治疗产品中聚乙烯亚胺含量的检测方法[发明专利]

(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010939657.X
(22)申请日 2020.09.09
(71)申请人 和元生物技术（上海）股份有限公司
地址 200135 上海市浦东新区中国(上海)
自由贸易试验区张江路1238弄1号6层
B、C、D、E座
(72)发明人 党金玲　郑琳松　贾国栋　由庆睿　
潘讴东　吴周凯凯　陈井波　
(74)专利代理机构 广州华进联合专利商标代理
有限公司 44224
代理人 侯武娇
(51)Int.Cl.
G01N 30/02(2006.01)
G01N 30/72(2006.01)
(54)发明名称
治疗产品中聚乙烯亚胺含量的检测方法
(57)摘要
本发明涉及治疗产品中聚乙烯亚胺含量的
检测方法，治疗产品中聚乙烯亚胺含量的检测方
法包括以下步骤：获取聚乙烯亚胺对照品；采用
高效液相色谱‑电雾式检测器联用技术检测对照
品；获取待测品；采用高效液相色谱‑电雾式检测
器联用技术检测待测品；比对对照品和待测品的
检测结果，获得待测品中聚乙烯亚胺的含量。

上
述方法能够准确检测治疗产品中聚乙烯亚胺含
量。

权利要求书2页 说明书8页 附图3页CN 112255326 A 2021.01.22
C N 112255326
A
1.高效液相色谱-电雾式检测器联用技术在检测治疗产品中聚乙烯亚胺含量中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述治疗产品为含有聚乙烯亚胺载体的基因治疗产品。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述高效液相色谱-电雾式检测器联用技术中的高效液相色谱为尺寸排阻高效液相色谱。

4.一种治疗产品中聚乙烯亚胺含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
获取聚乙烯亚胺对照品；
采用高效液相色谱-电雾式检测器联用技术检测所述对照品；
获取待测品；
采用高效液相色谱-电雾式检测器联用技术检测所述待测品；
比对所述对照品和所述待测品的检测结果，获得所述待测品中聚乙烯亚胺的含量。

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，比对所述对照品和所述待测品的检测结果的步骤中，根据以下公式获得聚乙烯亚胺的含量：
其中，C表示聚乙烯亚胺的含量(ng/mL)；
m1表示所述对照品的进样量(ng)；
A1表示所述对照品的检测结果中聚乙烯亚胺对应的峰面积；
A2表示所述待测品的检测结果中聚乙烯亚胺对应的峰面积；
V2表示所述待测品的进样体积(mL)。

6.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述治疗产品为含有聚乙烯亚胺载体的基因治疗产品，高效液相色谱为尺寸排阻高效液相色谱。

7.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，获取待测品的步骤包括以下步骤：
将待测治疗产品和溶剂进行混合，得到混合液；
将所述混合液进行超滤离心处理，收集滤液，所述滤液即为所述待测品。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述超滤离心处理的条件为：采用100K～300K的超滤离心管，以4000rpm～8000rpm的转速离心20min～30min。

9.根据权利要求4任一项所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱-电雾式检测器联用技术的高效液相色谱条件为：
流动相为乙腈、水和甲酸组成的混合液，其中，乙腈和水的体积比为1:(7-10)，甲酸在流动相中的体积百分含量为0.5％-1％；
流动相的流速0.8mL/min～1.2mL/min，色谱柱为聚合物分子筛色谱柱，柱温为20℃～30℃。

10.根据权利要求4-9任一项所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱-电雾式检测器联用技术中，电雾式检测器的检测条件为：频率5MHz，滤波3.6s。

11.一种含聚乙烯亚胺的治疗产品的质检方法，其特征在于，包括以下步骤：
将含聚乙烯亚胺的治疗产品配制成待测品；
采用高效液相色谱-电雾式检测器联用技术对所述待测品中的聚乙烯亚胺进行定量；
当所述待测品的聚乙烯亚胺的定量结果低于预定值，判定所述治疗产品合格；当所述待测品的聚乙烯亚胺的定量结果高于预定值，判定所述治疗产品不合格。

治疗产品中聚乙烯亚胺含量的检测方法
技术领域
[0001]本发明涉及仪器分析技术领域，特别涉及治疗产品中聚乙烯亚胺含量的检测方法。

背景技术
[0002]近年来，基因治疗作为一种新型疗法快速发展，数款基因治疗产品如Luxturna、Yescarta、T-vec、Strimvelis等陆续推上市场。

基因治疗产品的治疗效果很大程度上依赖于基因转染系统，即通过使用特定的转染试剂将带有目的基因的载体运送至细胞内。

[0003]目前，应用最广泛的转染试剂包括阳离子脂质体和阳离子聚合物。

其中，阳离子脂质体在体外基因转染中具有很高的效率，但在体内，它会被迅速清除，并在肺组织内积累，诱发强烈的抗炎反应，且具有毒性，因此应用受到限制。

而阳离子聚合物聚乙烯亚胺(Polyethylenimine,PEI)为人工合成的聚合物，是一种含有极高密度正电荷的有机大分子阳离子聚合物，其可以将DNA凝聚成紧密的颗粒，进入细胞，并将DNA吸收到细胞核中，是目前较为有效的聚阳离子型基因载体，被广泛应用于DNA载体的设计。

然而，随着PEI用量的增大，其细胞毒性也随之升高，故治疗产品中PEI残留对临床用药安全性具有很大影响，在产品放行检测时检测PEI残留量(即PEI含量)具有较大意义。

目前并没有PEI含量检测方法，因此，急需研发一种能够准确检测治疗产品中聚乙烯亚胺含量的检测方法。

发明内容
[0004]基于此，有必要提供一种能够准确检测治疗产品中聚乙烯亚胺含量的检测方法。

[0005]高效液相色谱-电雾式检测器联用技术在检测治疗产品中聚乙烯亚胺含量中的应用。

[0006]在其中一实施例中，所述治疗产品为含有聚乙烯亚胺载体的基因治疗产品。

[0007]在其中一实施例中，所述高效液相色谱-电雾式检测器联用技术中的高效液相色谱为尺寸排阻高效液相色谱。

[0008]一种治疗产品中聚乙烯亚胺含量的检测方法，包括以下步骤：
[0009]获取聚乙烯亚胺对照品；
[0010]采用高效液相色谱-电雾式检测器联用技术检测所述对照品；
[0011]获取待测品；
[0012]采用高效液相色谱-电雾式检测器联用技术检测所述待测品；
[0013]比对所述对照品和所述待测品的检测结果，获得所述待测品中聚乙烯亚胺的含量。

[0014]在其中一实施例中，比对所述对照品和所述待测品的检测结果的步骤中，根据以下公式获得聚乙烯亚胺的含量：
[0015]
[0016]其中，C表示聚乙烯亚胺的含量(ng/mL)；
[0017]m1表示所述对照品的进样量(ng)；
[0018]A1表示所述对照品的峰面积；
[0019]A2表示所述待测品的峰面积；
[0020]V2表示所述待测品的进样体积(mL)。

[0021]在其中一实施例中，所述治疗产品为含有聚乙烯亚胺载体的基因治疗产品，所述高效液相色谱为尺寸排阻高效液相色谱。

[0022]在其中一实施例中，获取待测品的步骤包括以下步骤：
[0023]将待测治疗产品和溶剂进行混合，得到混合液；
[0024]将所述混合液进行超滤离心处理，收集滤液，所述滤液即为所述待测品。

[0025]在其中一实施例中，所述超滤离心处理的条件为：采用100K～300K的超滤离心管，以4000～8000rpm的转速离心20min～30min。

[0026]在其中一实施例中，所述高效液相色谱-电雾式检测器联用技术的色谱条件为：[0027]流动相为乙腈、水和甲酸组成的混合液，其中，乙腈和水的体积比为1:(7-10)，甲酸在流动相中的体积百分含量为0.5％-1％；
[0028]流动相的流速0.8ml/min～1.2ml/min，色谱柱为聚合物分子筛色谱柱，温度为20℃～30℃。

[0029]在其中一实施例中，所述高效液相色谱-电雾式检测器联用技术中，电雾式检测器检测条件为：频率5MHz，滤波3.6s。

[0030]一种含聚乙烯亚胺的治疗产品的质检方法，包括以下步骤：
[0031]将含聚乙烯亚胺的治疗产品配制成待测品；
[0032]采用高效液相色谱-电雾式检测器联用技术对所述待测品中的聚乙烯亚胺进行定量；
[0033]当所述待测品的聚乙烯亚胺的定量结果低于预定值，判定所述治疗产品合格；当所述待测品的聚乙烯亚胺的定量结果高于预定值，判定所述治疗产品不合格。

[0034]在其中一实施例中，所述治疗产品为基因治疗产品，所述预定值为。

[0035]通过采用高效液相色谱-电雾式检测器(HPLC-CAD)联用技术，使样品首先经高效液相色谱进行分离，然后分离后的洗脱液进入电雾式检测器(CAD)中进行检测，根据CAD检测结果即可实现对治疗产品中聚乙烯亚胺含量的定量。

该方法能够有效地避免聚乙烯亚胺没有紫外吸收而无法检测的问题，且该方法检测限低，灵敏度高，能够准确地检测出治疗产品中残留的微量聚乙烯亚胺的含量，进而可以有效地提高临床用药的安全性。

附图说明
[0036]图1为实施例1的PEI对照品不同进样量色谱图；
[0037]图2为实施例1的PEI-CAD线性标准曲线图；
[0038]图3为实施例1的PEI对照品检测限色谱图；
[0039]图4为实施例3的2个不同分析人员PEI重复性进样检测的色谱图；
[0040]图5为3个治疗产品的检测谱图。

具体实施方式
[0041]为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述，并给出了本发明的较佳实施例。

但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。

相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。

[0042]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。

本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。

本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

[0043]本发明一实施方式提供了，高效液相色谱-电雾式检测器联用技术在检测治疗产品中聚乙烯亚胺含量中的应用。

[0044]本发明中，“治疗产品”是指包含或不包含聚乙烯亚胺载体(转染试剂)的产品，可理解的，该治疗产品可以包括一种或多种载体，其中，载体包括但不限于PEI，其还可以含有其他载体如脂质体等，不应理解为对本发明的限制，当含量为0表示不含有PEI，当含量大于0表示含有PEI。

另外，该治疗产品还可以包括负载在载体上的药物，药物的种类无特别限定，包括但不限于小分子药物、基因DNA、基因DNA/siRNA、探针和诊断试剂，如治疗基因、RB 基因和p53基因、紫杉醇、消炎痛、抗叶酸类(如甲氨蝶呤)、抗嘌呤类(如巯嘌呤)、抗嘧啶类(如氟尿嘧啶、替加氟)、核苷酸还原酶抑制药(如羟基脲)、脱氧核糖核苷酸多聚酶抑制药(如环胞苷)、直接影响和破坏DNA结构及其功能的药物(如氮芥、环磷酰胺、氮甲、顺铂、丝裂霉素、喜树碱)，及其组合等。

[0045]本发明中，“高效液相色谱-电雾式检测器(HPLC-CAD)联用技术”应按本领域的常规理解，指高效液相色谱(High performance liquid chromatography，HPLC)和电雾式检测器(Charged Aerosol Detection，CAD)串联分析技术。

[0046]其中，CAD的检测原理为：洗脱液进入电雾式检测器后，经雾化形成颗粒，并进入到干燥管挥发掉表面的溶剂。

与此同时，氮气在Corona电晕针作用下成为表面带有正电荷的氮气粒子，随后与目标化合物颗粒在碰撞室相碰撞，并将表面的正电荷转移至颗粒上，使得颗粒表面积和最终携带的电荷数成正比，接着经过离子阱装置中和掉氮气粒子上的电荷，从而避免氮气粒子引起较高背景噪音的影响，并使得待测物颗粒进入到采集器，最终通过一个高灵敏度的静电检测计显示出与待测物质量成正比的电流信号，进而能够实现目标化合物的准确定量。

[0047]通过采用高效液相色谱-电雾式检测器(HPLC-CAD)联用技术，使样品首先经高效液相色谱进行分离，然后分离后的洗脱液进入电雾式检测器(CAD)中进行检测，根据CAD检测结果即可实现对治疗产品中聚乙烯亚胺含量的定量。

该方法能够有效地避免聚乙烯亚胺没有紫外吸收而无法检测的问题，且该方法检测限低，灵敏度高，能够准确地检测出治疗产品中残留的微量聚乙烯亚胺的含量，进而可以有效地提高临床用药的安全性。

[0048]在一实施例中，治疗产品为含有聚乙烯亚胺载体的基因治疗产品。

基因治疗产品主要通过向靶细胞或组织中引入外源的DNA或RNA片段以纠正或补偿基因的缺陷或抑制异常表达的基因，从而达到治疗的目的的产品。

本发明中，基因治疗产品的具体种类无特别限定，适用于现有的任意含有PEI的基因治疗产品的残留PEI检测。

[0049]进一步地，高效液相色谱-电雾式检测器联用技术中，高效液相色谱为尺寸排阻高
效液相色谱(SEC)。

[0050]尺寸排阻高效液相色谱是通过不同的分子量大小的物质在色谱柱中的路径不同而进行分离。

通过采用尺寸排阻高效液相色谱能够对供试品中不同分子量物质进行分离，便于后续检测；
[0051]本发明另一实施方式的治疗产品中聚乙烯亚胺含量的检测方法，包括以下步骤：[0052]S101:获取聚乙烯亚胺对照品；
[0053]步骤S101中，聚乙烯亚胺可为市售标准原料或采用现有的方法制备得到的产品，将其配制成所需浓度的对照品即可。

其中，对照品的浓度无特别限定，可以根据实际检测需求进行调节。

在一实施例中，对照品的浓度为0.5μg/mL～1.2μg/mL。

进一步地，选择流动相溶剂体系配制对照品，以降低溶剂基质的影响。

[0054]S102:采用高效液相色谱-电雾式检测器联用技术检测对照品；
[0055]可以将预定量的对照品注入高效液相色谱仪中，确定聚乙烯亚胺的保留时间，并获得该组分的峰面积，以方便与待测品进行比对。

[0056]可理解的，步骤S102中可以检测一系列不同进样量的对照品信息，并绘制对照品的进样量-峰面积的标准曲线，以方便确定该方法的线性程度，同时也方便待测品的定量。

[0057]可理解的，每次检测的进样量无特别限定，可以根据实际需求进行调整；在一实施例中，最低进样量为48ng～52ng。

[0058]进一步地，治疗产品为基因治疗产品，高效液相色谱为尺寸排阻高效液相色谱。

基因治疗产品及尺寸排阻高效液相色谱如上所述，在此不再进行赘述。

[0059]进一步地，流动相为乙腈、水和甲酸组成的混合液；更进一步地，流动相中乙腈和水的体积比为1:(7-10)，甲酸在流动相中的体积百分含量为0.5％-1％。

更进一步地，流动相中乙腈和水的体积比为1:8，甲酸在流动相中的体积百分含量为0.66％。

[0060]进一步地，色谱条件为：流动相的流速0.8ml/min～1.2ml/min，色谱柱为聚合物分子筛色谱柱，温度为20℃-30℃。

[0061]更进一步地，色谱条件为：流动相的流速1ml/min，色谱柱为MabPAC SEC-1，300A 5μm 300*7.8mm，温度为22℃。

[0062]进一步地，CAD的检测条件为：频率5MHz，滤波3.6s。

[0063]S103：获取待测品；
[0064]可理解的，步骤S103的待测品为能够注入高效液相色谱仪中进行分析的样品。

当样品无法直接使用时，应理解为步骤S103还包括对样品进行预处理的步骤，例如溶解、稀释、酶解等，具体预处理方法可以根据样品的具体情况进行选择，采用现有的方法进行处理，应理解为均在本发明的保护范围内。

[0065]进一步地，优选步骤S103包括以下步骤：
[0066]将待测治疗产品和溶剂进行混合，得到混合液；
[0067]将混合液进行超滤离心处理，收集滤液，滤液即为待测品。

[0068]通过超滤离心处理可以先排除掉分子量较大的组分，例如：如病毒样品中的病毒)，而聚乙烯亚胺能够透过超滤膜，进入滤液中，能够降低其他组分的干扰，降低后续分离难度，提高测试的准确度。

[0069]在一实施例中，采用100K～300K的超滤离心管，以4000～8000rpm的转速离心20～
30min。

[0070]S104：采用高效液相色谱-电雾式检测器联用技术检测待测品；
[0071]可理解的，步骤S104的检测方法及其原理同步骤S102，在此不再进行赘述。

[0072]进一步地，高效液相色谱为尺寸排阻高效液相色谱，流动相为乙腈、水和甲酸组成的混合液；更进一步地，流动相中乙腈和水的体积比为1:(7-10)，甲酸在流动相中的体积百分含量为0.5％-1％。

更进一步地，流动相中乙腈和水的体积比为1:8，甲酸在流动相中的体积百分含量为0.66％。

[0073]进一步地，色谱条件为：流动相的流速0.8ml/min～1.2ml/min，色谱柱为聚合物分子筛色谱柱，温度为20℃-30℃。

[0074]更进一步地，色谱条件为：流动相的流速1ml/min，色谱柱为MabPAC SEC-1，300A 5μm 300*7.8mm，温度为22℃。

[0075]进一步地，CAD的检测条件为：频率5MHz，滤波3.6s。

[0076]S105:比对对照品和待测品的检测结果，获得待测品中聚乙烯亚胺的含量。

[0077]可理解的，比对对照品和待测品的检测结果是指，将对照品的峰形与待测品在相同或基本相同的色谱条件下经高效液相色谱-电雾式检测器检测所得到的峰形和保留时间进行比对，从而进行定性，进一步地，通过对照品和待测品的峰面积、进样量即可实现定量。

[0078]在一实施例中，根据以下公式获得聚乙烯亚胺的含量：
[0079]
[0080]其中，C表示聚乙烯亚胺的含量(ng/mL)；
[0081]m1表示对照品的进样量(ng)；
[0082]A1表示对照品的峰面积；
[0083]A2表示待测品的峰面积；
[0084]V2表示待测品的进样体积(mL)。

[0085]可理解的，上述步骤S101～S105的步骤顺序仅为示例，并非唯一顺序，不能理解为对本发明的限制，各步骤的顺序只需能够根据本领域的常规技术能够实现即可。

例如可以先配制待测品，再配制对照品；可以先配制对照品和待测品后，再分别对待测品和对照品进行检测。

[0086]需要说明的是，本发明的检测方法并不局限于仅采用电雾式检测器进行检测，还可以与其他检测器并行，如二级阵列检测器(Diode Drray Detector，DAD)等，以提高测试的准确性，应理解为均在本发明的保护范围内。

在一实施例中，样品经高效液相色谱分离后，洗脱液分别经CAD和DAD检测，进一步地，优选DAD的检测波长为UV@260nm～280nm。

[0087]上述方法能够实现聚乙烯亚胺的准确定量，且该方法检测限低，灵敏度高，能够准确地检测出治疗产品中残留的微量聚乙烯亚胺的含量，进而可以有效地提高临床用药的安全性。

[0088]本发明还提供了一种含聚乙烯亚胺的治疗产品的质检方法，包括以下步骤：[0089]S201:将含聚乙烯亚胺的治疗产品配制成待测品；
[0090]待测品的制备方法如步骤S103，在此不再进行赘述。

[0091]S202:采用高效液相色谱-电雾式检测器联用技术对所述待测品中的聚乙烯亚胺
进行定量；
[0092]步骤S202的定量方法可以采用以下方法进行定量：
[0093]S2021:获取聚乙烯亚胺对照品；
[0094]步骤S2021同步骤S101，在此不进行赘述。

[0095]S2022：采用高效液相色谱-电雾式检测器联用技术检测对照品；
[0096]步骤S2022同步骤S102，在此不进行赘述。

[0097]S2023：采用高效液相色谱-电雾式检测器联用技术检测待测品；
[0098]步骤S2023同步骤S104，在此不进行赘述。

[0099]S2024：比对对照品和待测品的检测结果，获得待测品中聚乙烯亚胺的含量。

[0100]具体如步骤S105，在此不再进行赘述。

[0101]S203:当待测品的聚乙烯亚胺的定量结果低于预定值，判定治疗产品合格；当待测品的聚乙烯亚胺的定量结果高于预定值，判定治疗产品不合格。

[0102]步骤S203中的预定值根据产品的实际需求进行设定，在此不进行特别限定。

[0103]下面列举具体实施例来对本发明进行说明。

[0104]以下实施例中所使用的试剂及仪器设备的生产厂商如下，未列举试剂为常规市售试剂。

[0105]Polyplus PEI生产厂商：Polyplus-transfection
[0106]AAV，生产厂商：和元生物技术(上海)股份有限公司
[0107]LV1，生产厂商：和元生物技术(上海)股份有限公司
[0108]LV2，生产厂商：和元生物技术(上海)股份有限公司
[0109]高效液相色谱仪-电雾式检测器，型号：U3000生产厂商：Thermo
[0110]实施例1
[0111]考察CAD检测器对不同PEI进样量相应信号的线性程度
[0112]实验方法：
[0113](1)流动相配制：量取乙腈100ml，加水800ml，加甲酸6ml，混匀。

[0114](2)取Polyplus PEI(1mg/ml)50μl，加流动相950μl，混匀，得到对照品；[0115](3)按照下表1所示的进样量，依次向高效液相色谱仪注入对照品，并采用电雾式检测器进行检测。

其中，色谱条件为：流动相的流速1ml/min，色谱柱为MabPAC SEC-1，300A 5μm 300*7.8mm，温度为22℃；CAD检测条件：频率5MHz，滤波3.6s，运行时间8min。

[0116]表1
[0117]
[0118]从图1和图2可以看出，PEI-CAD的标准曲线的相关系数R2＝0.9965，检测限约为
50ng/mL，且如图3所示，以信噪比进行方法灵敏度确定，其灵敏度低于50ng(S/N＝3.9)。

说明，上述方法检测PEI含量的线性和灵敏度良好，可满足治疗产品放行中的PEI含量检测。

[0119]实施例2
[0120]加标回收试验
[0121]测试样品：同实施例1
[0122]试验方法：按照实施例1的方法和表2所示加标量进行试验，测试结果如表2所示；[0123]表2
[0124]
[0125]从表2可以看出，上述方法具有较高的回收率，说明本发明的方法具有较高的准确性。

[0126]实施例3
[0127]重复性验证试验
[0128]测试样品：同实施例1
[0129]测试方法：两名分析人员采用相同的方法分别按照实施例1的方法进行测试，每人平行测试三次，测试结果如表3，检测的谱图如图4所示。

[0130]表3
[0131]
[0132]从表3可以看出，上述方法人员间差异较小，说明本发明的方法具有较高的重复性。

[0133]实施例4
[0134]基因治疗产品的PEI含量检测
[0135]测试样品：重组腺相关病毒，重组慢病毒1，重组慢病毒2
[0136]测试方法：
[0137](1)流动相配制：量取乙腈100ml，加水800ml，加甲酸6ml，混匀。

[0138](2)供试品制备：取500μl供试品，加55μl 1～5％SDS,1～10μl蛋白酶K。

56℃孵育1～2h。

取出后98℃下处理10min，恢复室温后，加入Benzonase 5μl，37℃孵育1h。

取出后加入流动相2～4.5ml，混匀。

转移至100～300K超滤管，4000～6000rpm离心5～20min。

[0139](3)对照品溶液制备：取Polyplus PEI(1mg/ml)100μl，加流动相9000μl，混匀即得。

[0140](4)分别向高效液相色谱仪注入对照品和供试样品，并采用电雾式检测器进行检测，并根据以下公式获得聚乙烯亚胺的含量，测试结果如表4，三个病毒样品叠加谱图如图5
所示。

[0141]
[0142]其中，C表示聚乙烯亚胺的含量(ng/mL)；
[0143]m1表示所述对照品的进样量(ng)；
[0144]A1表示所述对照品的检测结果中聚乙烯亚胺对应的峰面积；
[0145]A2表示所述待测品的检测结果中聚乙烯亚胺对应的峰面积；
[0146]V2表示所述待测品的进样体积(mL)。

[0147]其中，色谱条件为：流动相的流速0.2～1.0ml/min，色谱柱为MabPAC SEC-1，300A 5μm 300*7.8mm，温度为22℃；CAD检测条件：频率5MHz，滤波3.6s，运行时间15min。

[0148]表4
[0149]
[0150]
[0151]从表4可以看出，样品LV1中PEI含量较高，临床用药安全性较低，而其他样品PEI含量较低，临床用药安全性较高。

[0152]综上，本发明的方法能够准确检测治疗产品中聚乙烯亚胺含量，且该方法检测限低，灵敏度高，能够准确地检测出治疗产品中残留的微量聚乙烯亚胺的含量，进而可以有效地提高临床用药的安全性。

[0153]以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

[0154]以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。

应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。