马铃薯组织培养基本实验室规划和设备配置
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马铃薯组织培养实验室基本规划和设备配置
马铃薯在生产中多采用块茎进行无性繁殖, 繁殖过程中易受病毒和细菌侵染而导致产量下降, 经数代积累可使种性退化。
利用无菌操作通过组织培养技术, 不仅可产生脱毒试管苗, 还可缩短生长周期, 进行大批量快速繁殖。
在进行组织培养工作之前,应对所需基本设备条件进行全面了解,以便因地制宜利用现有资源新建或改建实验室。
在设计组织培养实验室时,应按组织培养程序进行没计,避免某些环节倒排,引起日后工作混乱。
实验室大小则取决于工作目的和规模,以工厂化生产为目的,实验室规模太小则会限制生产和影响效率。
马铃薯组织培养是在无菌条件下进行的,实验室设计原则应严格保证无菌操作,达到工作方便,防止污染。
一、实验室基本规划
1.准备室
功能:主要进行一切与实验有关的工作,完成所使用的各种药品的贮藏、称量、溶解、培养基配置与分装、培养材料的预处理等。
要求:宽敞明亮,便于放置多个实验台和相关设备,方便多人同时工作;通风条件好,便于气体流通;地面整洁,进行防滑处理。
设备:要求具有各种化学药品试剂、各种玻璃器皿、称量天平、电磁炉等。
2.洗涤灭菌室
功能:主要进行各种器皿的洗涤、干燥、保存和培养基的灭菌等。
要求:实验室一侧设置专用的洗涤水槽,地面耐湿并有良好的排水装置。
设备:水池、落水架、烘箱、高压灭菌锅等。
3.接种室
功能:主要进行马铃薯材料的消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序,是植物离体培养研究或生产中最关键的一步。
要求:规模根据生产需要和环境控制的难易程度而定,要求封闭性好,干爽安静,清洁明亮,能较长时间保持无菌;地面、天花板和四壁尽可能密闭光滑,易于清洁和消毒;配置推拉门,以减少开关门时的空气扰动,防止空气对流;地
面和内墙壁应采用防水盒耐腐材料,以便于消毒处理;在适当位置吊装1-2盏紫外线灭菌灯;用于照射灭菌;最好安装一个小型空调,使室温可控,这样可使门窗紧闭以减少与外界空气对流。
一般新建的无菌室在使用之前应进行灭菌处理,处理方法是用甲醛或高锰酸钾熏蒸并需定期灭处理,或用紫外线照射1-2小时/周,也可在每次使用之前照射10-30分钟。
设备:超净工作台、整套灭菌接种仪器(接种镊子、剪刀、解剖刀、接种针、酒精灯和消毒器等)、搁架、紫外灯、空调等
4.培养室
功能:对接种到培养瓶等器皿中的马铃薯离体材料进行控制条件下进行培养要求:培养室的大小可根据需要培养架的大小和数目及其他附属设备而定,其设计以充分利用空间和节省能源为原则;基本要求是能够控制光照和温度,并保持相对的无菌环境,保持室内清洁和适度干燥;安装排风窗和换气扇等唤起装置,以满足植物培养材料对气体的需要;室内温度由空调控制,光照又日光灯控制;一般可将培养室分为两间,一间为光照培养室,一间为暗培养室,培养室外应有一预备间或走廊;培养材料放在培养架上培养,培养架大多由金属制成,一般设5层,最低一层离地面高约10厘米,其它每层间隔30厘米左右,培养架长度根据日关灯的长度而设计,宽度一般是60厘米;日关灯一般用40W,固定在培养架的隔板下面,每层有两只日光灯,距离在20厘米,光照强度为2000-3000lx;培养室应当安装产热装置和空调,温度一般保持在25℃左右;培养室要求适度恒定,相对湿度以保持在70%-80%为宜,可安装加湿器;控制光照时间可安装定时开关,一般需要每天光照10-16小时;现代培养室大多设计为采用天然太阳光作为主要光源,既节省能源,而且组培苗接受太阳光生长良好,驯化易成活,在阴雨天可用日光灯作补充。
设备:培养架(控温控光控湿)、自动控时器、紫外灯、光照培养箱或人工气候箱、生化培养箱、边台实验台(用于拍摄培养物生长状况)、温湿度计和空调等。
5.缓冲间
功能:进入无菌室前的一个缓冲场所,减少人体从外界带入的尘埃等污染物;工作人员在此换上工作服和拖鞋,戴上口罩,才能进入无菌室和培养室。
要求:可建立在准备室外和无菌操作室外,应保持清洁无菌;备有鞋架和衣帽挂钩,并有清洁的实验用拖鞋和已灭菌的工作服;墙顶吊挂1-2盏紫外灯定时照射,对衣物进行灭菌。
设备:紫外灯、实验台、水槽、鞋帽架、工作服、拖鞋和口罩等。
二、基本设备配置
(一)常规设备
1.天平
2.冰箱
3.酸度计
4.离心机
5.加热器
6.蒸馏水器
(二)灭菌设备
1.高压灭菌锅
2.干燥消毒柜
3.过滤灭菌器
(三)无菌操作设备
1.超净工作台
(四)培养设备
1.培养架
2.培养箱
3.摇床
4.生物反应器
5.其它设备
(五)培养容器及用具
1.培养容器
2.金属器皿(1)镊子(2)剪刀(3)解剖刀(4)其他用具
3.塑料用具。