荧光共聚焦 激光扫描共聚焦

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只要载物台沿着Z轴上下移动，将样品新的一个层面移动 到共焦平面上，样品的新层面又成像在显色器上。
分辨率：0.18μm 点照明，具有照明点和探测点，具有扫描系统，逐点扫描 成像 具有四个荧光通道，可同时探测多个被标记物，一个透射 光道，同时采集透射光图像（非共焦图像）
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弧灯
膜
孔
目镜
02
应用
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荧光共聚焦显微镜
激光扫描共聚焦荧光显微镜 (laser scanning confocal microscopy,LSCM)
2
目
录
01
原理 应用
02
01
原理
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荧光，又作“萤光”，是指一种光致发光的冷发光现象。 当某种常温物质经某种波长的入射光（通常是紫外线或X射 线）照射，吸收光能后进入激发态，并且立即退激发并发 出比入射光的的波长长的出射光（通常波长在可见光波 段）；很多荧光物质一旦停止入射光，发光现象也随之立 即消失。具有这种性质的出射光就被称之为荧光。
Phe
红树植物秋茄
Pyr
与GC-MS检测浓度相符
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黑麦草
洋葱
北京化工 大学
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A surfactant template-assisted strategy for synthesis of ZIF-8 hollow nanospheres
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(a) Preparation process for HCPT@ZIF-8 hollow nanospheres. (b,c) CLSM of HCPT@ZIF-8 hollow nanospheres (scale bar 1 μm). (d,e) SEM of HCPT@ZIF-8 hollow nanospheres (scale bar 1 μm; scale bar 100 nm).
荧光显微镜
• 按下启动钮，汞灯点亮，经2-3min电弧趋于稳定，点亮15min内，勿切断电 源，一旦汞灯熄灭，在5min或稍长时间内，不许重新点亮，待其冷却，再 点亮。 • 开启光阀，开放孔径光阑和视场光阑至最大开度，即min-max。 • 载物台放一白纸，让汞灯电弧投在其上。 • 用灯室外的聚焦杆，使电弧像在白纸上聚焦，并调中螺钉，调中汞灯。 • 样品放于载物台，先用溴钨灯投射照明，用低倍物镜聚焦，待寻找到最佳 影像后，熄灭溴钨灯改用汞灯
面以外区域射来的光线ຫໍສະໝຸດ 探测小孔平面是离焦的，不能通过小孔。因此，非观察点的背景呈黑色，反差增加，成像清晰。由 于照明针孔与探测针孔相对于物镜焦平面是共轭的，焦平面上 的点同时聚焦于照明针孔与探测针孔，焦平面以外的点不会在 探测针孔处成像，即共聚焦。 以激光作光源并对样品进行扫 描，在此过程中两次聚焦，故称为激光扫描共聚焦显微镜。
1 采用激光束作光源，激光束经照明针孔，经由分光镜反射至 物镜，并聚焦于样品上，对标本焦平面上每一点进行扫描。 组织样品中如果有可被激发的荧光物质，受到激发后发出的荧 光经原来入射光路直接反向回到分光镜，通过探测针孔时先聚 焦，聚焦后的光被光电倍增管（PMT）探测收集，并将信号输 送到计算机，处理后在计算机显示器上显示图像 。 2 在这个光路中，只有在焦平面的光才能穿过探测针孔，焦平
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Conversion of azide to primary amine via Staudinger reaction in metal-organic frameworks
-N3 RNH2
Facile conversion of azide to primary amine in metalorganic frameworks (MOFs) was accomplished by Staudinger reduction. After the reaction, MOFs retained high crystallinity confirmed by X-ray diffraction patterns, meaning a high usability of this method for postsynthetic modification of MOFs. Bulky phosphine groups provided surface-selective modification of MOFs via a reaction between resulting amine groups of MOF and activated ester with fluorescein, illustrated by confocal laser scanning microscope (CLSM) observation. This method opens up new possibilities for the preparation of MOFs having core-shell structures.
荧光显微镜
• 利用一定波长的光使样品受到激发，产生不同颜色的荧光，以用来观察和 分辨样品中某些化学成分和细胞组分的一种显微镜。 • 自发荧光：组织，细胞不经荧光色素染色，在紫外光照射下，某些成分所 呈现的荧光。 • 继发性荧光：组织，细胞经荧光色素染色，由于荧光色素和组织细胞内的 某种成分结合后而呈现的荧光。 • 使用油镜物镜，应用无荧光浸油，物镜的内装可变光阑应适当缩小，以增 大影像反差和清晰度。 • 视场光阑（F）和孔径光阑（A）的开度，在观察样品时应朝min相转动，使 其适当缩小。 • 最好采用萤石玻璃制成的载玻片，盖玻片
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THANK YOU