rna pull down 原理与操作步骤

rna pull down 原理与操作步骤
RNA pull down是一种用于研究RNA与蛋白质相互作用的实
验技术。

该技术允许研究者鉴定和鉴定与特定RNA序列或结
构相关的结合蛋白质。

操作步骤：
1. RNA探针设计：选择需要研究的RNA序列或结构，并设计
相应的RNA探针。

RNA探针通常是通过体外转录的方式合成。

2.探针修饰：将RNA探针修饰上亲和标签，例如生物素。

3.细胞裂解：将细胞或组织样品裂解，以释放其中的细胞核。

4.交联：使用交联剂将RNA与与其相互作用的蛋白质交联在
一起，以稳定它们之间的相互作用。

5.共价固定：将交联后的RNA和蛋白质固定在载玻片上，一
般可以通过在表面上施加UV光来完成。

6.杂交：将修饰后的RNA探针与固定在载玻片上的RNA样品杂交，并允许它们在适当的反应条件下结合。

7.亲和纯化：利用RNA与蛋白质间的相互作用，通过加入亲
和标签的探针，如生物素联结的亲和树脂，将与RNA结合的
蛋白质与亲和树脂固定结合。

8.洗脱：洗去非特异结合的蛋白质，并将纯化的RNA结合蛋白质洗脱。

9.分析：使用Western blot、质谱或其他相关技术分析洗脱产物，以识别与RNA结合的目标蛋白质。

通过RNA pull down技术，可以确定与RNA相互作用的蛋白质，进而了解RNA在细胞中的功能和调控机制。