操作规程(SOP)与动物实验技术

兔：100-150Lx 树立无菌观念，严格管理，规范操作
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4、屏障环境设施运行模式图
空
经初、中、高效
气
三级过滤后进入
耐高温物品经高压灭菌进入
物
品
饲料等经渡槽消毒进入
不耐高温物品经传递窗消毒进入
动
物
经传递窗外包装消毒后进入
人
经穿戴无菌防护服、
员
口罩、手套后进入
高压锅
屏
渡槽 障
空
过滤
除臭
气
排放
传递窗
工作人员在饲养管理中发现死亡动物后，应通知实验人员。 如实验人员无特殊要求，本中心将动物尸体作废弃尸体处理。
实验中产生的动物尸体应由实验人员集中后放置于塑料袋内， 自行带出，放到动物尸体冰柜内。注射针头、针管：放置锐 器盒内；
淘汰实验动物：经缓冲间出屏障（屏障内禁止处死动物）， 在指定地点经安乐死方式处置，动物尸体及残留物要经塑料 袋密封后，存放在专用冰柜内。并填写《实验动物处死记录》
有效的检测措施
环境设施的检测 日常消毒灭菌物品的检测
环境设施的检测
主要参数包括温度、湿度、噪音、光照、室内风 速、氨浓度、室内换气次数、各区域压力差等。 要根据检测的指标调整或适时更换维护系统的设 备, 对多项环境参数的正常维持都有着重要的作用
温、湿度和压差需每日记录,根据它们的变化,需要 对风阀或空气过滤器进行更换处理。环境指标的 全面系统检测一般每季度检测一次。
每天检查饲养间内的温度、湿度、压差、噪声； 准备好灭菌拖鞋、手套、口罩、防护服等用品； 及时清理、清洗、干燥、消毒灭菌防护服等用品； 每周更换垫料，保证动物饮水、饲料充足，维护饲养环
境清洁、整齐，不留死角； 每天对屏障内地面、走廊消毒，预防交叉感染； 将消毒灭菌后的笼具、饲料、垫料、饮水储备充足； 每天对设备、实验动物状态进行观察并做好记录； 如发现异常，及时通知相关研究组实验人员。
实验动物质量管理国家标准
强制性标准（共12项） 哺乳类实验动物遗传控制质量标准
实验动物微生物学等级及监测 实验动物寄生虫学等级及监测
实验动物环境及设施 实验动物配合饲料通用质量标准
实验动物配合饲料卫生标准
实验动物大鼠、小鼠、地鼠、地鼠、 兔、猴、犬配合饲料（系列标 准共6项）
推荐性标准（共81项）
实验开始的日期、预计实验结束的日期、实验材料中有 无有毒、有害、感染性、放射性物质以及实验的特殊条 件、有无大型仪器设备搬入等。经本中心审核后，即安 排动物的供应，落实动物实验场所。
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2、网上平台管理的管控
三天内登录
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3、屏障环境设施环境指标控制
控制人员、物品、动物和空气 温度：20-26℃ 湿度：40-70% 换气：≥ 15次/h 噪声：≤ 60dB 工作照度：≥ 200lx 动物照度（小鼠、地鼠、豚鼠）：≥ 15-20Lx
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11、实验人员应注意的事项
进出屏障系统应按指定的路线走，穿无菌衣帽、戴口罩手 套，不得随意闯进入，并及时登记人员进出车间记录。
在屏障系统内进出各区域应随手关门，保持压差和气流方 向，不得敞开洁净区内各门。
共用的动物实验用具，如实验台、电子秤、固定器、解剖 板等，用后应清理干净，放回原处。
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小 鼠 固 定 盒 固 定
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大鼠固定盒固定
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3、豚鼠的抓取与固定
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4、家兔的抓取与固定
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兔 固 定 盒 固 定
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（二）性别鉴定
1、大、小鼠的性别鉴定
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2、兔的性别鉴定
Female
Male 50
3、豚鼠的性别鉴定
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（三）标记编号二、小鼠编号的标记方法
1 、染色法：
动物中心提供更换笼盒、给水给料等服务。 实验人员和饲养人员共同担任实验动物的观察。 工作完毕必须及时清场，并按废弃物分类别放入垃圾桶类。 实验人员与本中心工作人员之间应及时沟通，可在白板上
留言。
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11、实验人员应注意的事项
实验人员应在实验记录卡片上记载分组编号情况，禁 止用记号笔在笼盒上作记号。
动物食用饲料采用放射性照射(60Co ) 的消毒方法;
工作人员用的拖鞋等采用浸泡的方法(0.1 %新洁 尔灭或1%84消毒溶液、0.2%-0.5%过氧乙酸) 消 毒;
对于不耐热、不耐水、不耐酸碱和不能进行放射 性照射的物品采用传递窗紫外线消毒。
积极开展各项指标的检测工作
经常对空调通风系统进行保养,每1～2 周更换排风 口过滤膜,每天更换新风口过滤膜，每2-3个月更 换一次初效和中效过滤袋,每年更换一次高效过滤 器;
谨防动物逃逸：随时盖好笼盖，及时捉回逃逸动物淘汰 处置
回送笼盒：还原到位（确保IVC笼具通气） 应急处理：实验人员如发现动物有异常情况，应立即告
知有关管理人员应急处理 环境整洁：清洁工作台和地面；将使用过的笼具放置规
定区域，传至洗刷间；屏障内走廊禁止摆放实验用品
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10、动物实验操作规范
动物实验操作技术：是实施动物实验的重要手段，在 不同的研究领域有其不同的目的和应用，一些基本操 作技术是共同的。
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各种动物特点比较
实验项目
传染病 寄生虫 实验结果 应用动物数 统计价值 长期实验 自然死亡率 长期实验存活率 实验的准确设计 实验结果的讨论
价值
无菌动物
无 无 明确 少数 很好 可能好 很少 约100% 可能 高
外烂购检、动疫脱物项毛：目、实：异验是常前否分Ｓ有泌Ｐ异物Ｆ常）动（等物死临检亡床疫、症观外状察伤，3、诊d－畸断7形取d，、样普溃，通 级安动乐物死（兔、豚鼠）检疫观察７d－１４d。
单位内供动物：实验前应观察1 d 。
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8、动物实验饲养密度标准
成年小鼠：限5只/笼 繁殖小鼠：限3只/ 笼 成年大鼠：限3只/中鼠笼 新生仔鼠：限1窝/笼，并明确标示出生日期。
二更缓 冲间
一更间
手消毒
洁净走廊
洁品间
准备间
工作间
洁净走廊
人员 缓冲
饲养间 污物走廊
污物 缓冲
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SPF级车间动物循环路线
消毒剂擦拭外包装 紫外照射30min 检疫3-7天
生产区洁净走廊 动物接收间
传递窗
洁净走廊
饲养间
冷藏间 缓冲间 污物走廊
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合理选择消毒方法
饲养笼盒、饮水瓶、垫料、衣服和各种实验用具 采用高压蒸汽灭菌器消毒;
日常消毒灭菌物品的检测
双扉高压真空灭菌器,用于所有可经高压灭菌的物 品;
消毒液渡槽,用于可浸泡消毒的物品; 传递窗用于不能高压,又不能浸泡的物品。
加强人员队伍建设和管理
加强 人员污染是洁净动物设施失败的重要人原员因培。训 人与动物直接接触之间的防护仅仅是洗澡和穿上
灭菌衣、戴上手套和口罩。裸露部分很容易对环 境造成污染。 工作人员容易出汗，偶尔也打喷嚏，但灭菌衣、 口罩并不具备初、中、高效过滤功能，也容易对 环境造成污染。
每半年检测一次外购饲料的微生物指标和营养成 分,每季度检测一次高压灭菌物品（水、垫料等） 的微生物指标;每天对温度、湿度、压差等进行监 测。
认真做好屏障环境内外的清洁消毒工作
保持屏障环境内的洁净度是SPF 级动物房正常运 行的关键。
每天的实验和饲养工作完成后,对室内环境进行清 洁,每 次用灭菌消毒水对整个屏障系统的内环境和 饲养笼架进行清洁消毒。
无特殊病原体动物
无 无 明确 少数 可能好 可能好 少 约90% 可能 中
普通动物
有或可能有 有或可能有
有疑问 多（或大量）
不准确 困难 高
约40% 不可能
低
（一）动物抓取固定
1、大、小鼠的抓取固定
小鼠比较温顺，抓取时先用右手抓取鼠尾提取，置于鼠笼和实验台 向后拉，在其向前爬行时，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和颈部 的皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，以无名指按住鼠尾 SPF鸡微生物学检测方法（系列标准共10项）
实验动物寄生虫学检测方法（系列标准共10项） 实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法
实验动物近交系小鼠、大鼠皮肤移植法 实验动物配合饲料常规营养成分的测定
实验动物配合饲料氨基酸的测定 实验动物配合饲料维生素的测定 实验动物配合饲料矿物质和微量元素的测定
1、转基因小鼠 2、KM小鼠、NIH小鼠、BALB/C小鼠、地鼠
普通级实验动物
兔、豚鼠
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动物实验室开放时间
本中心动物实验室开放时间为周一～周五8：40～16： 00。双休日有人值班。
动物饲养室内动物照明时间设定为7：00～17：00， 即10h明14h暗。
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1、年度计划和预约登记
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9、动物实验场所的安排
在本中心进行动物实验时，由动物饲养人员负责动物实 验场所的安排。 清洁级以上大小鼠实验场所的安排，原则上依据制品类 别及科研分区。
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10、动物实验操作规范
抓取实验动物：要小心，不能粗暴，防止被动物咬伤； 如被咬伤，立即用纯净流水冲洗，通知工作人员用外用 消毒药局部应急处理、登记，并尽快前往医院处置
3％ -5％苦味酸溶液（黄色） 0.5%中性红或碱性品红溶液（红色） 2％硝酸银溶液（咖啡色，涂后光照10分钟） 煤焦油酒精溶液（黑色） 龙胆紫溶液（紫色）
每年的10月提交下一年度的实验动物使用计划，交生产 技术部，由生产技术部统一向实验动物中心下达下年度 的生产任务。
每月25日前，各使用部门（科室）填写下月的动物使用 计划交实验动物中心。
在本中心做动物实验实行至少提前一天预约登记制。 详细填写：课题名称、动物的品种、品系、性别、数量、
动物实验室。 • 本中心不接受实验人员自行采购的来源不清的动物。
在一般情况下，本中心在双方协定的时间内将实验人员 要求的实验动物（品种、品系、性别及年龄或体重）运 到指定的动物实验车间，由实验人员分组安置动物。
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7、动物的检疫
动物领用后，本中心通知实验人员对动物进行验收。 如有核不对合项格目或：有实疑验义动，物实品验种人品员系须、第性一别时、间数通量知、饲体养 人重员。。
人员的培训
岗前接受实验动物专业培训 了解实验设施的特点和要求 实验动物饲养管理方法 熟悉操作程序和操作规范 工作中接受实验动物管理员的技术指导
6、动物的供应和确认
本动物实验室所用的实验动物原则上必须 • 本单位供应的 • 向有动物生产许可证的单位购买。 • 没有清洁级和SPF级质量合格证的动物禁止进入本SPF级
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《湖北省实验动物管理条例》
《湖北省实验动物管理条例》，2005 年10月1日施行。
许可证有效 期五年
必须取得湖北省实验动物生产或使用许可证
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湖北省实验动物公共服务平台
/
实时登记 在线监控
二、如何在实验动物中心做实验
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实验动物品种
SFP级实验动物
设
人员
施
通道
出口
人员 物品 动物
缓冲
缓冲 退出
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5、屏障设施的运行管理规范
严格规定人员、物品、动物的流向 合理选择消毒方法 积极开展各项指标的检测工作 认真做好屏障环境内外的清洁消毒工作 加强人员队伍建设和管理 有效的检测措施
SPF级车间人员流动路线
外区
办公室/ 休息间
更外衣
更衣间
缓冲间
二更间
操作规程（SOP)与动物实验技术
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主要内容
一 • 我国实验动物管理体制简介 二 • 相关SOP和程序 三 • 动物实验技术
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一、我国实验动物的管理体制
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我国实验动物的管理体制
我国实验动物质量保障体系
实验动物质量保障体系
许可证管理 五年换发 每年年检 国家级种子中心 （动物种子供应） 质量监测
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13、动物实验结束
实验结束时，实验人员应及时通知中心工作人员，便 于及时清理、消毒，并做好一切准备工作。
如课题验收、鉴定、评奖等需要，实验人员可向动物 中心索要： ① 实验动物使用许可证， ② 实验动物质量合格证，
③ 实验动物设施使用合格证等。
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三、动物实验技术
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动物实验：是用实验动物作为人的替身进行各种生命 科学实验的过程。 以实验动物为材料，采用各种方法在实验动物身上做 试验，研究动物在实验过程中的反应、表现及发生、 发展规律和有关技术问题。
实验人员未经他人允许，不得进入其他动物实验室， 也不得动用同一动物实验室的其他实验组的动物。
为避免动物传染病的流行，屏障系统内的实验动物一 旦拿出屏障系统，不得再带回屏障系统。
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12、废弃物和动物尸体的处理
实验人员在实验中产生的废弃物应在实验后进行清扫，废弃 的纸箱、塑料袋应整齐折叠，包扎；换下的笼具整齐叠加， 放到污物走廊上。