免疫磁珠分选技术及应用

MACS细胞分选策略
1、阳性分选：
•
根据特异性标志分选细胞: 阳性分选是指目的细胞磁性标记
后，作为阳性的标记组分直接分选出来。
• 优点：
》高纯度，尤其是富集稀有的细胞 》高回收率 》操作简便、迅速
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阳性分选策略
MACS® 微珠磁性标记 未标记细胞先行流出
将分选柱移出磁 场，洗脱阳性分
分选前标本制备：过滤
MACS预选滤器：30 m
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Thereare a lot ofdifferentseparationtechniquesapart fromMagneticCellSorting. Some ofthemare also used to pre-enrichcells befor performinga megneticcellsorting.
MACS技术分选的CD8+ T 细胞
微珠
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MACS微珠
直标微珠 多选微珠
间标微珠
MACS技术
设备与试剂
• MACS分选柱：
》填充有不同规格的铁珠。 》铁珠表面有亲水包被，不损伤细胞。 》无菌包装。 》可用于分选多种细胞及亚细胞物质、
细菌、病毒、mRNA和蛋白质。
• 专利产品 • 将磁场扩大1000－10000倍—
MACS技术原理
MACS(Magnetic Activated Cell Sorting)： =免疫学+细胞生物学+磁力学
• 基于抗体对抗原的特异性识别 • 磁性微珠直接或者间接偶联在抗体上，从而与细胞相连 • 在高强度、梯度磁场中达到细胞磁性分离的目的
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One celltype ina mixtureis labeledwitha specific monoclonalantibodycoupled to a verysmallmagneticbead. The cellsare passed over a columnwhichis placed inthe magneticfieldofa MACS separator. The magneticallylabeledcells are retained inthe column, the unlabeldcells runthrough. Then, the columnis removed
4X109），进样量0.5ml-50ml
• 8种全血微珠，可以做常见细胞的全血分选，省去
了费时的提取单个核细胞过程
Threetake home (or better „take to the customer“messages whichare explained inthe followingslides.
选各种细胞、亚细胞物质）
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Lots ofdifferentMACS separationstrategies:no limitincellseparation!
MACS® 细胞分选策略
•
阳性分选
• 去除分选
• 去除分选后再阳性分选
• 多重分选
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Thereare a lot ofdifferentseparationtechniquesapart fromMagneticCellSorting. Some ofthemare also used to pre-enrichcells befor performinga megneticcellsorting.
MACS技术主要优势
• 小磁珠: 50 nm（快速、不活化细胞、不沉淀）
•
保留细胞功能（直接进行后续实验；无毒性；氧化
铁和多聚糖组成，可生物降解）
•
与流式细胞仪兼容（不影响细胞光学特性、不影响荧
光抗体标记、与流式细胞仪分选联合使用可以缩短流
式分选时间）
• 快速、简便、无菌
• 适用范围广（磁珠种类多、从少量到大量、适用于分
内容
• MACS技术原理 • MACS技术设备及分选策略 • 几种特殊的MACS分选
分 选 和 分 析 DC细胞 分 选 各 种 T细胞
分选和分析细胞因子分泌细胞 分选造血干细胞
分选人类肿瘤细胞 分选和分析凋亡和死亡细胞 分选转染细胞 分子生物学和蛋白生化的分选
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Higherorganisms suchas manbears manydifferentcelltypes. Here, differentbloodcelltypes are shown, alldevelpingfroma centralstemcell. For a lot of applicationsit is necessaryto obtainonesinglecelltype.
选细胞
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MACS细胞分选策略
2、去除分选：
•
去除分选是磁性标记非目的细胞，并将其从细胞混合物中去
除，即未磁性标记的细胞为目的细胞。
• 去除分选策略适用范围：
》去除不需要的细胞 》缺乏针对目的细胞的特异性抗体（如肿瘤细胞） 》不需要抗体和目的细胞结合 》需进一步通过阳性选择分选细胞亚群
非 血 液 肿 瘤 ：CD45去除 死亡细胞去除试剂盒
在MS柱中产生的强大磁场
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MACS技术
设备与试剂
• MACS分选柱：
MACS技术
设备与试剂
• MACS分选器：从手动到自动，从实验室到临床
MACS技术
设备与试剂
• MACS分选器
autoMACS分选仪
• 9种程序，一机完成所有细胞分选 • 成本低，两个可重复使用的分选柱（2周内100次） • 快速（3－10分钟） • 重复性好 • 全自动分选，仪器操作简单 • 适用范围广：从少量标本（105）到大量标本（
MACS几种畅销磁珠与抗体
•
专利产品：CD133sCD303sCD304
•
特 殊 产 品 ： 人 类 DC系 列 ：BDCA-1 ( C D 1 c ) s B D C A - 2 ( C D 3 0 3 ) s
BDCA-3(CD141)sBDCA-4(CD304)
小 鼠 DC系 列 ：mPDCA微 珠 与 抗 体 干细胞产品： CD133sCD271微珠与抗体 细 胞 因 子 分 泌 细 胞 ：CSA分 选 与 分 析 TH2细胞： CD294(CRTH)微珠与抗体 分选人类肿瘤细胞：上皮肿瘤：CKsHEA
15088元）：可做阳性分选S 小量标本S 间标去除分选S 分子生物学分选
•
Mini&MidiMACS s t a r t i n g k i t ： 1 个分选架S 1 个MiniMACS分选器S 1个MidiMACS分选器S
1盒MS分选柱S 1盒LS/LD分选柱S 1 支价值7500元试剂（27838元）：可做阳性分选和去除分选
more expens去ive(除more分anti选bodies, more MicroBeads). Indoubt, PositiveSelectionshouldbe the methodofchoice.
磁性标记
分选未磁性标记细胞ຫໍສະໝຸດ MD0 1 6 0 . 0 2
MACS细胞分选策略
3、去除分选后再阳性分选：
MACS 技术
设备与试剂
» MACS微珠 » MACS分选柱
» MACS分选器 » 详细分选方案*
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MACS技术
设备与试剂
• MACS微珠：
MACS 微珠是与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化 微粒，可用于目的细胞的磁性标记。
• 特性：
50nm大小 对细胞没有毒性 可生物降解 不影响细胞特性
—高纯度，高回收率
Reasonfor the steelballs:Theygeneratea highgradient magneticfieldwithextremelystrongmagneticforces inthe „edges“. Thatallows MiltenyiBiotectoput extremelyfewmaterialonthe cellsurface, i.e. the tinyMicroBeads.
MACS细胞分选策略
4、多选微珠：
多选微珠标记
终止解离反应
MACS 分选 磁性颗粒的酶解离
根据第二标志进行磁 珠标记
MACS 分选
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What is possiblefor cells, is also possiblefor molecules.
M•ACS畅Mi销niM机ACS器st与art分i ng选ki柱t：1个分选架S 1 个MiniMACS分选器S 1 盒MS分选柱S 1 支价值7500元试剂（
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Allother cells are labeledwithantibodies(could be indirectas shownhere or direct.) Some customersprefer thismethod, althoughit is more difficultto obtainthe cellsyouwouldliketo habe (youlabelthe cells whichyoudo not want) andit is also
磁性分选去除标记细胞
先行流出为 CD4+ T 细胞 2 . CD25微珠直接磁性标记CD25+细胞 阳性分选靶细胞
CD4+ CD25+ 调节性T滞留在分选柱上，离开磁场后洗脱下来
To isolatea cellaccordingto two differentmarkers:Apositiveselectionfollowedbya second positiveselection
To see the MicroBeads youhave to make a cross-sectionthroughthe celland performa transmissionelectronmicrograph. The MicroBeadsare sittingonthe surface(arrows). Youcanalso see the douplemembraneofthe cell.
•
即先去除非目的细胞，再进行阳性分选。
• 适用范围：
》非目的细胞也表达用来阳性选择目的细胞的抗原。 》要分选非常稀有细胞，先去除非目的细胞再行阳性分选， 可获得高纯度的目的细胞。
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去除后再阳性分选CD4+CD25+双阳性细胞
1 . 去除非CD4+ T 细胞。 用生物素化抗体混合物和抗生物素微珠间接磁性标记非CD4+ T 细胞
fromthemaMgnAetaCndSth®e la磁bele性dce分lls ar选e elutedas thepositivefraction.We callthisa positiveselection.
MACS微 珠 进 行 磁 性 标 记
未标记的细胞 先行流出
洗脱阳性分选的 细胞
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MiltenyiBiotec stands for MACS Technology. MACS stands for MagneticCellSorting
Miltenyi Biotec: 免疫磁珠分选技术及应用
1 / 1 MD0 x x x . 0 1
Thereare a lot ofdifferentseparationtechniquesapart fromMagneticCellSorting. Some ofthemare also used to pre-enrichcells befor performinga megneticcellsorting.
•
MS分 选 柱 ： 1盒 25个 ，2763元
• LS分选柱：1盒25个，4356元
• LD分选柱：1盒25个，5100元
• uMACS与u或者M分选柱：分子生物学分选
•
Vario MACS分选仪
•
auto MACS自动分选仪SCliniMACS分选仪
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What is possiblefor cells, is also possiblefor molecules.