不同研磨方法对玉米叶片组织可溶性蛋白含量测定的影响
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２０ ． ０７５
作物杂志 Ｃ ｐ ｏ ｒ。
不同研磨方法对玉米叶片组织
可溶性蛋 白含量测定的影响
摘 要 研 究采 用石英砂 研磨 和液 氮快速 脱 水冻千两种研磨 法对提 取 玉米叶 片组 织可溶性 蛋 白含 量 的影响 。结 果显 示 ： 石英 砂研 磨 组测 得 用 玉米叶片蛋 白含 量极 显著 高于 用液氮研 磨组 所测 得 玉米叶 片蛋 白含 量。表 明不 同的前 处理 方法 可 能影响玉 米叶片组织 可溶性 蛋 白含量 的测定 。
Hale Waihona Puke 象时有发生。当福毒害达到一定程度 ， 作物就会 出 现生长迟缓、 植株变矮、 叶片褪绿等 中毒症状，
严影 产１ 重 响量 。 ］
作者简介 闰华晓， 讲师． 山东科技大学生物工程系， ６１， ６ ２５０ 青岛 赵辉（ 通讯作者）高登征， 玉， ， 杨玲 通讯地址同第１ 作者 王宪泽， 山东农业大学作物生物学国家重点实验室
１２１ 试验处理 ．．
关键作用。（ 随着 ） ３ 镐浓度的增加， 玉米幼苗丙二
醛（ Ｄ ） Ｍ Ａ 含量逐渐 增加。
关键词 玉米； 种子萌发； 锡； 幼苗生长； 抗氧
化酶 系统 ； 醛 丙二
福的毒性仅次 于 福对生物有机体 的毒性 汞， 很大， 蓄积性也很强。受镐毒害的植物不能正常 生长， 生物量下降。 近年来， 由于农业生产中施用 含有铺的肥料， 灌溉含福 的污水及大气中漂浮的
片； 定 侧
玉 米叶片组织的可溶性蛋 白是研究玉米的营 养、 作用以及生长发育等生命活动的一个重 代谢 要指标， 往往需要测定其含量的高低。从叶片中 提取蛋白 往往采用石英砂研磨法「 ， ’ 但对于样品 」 数 量较大， 为提高工作效率， 也有人采用液氮快速
研 法提 溶 磨 取可 性蛋白 。目 对 述两 不同 ］ ａ ： 前， 上 种
福在作 物和 土壤 表 而发生 沉 积、 农作 物铜 毒 害 现
选择均一、 饱满的玉米种子， ５％乙醇消毒 用７ ０ ｉ 用蒸馏水 冲洗千净， １ｍ 后， ｎ 蒸馏水浸种 １卜 ２。 将吸胀后的种子摆放于直径为 巧ｃ ｍ垫有滤纸的 培养皿 中， 分别加人相应浓度锡离子溶液 ３ｍ ９ Ｌ （ 离 子 浓 度 分别 为 ｏ 盯Ｌ ｓ岁Ｌ １ｍ 、 镐 ｍ 、 ｍ 、 酬Ｌ ０
的研 磨方法 对可溶性 蛋 白含 量测 定影 响的研 究报
道比较鲜见。本 研究以 玉米叶片为试验材料， 较 比 石 英砂和液氮处 理对玉 米叶片 可溶性蛋白含 量测定
的影 响。
１ 材料与方法
１］ 试验材料 ． 以生长 两周 的郑丹 ９ 玉米 叶片为试验材 料。 ８ ５
选取室内 盆栽生长健壮的幼苗， 取全株叶片， 剪碎 后， 搅匀， 分别称取 ０５ 左右分装， ．９ 保存于 一 ℃ ０ １ 冰箱， 待测。石英砂由天津科密欧化学试剂公 司 生产， 分析纯。液氮由周 门市畜牧局罐装。所用
２５
摘 要 研 究 了不 同浓度锅 离子 对 玉米种 子
萌 幼苗生长及抗氧化酶 系统的影响， 发、 结果表 明：１锡对玉米种子萌发、 （） 幼苗苗长具有低浓度 下的激活和高浓度下的抑制效应； 对幼苗根长具 有极显著的抑制效应。（ 锡对玉米幼苗过氧化 ） ２
物酶 （Ｏ ） Ｐ Ｄ 具有激 活 效应 ， 随锡 浓度 的增 加 激 且 活效应 逐 渐增 强 ； 对过 氧 化 氢酶 （ Ａ 存在 低 浓 ＣＴ ） 度下 的激活 和 高浓度 下 的抑 制效 应 ， 种杭 氧化 两 酶均 可被 激 活 以抵 杭 锡 的胁 迫 ， 过氧 化 物酶起 但
其他试剂 均为分析纯 。 １２ 试 验方法 ．
（． ） 。 酬９
３ 小结
本 试验 中所 采用 的 材料 来 源相 同 ， 均 为剪 且 碎 、 和均匀 的限米 叶片。在试 验 中 ， 英砂 组研 混 石
１ １ 试验设计 试验采用完全随机区组设计， ． ２ 将由石英砂研磨提取的样品设为试验 一 ， 组 由液 氮快速脱水冻干研磨法提取的样品为试验二组。 试验一组将０５ 左右的玉米叶 ．９ 片置于预冷的瓷研
作者简介 胡炳义， 副教校， 从事植物生理生化教学与研究工作， 周 口师范学院生命科学系， ６０， ６ ４０１ 河南周口 武安泉（ 通讯作者）通讯地址同第ｔ ， 作者
收稿 日期 ：（７一０ ２１ ０ ８一１ 修 回 日期 ：０７一０ ７； ２０ ９一０ ４ ２４
磨后 ， 叶片组织为均一的浆状物 ， 而液氮组快速研 磨后 ， 叶片组织变成细小的粉末。产生差异的原 因可能是与不同研磨过程中从植物组织细胞释放
胡炳 义 武安 泉
钵中， 加少量石英砂， 将样品研磨为均匀的浆状物 后， 转移到 ５ｍ 的容量瓶， ０ Ｌ 由预冷的蒸馏水定容。 置于 ４ ℃冰箱 ３ ６ｍｎ短隔 １ｍｎ ０一０ ｉ ， ０ ｉ左右摇匀 １ 次， 过滤， 测定。试验二组将 ０５ 左右的玉米叶 ．９ 片置于预冷的 瓷研钵中， 加少量液氮， 将样品快速 研磨为均匀的粉末后， 转移到 ５ｍＪ ０ Ｉ的容量瓶， 由 预冷的蒸馏水定容。置于 ４ ℃冰箱 ３ 一 ｍ ， ０ ６ ｉ每 ０ ｎ 隔 １ｍ 左右摇匀 １ 然后过滤， ０ ｉ ｎ 次， 测定。 １２２ 指标测定 玉米 叶片中可溶性蛋白含量 ．， 侧定采用考马斯亮蓝 Ｇ ５ 显色法〔。 之０ ‘ ］ １ ． 数据处理 数据采用平均数 土标准差 ．３ ２ （ 士 Ｄ表示。数据统计采用 ＳＳ１． 软件， Ｘ Ｓ） ｐＳ００ 单 因素七 检验进行统计分析。 ２ 结果与分 析 不同研磨方法对玉米叶片可溶性蛋 白 含量测 定的影响见表 １ 。试验一组采用石英砂研磨玉米 叶片提 取蛋 白， 所测 得蛋 白质 浓度 平均 值为 ６２ 群 １ ７ｍ ９试验二组用液氮快速脱水研磨玉米叶 ． ； 片提 取蛋 白， 测 得 蛋 白质 浓 度 平 均 值 为 所 ２ ９ 留９前者高于 １ ３ｍ ， ， 后者 ２．％， ５ ９ 差异极显著。
出 蛋白 少有关。 慰孙 ’ 的 多 陶 等〔 」 认为， 的 不同 前
处理方法， 使相同的 即 试验材料， 对提取的目的物 的量和结构也会产生差异。 李建武等［指出， Ｊ ’ 分
万方数据
作物杂志 Ｃ ５ 哪
Ｏ ７ ０
福离子对玉米种子萌发和生长影响的初步研究
闻华 晓 赵辉 高登征 杨玲 玉 王 宪泽
磨方法 提取 蛋 白质 引起测 定 结果 的差 异 ， 因 可 原 能是不 同的研 磨 方 法 对组 织 细 胞 的破 碎 程 度 不
同， 从而使得蛋 白 质分子从细胞中释放的程度存 在差异。本试验仅以玉米叶片组织为研究对象， 而对于其他植物叶片的影响， 有待于进一步探讨。
１自宝璋 ， 国安 ， 景 阳等 植物 生理 学 （ ： 史 赵 下 实验 教程 ）北 京 ： ． 中
本研 究从镐对 萌发玉 米种子 的生 理代谢 影 响 的 角度 ， 究不 同浓 度 福 处 理 对 萌 发玉 米 种 子 研 发芽率 和 芽 长、 长以及 丙 二 醛含 量 、 氧 化氢 根 过 酶、 过氧化物酶 活性等 生理生 化指 标的影 响 ， 为揭
示锯对玉米伤害机理的 研究提供参考。 １ 材料 与方法 １１ 供试材料 ． 鲁玉９ 郑单 ９８ 由山东农业大学提供） 号， ５ （ 。 １２ 试验处理与方法 ．
收稿 日期 ：０ 一 ３一肠 芯 回 日期 ：０７一 一 ２０ ０ ７ 修 ２０ ０ ２ ５
玉米种子培养 ２ 后， ｈ ４ 每大定时观察 ， 并连续 ｄ ６ 观察和记录其发芽情况， 直至蒸馏水对照中玉
米的发芽率 不再变化 为止。
离提取 生物大分子 物质 首先要 求其从 原来 的组织 或细胞 中 以溶解 的状 态释 放 出来 ， 选择适 当的方
参 考文献 国农业科技出版社 ，０ ： ０ ３ ２１ ７ ２陶慰孙， 李惟， 姜浦明． 蛋自质分子基础． 北京： 高等教育出版社 ，
１９ ６一 ７ ３ ３ ９２：
万方数据
３ 张龙翔， 张廷芳， 李令媛． 生化实验方法和技术（ 第二版）北京 ： ． 高等教育出版社，９ ： ２ ３３ １９ ３ 一 ７ １ １ ４李建武， 肖能赓， 余瑞元等． 生物化学实验原理和方法 北京： 北 京大学出版社，９ ：１ １９ １ ４ ８
表１ 不 同处理方法对可 溶性蛋 白含 且测定的影响 测定项目 试验 １ 组 试验二组 可溶性蛋白含量 １ ２ １０ ６７Ａ土 ３ １ ９＊ ３ ２３“ ０７ 往： 大写字母表示 ｐ 。０ 的显著水平， １ 株 ＜． １ 侮组 ８
关键词 石英砂； 液氮； 可溶性蛋白： 玉来叶
２ｍ ０ 留Ｌ和 ４ ｍ ） 以去 离子水 为 对照 ， Ｏ 岁Ｌ 。 于光照
培养箱中 进行培养， 光照时培养温度为 ２℃， ５ 每天 １ｈ无光照时培养温度为 １．℃ ， ２ ； ４ ５ 每天 １ｈ ２ 。每 个处理重复２ 每个处理培养时间为 ７。玉米 次， ｄ
培养 ２ｈ后 ， 定并记 录每组 玉米 的发 芽率 、 ４ 测 幼苗 生长状况 和某些牛理指 标。 １２２ 种子 萌发率的测 定 ，．
法将组织或细胞破碎， 破碎的程度愈高， 目的物 则 产量也愈高。植物组织中的可溶性蛋 白， 是组织 中 重要的代谢物质， 它往往反映细胞中蛋白质代 谢的 程度。 在本试验条件下， 采用石英砂研磨法 提取玉米叶片组织 可 溶性蛋白比 用液氮研磨法高 ５ ９ 差异达极显著水平。推测采用不同的研 ２．％，
作物杂志 Ｃ ｐ ｏ ｒ。
不同研磨方法对玉米叶片组织
可溶性蛋 白含量测定的影响
摘 要 研 究采 用石英砂 研磨 和液 氮快速 脱 水冻千两种研磨 法对提 取 玉米叶 片组 织可溶性 蛋 白含 量 的影响 。结 果显 示 ： 石英 砂研 磨 组测 得 用 玉米叶片蛋 白含 量极 显著 高于 用液氮研 磨组 所测 得 玉米叶 片蛋 白含 量。表 明不 同的前 处理 方法 可 能影响玉 米叶片组织 可溶性 蛋 白含量 的测定 。
Hale Waihona Puke 象时有发生。当福毒害达到一定程度 ， 作物就会 出 现生长迟缓、 植株变矮、 叶片褪绿等 中毒症状，
严影 产１ 重 响量 。 ］
作者简介 闰华晓， 讲师． 山东科技大学生物工程系， ６１， ６ ２５０ 青岛 赵辉（ 通讯作者）高登征， 玉， ， 杨玲 通讯地址同第１ 作者 王宪泽， 山东农业大学作物生物学国家重点实验室
１２１ 试验处理 ．．
关键作用。（ 随着 ） ３ 镐浓度的增加， 玉米幼苗丙二
醛（ Ｄ ） Ｍ Ａ 含量逐渐 增加。
关键词 玉米； 种子萌发； 锡； 幼苗生长； 抗氧
化酶 系统 ； 醛 丙二
福的毒性仅次 于 福对生物有机体 的毒性 汞， 很大， 蓄积性也很强。受镐毒害的植物不能正常 生长， 生物量下降。 近年来， 由于农业生产中施用 含有铺的肥料， 灌溉含福 的污水及大气中漂浮的
片； 定 侧
玉 米叶片组织的可溶性蛋 白是研究玉米的营 养、 作用以及生长发育等生命活动的一个重 代谢 要指标， 往往需要测定其含量的高低。从叶片中 提取蛋白 往往采用石英砂研磨法「 ， ’ 但对于样品 」 数 量较大， 为提高工作效率， 也有人采用液氮快速
研 法提 溶 磨 取可 性蛋白 。目 对 述两 不同 ］ ａ ： 前， 上 种
福在作 物和 土壤 表 而发生 沉 积、 农作 物铜 毒 害 现
选择均一、 饱满的玉米种子， ５％乙醇消毒 用７ ０ ｉ 用蒸馏水 冲洗千净， １ｍ 后， ｎ 蒸馏水浸种 １卜 ２。 将吸胀后的种子摆放于直径为 巧ｃ ｍ垫有滤纸的 培养皿 中， 分别加人相应浓度锡离子溶液 ３ｍ ９ Ｌ （ 离 子 浓 度 分别 为 ｏ 盯Ｌ ｓ岁Ｌ １ｍ 、 镐 ｍ 、 ｍ 、 酬Ｌ ０
的研 磨方法 对可溶性 蛋 白含 量测 定影 响的研 究报
道比较鲜见。本 研究以 玉米叶片为试验材料， 较 比 石 英砂和液氮处 理对玉 米叶片 可溶性蛋白含 量测定
的影 响。
１ 材料与方法
１］ 试验材料 ． 以生长 两周 的郑丹 ９ 玉米 叶片为试验材 料。 ８ ５
选取室内 盆栽生长健壮的幼苗， 取全株叶片， 剪碎 后， 搅匀， 分别称取 ０５ 左右分装， ．９ 保存于 一 ℃ ０ １ 冰箱， 待测。石英砂由天津科密欧化学试剂公 司 生产， 分析纯。液氮由周 门市畜牧局罐装。所用
２５
摘 要 研 究 了不 同浓度锅 离子 对 玉米种 子
萌 幼苗生长及抗氧化酶 系统的影响， 发、 结果表 明：１锡对玉米种子萌发、 （） 幼苗苗长具有低浓度 下的激活和高浓度下的抑制效应； 对幼苗根长具 有极显著的抑制效应。（ 锡对玉米幼苗过氧化 ） ２
物酶 （Ｏ ） Ｐ Ｄ 具有激 活 效应 ， 随锡 浓度 的增 加 激 且 活效应 逐 渐增 强 ； 对过 氧 化 氢酶 （ Ａ 存在 低 浓 ＣＴ ） 度下 的激活 和 高浓度 下 的抑 制效 应 ， 种杭 氧化 两 酶均 可被 激 活 以抵 杭 锡 的胁 迫 ， 过氧 化 物酶起 但
其他试剂 均为分析纯 。 １２ 试 验方法 ．
（． ） 。 酬９
３ 小结
本 试验 中所 采用 的 材料 来 源相 同 ， 均 为剪 且 碎 、 和均匀 的限米 叶片。在试 验 中 ， 英砂 组研 混 石
１ １ 试验设计 试验采用完全随机区组设计， ． ２ 将由石英砂研磨提取的样品设为试验 一 ， 组 由液 氮快速脱水冻干研磨法提取的样品为试验二组。 试验一组将０５ 左右的玉米叶 ．９ 片置于预冷的瓷研
作者简介 胡炳义， 副教校， 从事植物生理生化教学与研究工作， 周 口师范学院生命科学系， ６０， ６ ４０１ 河南周口 武安泉（ 通讯作者）通讯地址同第ｔ ， 作者
收稿 日期 ：（７一０ ２１ ０ ８一１ 修 回 日期 ：０７一０ ７； ２０ ９一０ ４ ２４
磨后 ， 叶片组织为均一的浆状物 ， 而液氮组快速研 磨后 ， 叶片组织变成细小的粉末。产生差异的原 因可能是与不同研磨过程中从植物组织细胞释放
胡炳 义 武安 泉
钵中， 加少量石英砂， 将样品研磨为均匀的浆状物 后， 转移到 ５ｍ 的容量瓶， ０ Ｌ 由预冷的蒸馏水定容。 置于 ４ ℃冰箱 ３ ６ｍｎ短隔 １ｍｎ ０一０ ｉ ， ０ ｉ左右摇匀 １ 次， 过滤， 测定。试验二组将 ０５ 左右的玉米叶 ．９ 片置于预冷的 瓷研钵中， 加少量液氮， 将样品快速 研磨为均匀的粉末后， 转移到 ５ｍＪ ０ Ｉ的容量瓶， 由 预冷的蒸馏水定容。置于 ４ ℃冰箱 ３ 一 ｍ ， ０ ６ ｉ每 ０ ｎ 隔 １ｍ 左右摇匀 １ 然后过滤， ０ ｉ ｎ 次， 测定。 １２２ 指标测定 玉米 叶片中可溶性蛋白含量 ．， 侧定采用考马斯亮蓝 Ｇ ５ 显色法〔。 之０ ‘ ］ １ ． 数据处理 数据采用平均数 土标准差 ．３ ２ （ 士 Ｄ表示。数据统计采用 ＳＳ１． 软件， Ｘ Ｓ） ｐＳ００ 单 因素七 检验进行统计分析。 ２ 结果与分 析 不同研磨方法对玉米叶片可溶性蛋 白 含量测 定的影响见表 １ 。试验一组采用石英砂研磨玉米 叶片提 取蛋 白， 所测 得蛋 白质 浓度 平均 值为 ６２ 群 １ ７ｍ ９试验二组用液氮快速脱水研磨玉米叶 ． ； 片提 取蛋 白， 测 得 蛋 白质 浓 度 平 均 值 为 所 ２ ９ 留９前者高于 １ ３ｍ ， ， 后者 ２．％， ５ ９ 差异极显著。
出 蛋白 少有关。 慰孙 ’ 的 多 陶 等〔 」 认为， 的 不同 前
处理方法， 使相同的 即 试验材料， 对提取的目的物 的量和结构也会产生差异。 李建武等［指出， Ｊ ’ 分
万方数据
作物杂志 Ｃ ５ 哪
Ｏ ７ ０
福离子对玉米种子萌发和生长影响的初步研究
闻华 晓 赵辉 高登征 杨玲 玉 王 宪泽
磨方法 提取 蛋 白质 引起测 定 结果 的差 异 ， 因 可 原 能是不 同的研 磨 方 法 对组 织 细 胞 的破 碎 程 度 不
同， 从而使得蛋 白 质分子从细胞中释放的程度存 在差异。本试验仅以玉米叶片组织为研究对象， 而对于其他植物叶片的影响， 有待于进一步探讨。
１自宝璋 ， 国安 ， 景 阳等 植物 生理 学 （ ： 史 赵 下 实验 教程 ）北 京 ： ． 中
本研 究从镐对 萌发玉 米种子 的生 理代谢 影 响 的 角度 ， 究不 同浓 度 福 处 理 对 萌 发玉 米 种 子 研 发芽率 和 芽 长、 长以及 丙 二 醛含 量 、 氧 化氢 根 过 酶、 过氧化物酶 活性等 生理生 化指 标的影 响 ， 为揭
示锯对玉米伤害机理的 研究提供参考。 １ 材料 与方法 １１ 供试材料 ． 鲁玉９ 郑单 ９８ 由山东农业大学提供） 号， ５ （ 。 １２ 试验处理与方法 ．
收稿 日期 ：０ 一 ３一肠 芯 回 日期 ：０７一 一 ２０ ０ ７ 修 ２０ ０ ２ ５
玉米种子培养 ２ 后， ｈ ４ 每大定时观察 ， 并连续 ｄ ６ 观察和记录其发芽情况， 直至蒸馏水对照中玉
米的发芽率 不再变化 为止。
离提取 生物大分子 物质 首先要 求其从 原来 的组织 或细胞 中 以溶解 的状 态释 放 出来 ， 选择适 当的方
参 考文献 国农业科技出版社 ，０ ： ０ ３ ２１ ７ ２陶慰孙， 李惟， 姜浦明． 蛋自质分子基础． 北京： 高等教育出版社 ，
１９ ６一 ７ ３ ３ ９２：
万方数据
３ 张龙翔， 张廷芳， 李令媛． 生化实验方法和技术（ 第二版）北京 ： ． 高等教育出版社，９ ： ２ ３３ １９ ３ 一 ７ １ １ ４李建武， 肖能赓， 余瑞元等． 生物化学实验原理和方法 北京： 北 京大学出版社，９ ：１ １９ １ ４ ８
表１ 不 同处理方法对可 溶性蛋 白含 且测定的影响 测定项目 试验 １ 组 试验二组 可溶性蛋白含量 １ ２ １０ ６７Ａ土 ３ １ ９＊ ３ ２３“ ０７ 往： 大写字母表示 ｐ 。０ 的显著水平， １ 株 ＜． １ 侮组 ８
关键词 石英砂； 液氮； 可溶性蛋白： 玉来叶
２ｍ ０ 留Ｌ和 ４ ｍ ） 以去 离子水 为 对照 ， Ｏ 岁Ｌ 。 于光照
培养箱中 进行培养， 光照时培养温度为 ２℃， ５ 每天 １ｈ无光照时培养温度为 １．℃ ， ２ ； ４ ５ 每天 １ｈ ２ 。每 个处理重复２ 每个处理培养时间为 ７。玉米 次， ｄ
培养 ２ｈ后 ， 定并记 录每组 玉米 的发 芽率 、 ４ 测 幼苗 生长状况 和某些牛理指 标。 １２２ 种子 萌发率的测 定 ，．
法将组织或细胞破碎， 破碎的程度愈高， 目的物 则 产量也愈高。植物组织中的可溶性蛋 白， 是组织 中 重要的代谢物质， 它往往反映细胞中蛋白质代 谢的 程度。 在本试验条件下， 采用石英砂研磨法 提取玉米叶片组织 可 溶性蛋白比 用液氮研磨法高 ５ ９ 差异达极显著水平。推测采用不同的研 ２．％，