16/m iR-212-3p and linc00667/m iR-429Axis [ J ]. Mol
Ther Nucleic A c id s,2019»14 ：465-482.
[5] GUO Y, BIAN W, ZH AN G Y, et al. Expression in Escherichia
coliy purification and characterization of LR SA M1, a LR R and
RING domain E3 ubiquitin lig a se[J]. Protein Expr Purif，2017，
129:158-161.
[6]A E R T S M B, W ETERM A N M A J,QUADRI M, et al. A
LRSAM1 mutation links Charcote-Mariee-Tooth type 2 to
Parkinson’s disease [J].Ann Clin Transl N eurol，2016,3 (2):
146-149.
[7]M ISH RA R, A M A N U L LA H A, U PA D H Y A Y A, et al.
Ubiquitin ligase LRSAM1 suppresses neurodegenerative diseases
linked aberrant proteins induced cell death [J].Int J Biochem
Cell B io l,2020,120：105697.
[8]H U B, AR PA G S, ZU CH N ER S, et al. A novel missense
mutation of C M T2P alters transcription machinery [J A n n
Neurol ,2016,80(6)： 834-845.
[9]高玉帅，闫兆月，禹金良，等.胶质母细胞瘤术后替莫唑胺联合甲
氨蝶呤同步会师放化疗临床观察[J].中华实用诊断与治疗杂
志，2020,34(12): 1278-1281.
[10]魏路，姚峰.去泛素化酶B R C A1相关蛋白1与肿瘤关系研究进
展[J].中华实用诊断与治疗杂志，2018,32(12): 1246-1248. [11] SEO J H, A G A RW A L E, B R Y A N T K G, et al.
Ubiquitination regulates mitochondrial dynamics and tumor cell
m ovem ents[J]. Cancer R e s,2018,78(15) ：4215-4228.
[12] SH A R M A A, A LSW ILLA H T, SING H K, et al. USP14
regulates DNA damage repair by targeting RNF168-dependent
ubiquitination[J]. A utophagy,2018,14(11)： 1976-1990.
[13] F E L T H A M R, B E T T JE M A N B, BUDH IDARM O R, et al.
Smac mimetics activate the E3 ligase activity of cIA Pl protein
by promoting RING domain dimerization [J].J Biol Chem,
2011,286(19)：17015-17028.
[14] YIN Z, H U A N G G, G U C, et al. Discovery of berberine that
targetedly induces autophagic degradation of both BCR-ABL
and BC R-A BL T315I through recruiting LRSAM1 for
overcoming imatinib resistance [J].Clin Cancer R e s，2020，26
(15)：4040-4053.
[15] H U B，CAO L，W ANG X Y，et al. Downregulation of
microRNA-431-5p promotes enteric neural crest cell
proliferation via targeting LR SA M1in H irschsprung’s disease
[J]. Dev Growth D iffe r,2019,61(4) ：294-302.
[16] REN A R D H F, T Y C K A E R T F, GIUDICE C L, et al.
Endophilin-A3 and Galectin-8 control the clathrin-independent
endocytosis of C D166[J]. Nat Com m un,2020,11(1)： 1457. [17] D JIRA CK O R L, K A LIR A I H, CO U PLAN D S E, et al.
CD166 high uveal melanoma cells represent a subpopulation
with enhanced migratory capacity [J].Invest Ophth Vis Sci,
2019,60(7)：2696-2704.
收稿日期：202卜01-05 修回日期：2021-02-25 本文编辑：王君秋。