酪蛋白的制备实验报告
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篇一：酪蛋白的制备----生化实验
酪蛋白的制备
一、目的
1、学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。
2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。
二、原理
牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。
酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。
利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的ph调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。
三、材料、试剂与器具
（一）材料
新鲜牛奶
（一）试剂
1、95%乙醇1200mL
2、无水乙醚1200mL
3、0.2mol/Lph4.7醋酸——醋酸钠缓冲液300ml先配A液与b液
A液：0.2mol/L醋酸钠溶液称naAc·3h2o54.44g，定容至2000ml。
b液：0.2mol/L醋酸溶液，称优纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g定容至1000ml。
取A液1770ml，b液1230ml混合即得ph4.7的醋酸——醋酸钠缓冲液3000ml。
4、乙醇——乙醚混合液
乙醇：乙醚=1：1（V/V）
（二）器具
1、离心机
2、抽滤装置
3、精密ph试纸或酸度计
4、电炉
5、烧杯
6、温度计
四、操作步骤
（一）酪蛋白的粗提
100mL牛奶加热至40℃。
在搅拌下慢慢加入预热至40℃、ph4.7的醋酸缓冲液100mL.用精密ph试纸或酸度计调ph至4.7。
将上述悬浮液冷却至室温。
离心15分钟（3000r/min）。
弃去清液，得酪蛋白粗制品。
（二）酪蛋白的纯化
1、用水洗涤沉淀3次，离心10分钟（3000r/min），弃去上清液。
2、在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。
最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。
3、将沉淀摊开在表面上，风干；得酪蛋白纯品。
（三）准确称重，计算含量和得率。
含量：酪蛋白g/100mL牛乳（g%）
式中理论含量为3.5g/100mL牛乳。
五、注意事项
1、由于本法是应用等电点沉淀法来制备蛋白质，故调节牛奶液的等电点一定要准确。
最好用酸度计测定。
2、精制过程用乙醚是挥发性、有毒的有机溶剂，最好在通风橱内操作。
3、目前市面上出售的牛奶是经加工的奶制品，不是纯净牛奶，所以计算时应按产品的相应指标计算。
六、实验报告
1、根据实际操作，以流程图形式总结酪蛋的制备方法。
2、合理分析实验所得率
七、思考题
1、制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？
2、试设计另一种提取酪蛋白的方法？
篇二：实验四、酪蛋白的制备
实验四、酪蛋白的制备
一、目的
1、学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。
2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。
二、原理
牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。
酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。
利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的ph调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。
三、材料、试剂与器具（一）材料新鲜牛奶（一）试剂
1、95%乙醇1200mL
2、无水乙醚1200mL
3、0.2mol/Lph4.7醋酸——醋酸钠缓冲液3000ml先配A液与b液
A液：0.2mol/L醋酸钠溶液称naAc?3h2o54.44g，定容至2000ml。
b液：0.2mol/L醋酸溶液，称优纯醋酸（含量大于99.8%----用冰醋酸也可以）24.0g定容至2000ml。
取A液1770ml，b液1230ml混合即得ph
4.7的醋酸——醋酸钠缓冲液3000ml。
4、乙醇——乙醚混合液乙醇：乙醚=1：1（V/V）（二）器具
1、离心机
2、抽滤装置
3、精密ph试纸或酸度计
4、恒
温水浴箱5、烧杯
四、操作步骤
（一）酪蛋白的粗提
10mL牛奶加热至40℃。
在搅拌下慢慢加入预热至40℃、ph4.7的醋酸缓冲液10mL.用精密ph试纸或酸度计调ph至4.7。
将上述悬浮液冷却至室温。
离心8-10分钟
（3500-4000r/min）。
弃去清液，得酪蛋白粗制品。
（二）酪蛋白的纯化
1、用水洗涤沉淀3次，离心5分钟（3500-4000r/min），弃去上清液。
2、在沉淀中加入20mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。
最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。
3、将沉淀摊开在表面皿上，风干；得酪蛋白纯品。
（三）准确称重，计算含量和得率。
含量=酪蛋白g/10mL牛乳（g%）得率=﹝测得含量/理论含量﹞x100%式中理论含量为3.5g/100mL牛乳。
五、注意事项
1、由于本法是应用等电点沉淀法来制备蛋白质，故调节牛奶液的等电点一定要准确。
最好用酸度计测定。
2、精制过程用乙醚是挥发性、有毒的有机溶剂，最好在通风橱内操作。
3、目前市面上出售的牛奶是经加工的奶制品，不是纯
净牛奶，所以计算时应按产品的相应指标计算。
六、实验报告
1、根据实际操作，以流程图形式总结酪蛋的制备方法。
2、合理分析实验所得率七、思考题
1、制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？
2、试设计另一种提取酪蛋白的方法？
琼州学院实验项目卡
生物科学与技术学院生化实验室设日期___年__月__日
实验教师签名______________________实验员（管理员）签名______________
篇三：实验酪蛋白的制备
实验四酪蛋白的制备
一、实验目的
1、学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。
2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。
二、实验原理
牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。
酪
蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。
利用等电
点时溶解度最低的原理，将牛乳的ph调至4.7时，酪蛋白
就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。
三、材料、试剂与仪器
1.材料
新鲜牛奶
2.试剂
（1）95%乙醇1200mL
（2）无水乙醚1200mL
（3）0.2mol/Lph4.7醋酸—醋酸钠缓冲液300ml先配A 液与b液
A液：0.2mol/L醋酸钠溶液称naAc·3h2o54.44g，定容至2000ml。
b液：0.2mol/L醋酸溶液，称优纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g定容至1000ml。
取A液1770ml，b液1230ml混合即得ph4.7的醋酸——醋酸钠缓冲液3000ml。
（4）乙醇—乙醚混合液乙醇：乙醚=1：1（V/V）
3.仪器
离心机、抽滤装置、精密ph试纸或酸度计、电炉、烧杯、温度计
四、操作步骤
1.酪蛋白的粗提
100mL牛奶加热至40℃。
在搅拌下慢慢加入预热至40℃、ph4.7的醋酸缓冲液100mL.用精密ph试纸或酸度计调ph至4.7。
将上述悬浮液冷却至室温。
离心15分钟（3000r/min）。
弃去清液，得酪蛋白粗制品。
2.酪蛋白的纯化
（1）用水洗涤沉淀3次，离心10分钟（3000r/min），弃去上清液。
（2）在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。
最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。
（3）将沉淀摊开在表面上，风干；得酪蛋白纯品。
3.准确称重，计算含量和得率。
含量：酪蛋白g/100mL牛乳（g%）
五、实验结果及分析式中理论含量为3.5g/100mL牛乳。
六、思考题
1、制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？。