细胞-免疫荧光(IF)简易操作
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免疫荧光（IF）简易操作-细胞
1.细胞爬片准备
（1）盖玻片灭菌，放到24孔板中，多聚赖氨酸溶液(Poly-L-Lysine Solution)处理，37℃30min；
（2）吸弃Poly-L-Lysine ，PBS洗两次；
（3）铺细胞，培养24h；
2.固定
（1）预固定：不去培养基，加少许4% PFA到24孔板中，预固定5min；
（2）吸弃液体，轻加PBS洗cell，2次；
（3）加适量4% PFA于24孔板，常温固定cell，10~15min；
（4）吸弃4% PFA，再用1×PBS洗cell一次；
3.通透
加PBS-T(0.5%的Triton X-100)透化，5min；
4.封闭
封闭液（3%FBS+3%羊血清/驴血清in PBS，血清选择取决于抗体来源）室温封闭30-40min；
5.一抗
用封闭液稀释抗体，1:500稀释（视抗体情况而定），湿盒中常温孵育1h；或4℃过夜；
6.二抗
（1）洗一抗，用PBST（1LPBS加500μl Tween-20）浸洗，5min，三次；
（2）二抗，PBS稀释荧光标记二抗；室温1-1.5h；
7.封片
（1）洗二抗，PBST，5min，三次；
（2）H oechst染核，室温10min；
（3）75%甘油封片，指甲油固定玻片。