电化学发光的临床应用
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第二篇 临床应用
第三篇 检测项目 一、甲状腺功能 二、激素 三、肿瘤标志 四、心肌标志 五、骨标志 六、 感 染 性 疾 病 七、贫血 八、糖尿病 九、 过 敏 反 应 十、 药 物
第一篇 电化学发光免疫测定 1959 年 Berson 和 Yalow 建立了放射免疫分析方法（RIA），大大提高了免疫测定的敏感度。这种标记免疫测定开拓 了医学检验的新领域，应用于激素、蛋白质、感染性疾病的抗原和抗体以及药物等的微量测定。
TPA*，这是一种非常强的还原剂。这两个高反应基团在电极表面迅速反应，三价的[Ru(bpy)3]3+被还原形成激发态的二 价[Ru(bpy)3]2+*，能量来源于[Ru(bpy)3]3+和 TPA*之间存在的高电化学电位差。TPA*自身被氧化成二丙胺和丙醛。接着 激发态的 [Ru(bpy)3]2+*衰减成基态的[Ru(bpy)3]2+，同时发射一个波长 620nm 的光子。这一过程在电极表面周而复始地 进行，产生许多光子，使光信号得以增强。
图 1 三联吡啶钌 NHS
-H+
TPA+*
TPA*
TPA
＋
-e
Ru2＋* Ru3+
光子 Ru2＋
-e
＋
图 2 在电极表面的 ECL 反应
Ru2＋: Ru3＋: Ru2＋*:
[ Ru(bpy)3] 2+ [Ru(bpy)3]3+ [Ru(bpy)3]2+*
基态 氧化态 激发态
二、电化学发光免疫测定
以三联吡啶钌作为标记物，标记抗原或抗体，通过免疫反应及 ECL 反应，即可进行电化学发光免疫测定 （ECLIA）。在实际应用中则尚有特定的仪器和试剂。瑞士罗氏公司（ROCHE）的 Elecsys ECLIA 系统，综合了各种先 进技术，具有独特的优越性，已在医学检验中取得广泛应用。
这三台检测系统均应用了电化学发光免
疫测定、链酶亲和素和生物素间接包被和嵌合性抗体等先进技术，其测试的灵敏度和特异性相同，有完善的使用说明，
试剂通用，操作也有相同之处，仪器设计上有一些差异，主要不同在于工作量不同。Elecsys1010 每小时可进行 60 个测
试，适用于中、小工作量的实验室使用，Elecsys2010 每小时可进行 85 个测试，适用于中等工作量的实验室使用，E170
9、反应时间：9 或 18 分钟
10、样品杯：样品可使用 2 毫升（标准）日立杯、微量日立杯及塑料试管。
11、孵育杯：分析孵育杯可加载 128 支
（二）口丫啶酯参加的 CL 反应：这类化学发光剂不需要催化剂的参与，在过氧化氢的稀碱溶液中即能发光。发射光 的波长为 430nm。反应式如下：
（三）Dioxatene 参加的 CL 反应：化学发光剂为 Adamantyl 1,2−二氧杂环丁烷芳基（dioxatene）磷酸盐，反应需有 碱性磷酸酶（AP）参与。反应式如下：
a、[Ru(bpy)3]2+标记的抗体 b、生物素化合的抗体 c、SA 磁性微粒 d、TPA 溶液 e、洗涤液 （1）步骤一 在试管中加试剂 a、b 及待测标本（含抗原），反应式如下（图 3）。反应在液相中进行，37oC 下 5－10 分钟内完 成。
（2）步骤二：在上述反应液中加入试剂 c，反应式如下（图 4）。 反应在接近液相的条件中进行，37OC 下 5－10 分钟内完成。下一个步骤为结合的标记抗体与游离的标记抗体相分 离，此步骤及以下的电化学发光反应，在 Elecsys 的流动池中进行。
由于 RIA 有放射性污染等缺点，不少学者进行了新标记物的探索。 1971 年 Engvall 和 Perlman 建立了固相酶免疫测定方法（ELISA），这种非放射标记免疫测定在临床检验，特别是 感染性疾病的诊断中取得了广泛应用。但是，因 ELISA 最后测定的是颜色的光密度，其精密度和敏感性达不到 RIA 水 平。 化学发光免疫测定（CLIA）出现于 20 世纪 90 年代。由于最后测定的是光子的量，不但对检测者无害，其敏感度 和精密度均优于 RIA，而且试剂稳定，并可进行全自动分析，是理想的标记免疫测定方法。1996 年发展的电化学发光 免疫测定（ECLIA）在发光反应中加入了电化学反应，并结合各种免疫测定的先进技术，是目前最先进的化学发光免疫 测定系统。
三、Elecsys 系列全自制造领域内的先锋在临床化学技术、免疫化学技术和自动化诊断系统的创新发
展方面有着 50 年的历史。1998 年罗氏收购了德国宝灵曼公司。这两家在诊断领域内最有经验的公司的融合进一步加强
了罗氏诊断的实力。
1996 年宝灵曼公司在第 16 届世界临床化学大会上推出的 Elecsys2010 系统是世界上第一台应用电化学发光免疫技
术的全自动免疫分析仪，次年宝灵曼又推出应用相同检测原理的 Elecsys1010 系统。罗氏收购宝灵曼之后，罗氏便是目
前全球唯一应用电化学发光免疫检测技术制造仪器的厂商，为顺应当前实验室自动化、一体化的发展趋势，罗氏将在
2001 年在 Elecsys1010/2010 的基础上推出电化学发光免疫模块 E170。
（二）流动池中的电化学发光反应 1、流动池的基本结构 流动池是电化学发光过程中所有电化学发光反应进行的场所（图 5）。反应液由蠕动泵运送入流动池，反应后由流 动池流出。一个激发电极在流动池的下方，两个测定电极安装在激发电极上方的两侧，留出一个清晰的窗口以便使发射 的光子被光电倍增管收集。在流动池下装置可移动的用以吸引磁性微粒的磁铁。
（四）电化学发光反应：电化学发光（electro－chemiluminescence，ECL)是一种在电极表面由电化学引发的特异性
化学发光反应，实际上包括了电化学和化学发光两个过程。化学发光剂三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+(图 1）和电子供体三丙胺 （TPA）在阳电极表面同时各失去一个电子发生氧化反应（图 2）。二价的[Ru(bpy)3]2+被氧化成三价，后者是一种强氧 化剂。TPA 被氧化成阳离子自由基 TPA+*（参见图 2），后者很不稳定，自发地失去一个质子（H+），形成自由基
技术指标：
1、分析项目：同时分析 6 项。
2、处理能力：60 测试/小时
3、样品量：10－50ul
4、试剂量：6.5ml－18ml（含 M、R1、R2）
5、试剂存放能力：6 盒，含条形码识别
6、急诊设定：两个急诊位
7、反应容量：最少 200ul，最多 400ul
o
o
8、反应温度：37 C ± 0.3 C
单个模块每小时可进行 170 个测试。作为模块，它还可以进行组合，同种模块组合使工作量成倍地上升，与其它模块如
生化模块等组合，可扩大检测范围，有助于提高临床检验的自动化，实现一体化，它适用于大工作量的实验室或检测中
心使用 。
（一）Elecsys1010 全自动免疫分析仪 性能特点：
Elecsys1010 是德国宝灵曼公司于 1997 年推出的一台应用电化学发光技术的多批处理的台式全自动免疫分析仪。 该系统为方便的触摸屏操作，使用液体试剂，特别设计的试剂组合（RackPack）包括测试所需要的所有试剂。每一 个 RackPack 及定标液、质控液都有一个含所有测试特异数据的二维条形码（PDF417），另附有亦为二维条形码形式的 定标卡和质控卡。仪器由条形码阅读器（BCR）读入二维条形码中的参考曲线、试剂批号、过期日期等有关信息，减少 了手工输入，极大简化了仪器的操作步骤。 罗氏诊断用特殊的 master 试剂包和世界卫生组织的参考标准制备了 10－12 点的参考曲线。在该曲线基础上，用批 特异性试剂包和 5－6 点 master 定标液制备了批定标曲线。该曲线储存在试剂的二维条形码中。用户使用时只需做两点 定标平移校正批定标曲线即可。 该系统检测所需样本量少，大约 10－50ul。测试敏感度高，测试时间短，9－18 分钟完成一个测试。试剂保存期 长，货架期有 18 个月，开封使用后 2－8 oC 可保存 3 个月。 Elecsys1010 系统提供了自动稀释和自动重测功能，自动稀释可达 1：100，当测试样品的结果超出了用户定义的范 围可自动重测，缩短了报告结果所需的时间。有理想的急诊系统。设置了两个急诊位，可随时编入急诊样本，进行优先 操作而不影响常规样品的测试排序。具有液面感应（LLD）和凝块感应等安全保护功能。
电化学发光免疫测定及其临床应用
罗氏诊断.巴塞尔.瑞士
目录
第一篇 电化学发光免疫测定 一、化学发光反应 （一）氨基苯二酰肼类参加的 CL 反应 （二）口丫啶酯参加的 CL 反应 （三）Dioxatene 参加的 CL 反应 （四）电化学发光反应 二、电化学发光免疫测定 （一）试管内的化学反应 （二）流动池中的电化学发光反应 三、Elecsys 系列全自动电化学发光免疫分析系统 （一）Elecsys1010 全自动免疫分析仪 （二）Elecsys2010 全自动免疫分析仪 （三）E170 免疫分析模块
Elecsys 全自动分析仪分成两个部分：在试管内化学反应部分和在流动池内的 ECL 反应部分。 （一）试管内的化学反应 1、试剂的组成 在 Elecsys 试剂的制备中，包括电化学发光剂的标记和抗原或抗体的固相化，应用了多种先进技术，简述如下： （1）电化学发光剂的标记 [Ru(bpy)3]2+需经化学修饰形成活化的衍生物后才能与抗体或抗原形成结合物。有多种活性基团可与[Ru(bpy)3]2+ 分子中的砒啶基反应。在 Elecsys 试剂中采用的是 N 羟基琥珀酰胺酯（NHS）（图 1）。该衍生物具有水溶性，可与抗 体、蛋白质抗原、半抗原、激素、核酸等各种分子结合形成稳定的标记物。而且[Ru(bpy)3]2＋NHS 分子量很小，与免疫 球蛋白结合的分子比超过 20 仍不会影响抗体的可溶性和免疫活性。 （2）固相载体 Elecsys 中采用的固相载体是带有磁性的直径约 2.8µm 的聚苯乙烯微粒。其特点是表面积极大，吸附效率高；在液 体中形成均匀的悬液，参与反应时类似液相，反应速度快。由于带有磁性，在游离标记物与结合标记物分离时，只需用 磁铁吸引，方便迅速。 （3）链霉亲和素与生物素系统的应用 链霉亲和素（streptoavidin，SA）和生物素（biotin，B）是具有很强的非共价相互作用的一对化合物。一分子 SA 可与 4 分子 B 相结合。在 Elecsys 的试剂中，SA 通过特殊的蛋白结合物均匀牢固地包被在磁性微粒上，形成通用的能 与 B 结合的固相载体。另一试剂为与经活化的 B 衍生物化合的抗原或抗体。两种试剂混合时，B 化合的抗原或抗体即 结合在磁性微粒上。 2、在试管中的反应 反应分两个步骤。以双抗体夹心法测抗原为例，试剂含以下组分：
一、化学发光反应 在常温下，一些特定的化学反应产生的能量使其产物或反应中间态分子激发、形成电子激发态分子；当其衰退至基 态时，所释放出的化学能量以可见光的形式发射，这种现象称为化学发光（chemiluminescence，CL）。能产生 CL 反应 的物质称为化学发光剂或化学发光底物。CL 反应绝大多数属于氧化反应。因为该反应能提供足够的能量使其产物分子 或反应中间态分子上升至电子激发态。目前应用在免疫测定中的重要 CL 反应有以下几类。 （一）氨基苯二酰肼类参加的 CL 反应 这类反应需有催化剂（如过氧化物酶，POD）的参与。主要是鲁米诺（luminol）及异鲁米诺衍生物。发射光的波 长为 375－550nm，以 425nm 波长为主。鲁米诺的分子结构及 CL 反应式如下：
2、电化学发光反应的步骤 （1）将试管内两步反应结束的反应液输入流动池，由于磁铁吸引，磁性微粒被吸着在电极上，其余反应物流出流 动池，完成游离的和结合的标记抗体的分离。 （2）将 TPA 溶液送入流动池,将残余的游离标记抗体排出流动池,在流动池中充满 TPA 溶液。 （3）撤下磁铁，电极上通电，三联吡啶钌与 TPA 发生电化学发光反应，发出的光被光电倍增管收集，测定光强 度。 （4）通过换算得出待测标本中的抗原浓度。 （5）在流动池中送入清洗液，将反应物彻底冲洗，即可测定下一个标本。
第三篇 检测项目 一、甲状腺功能 二、激素 三、肿瘤标志 四、心肌标志 五、骨标志 六、 感 染 性 疾 病 七、贫血 八、糖尿病 九、 过 敏 反 应 十、 药 物
第一篇 电化学发光免疫测定 1959 年 Berson 和 Yalow 建立了放射免疫分析方法（RIA），大大提高了免疫测定的敏感度。这种标记免疫测定开拓 了医学检验的新领域，应用于激素、蛋白质、感染性疾病的抗原和抗体以及药物等的微量测定。
TPA*，这是一种非常强的还原剂。这两个高反应基团在电极表面迅速反应，三价的[Ru(bpy)3]3+被还原形成激发态的二 价[Ru(bpy)3]2+*，能量来源于[Ru(bpy)3]3+和 TPA*之间存在的高电化学电位差。TPA*自身被氧化成二丙胺和丙醛。接着 激发态的 [Ru(bpy)3]2+*衰减成基态的[Ru(bpy)3]2+，同时发射一个波长 620nm 的光子。这一过程在电极表面周而复始地 进行，产生许多光子，使光信号得以增强。
图 1 三联吡啶钌 NHS
-H+
TPA+*
TPA*
TPA
＋
-e
Ru2＋* Ru3+
光子 Ru2＋
-e
＋
图 2 在电极表面的 ECL 反应
Ru2＋: Ru3＋: Ru2＋*:
[ Ru(bpy)3] 2+ [Ru(bpy)3]3+ [Ru(bpy)3]2+*
基态 氧化态 激发态
二、电化学发光免疫测定
以三联吡啶钌作为标记物，标记抗原或抗体，通过免疫反应及 ECL 反应，即可进行电化学发光免疫测定 （ECLIA）。在实际应用中则尚有特定的仪器和试剂。瑞士罗氏公司（ROCHE）的 Elecsys ECLIA 系统，综合了各种先 进技术，具有独特的优越性，已在医学检验中取得广泛应用。
这三台检测系统均应用了电化学发光免
疫测定、链酶亲和素和生物素间接包被和嵌合性抗体等先进技术，其测试的灵敏度和特异性相同，有完善的使用说明，
试剂通用，操作也有相同之处，仪器设计上有一些差异，主要不同在于工作量不同。Elecsys1010 每小时可进行 60 个测
试，适用于中、小工作量的实验室使用，Elecsys2010 每小时可进行 85 个测试，适用于中等工作量的实验室使用，E170
9、反应时间：9 或 18 分钟
10、样品杯：样品可使用 2 毫升（标准）日立杯、微量日立杯及塑料试管。
11、孵育杯：分析孵育杯可加载 128 支
（二）口丫啶酯参加的 CL 反应：这类化学发光剂不需要催化剂的参与，在过氧化氢的稀碱溶液中即能发光。发射光 的波长为 430nm。反应式如下：
（三）Dioxatene 参加的 CL 反应：化学发光剂为 Adamantyl 1,2−二氧杂环丁烷芳基（dioxatene）磷酸盐，反应需有 碱性磷酸酶（AP）参与。反应式如下：
a、[Ru(bpy)3]2+标记的抗体 b、生物素化合的抗体 c、SA 磁性微粒 d、TPA 溶液 e、洗涤液 （1）步骤一 在试管中加试剂 a、b 及待测标本（含抗原），反应式如下（图 3）。反应在液相中进行，37oC 下 5－10 分钟内完 成。
（2）步骤二：在上述反应液中加入试剂 c，反应式如下（图 4）。 反应在接近液相的条件中进行，37OC 下 5－10 分钟内完成。下一个步骤为结合的标记抗体与游离的标记抗体相分 离，此步骤及以下的电化学发光反应，在 Elecsys 的流动池中进行。
由于 RIA 有放射性污染等缺点，不少学者进行了新标记物的探索。 1971 年 Engvall 和 Perlman 建立了固相酶免疫测定方法（ELISA），这种非放射标记免疫测定在临床检验，特别是 感染性疾病的诊断中取得了广泛应用。但是，因 ELISA 最后测定的是颜色的光密度，其精密度和敏感性达不到 RIA 水 平。 化学发光免疫测定（CLIA）出现于 20 世纪 90 年代。由于最后测定的是光子的量，不但对检测者无害，其敏感度 和精密度均优于 RIA，而且试剂稳定，并可进行全自动分析，是理想的标记免疫测定方法。1996 年发展的电化学发光 免疫测定（ECLIA）在发光反应中加入了电化学反应，并结合各种免疫测定的先进技术，是目前最先进的化学发光免疫 测定系统。
三、Elecsys 系列全自制造领域内的先锋在临床化学技术、免疫化学技术和自动化诊断系统的创新发
展方面有着 50 年的历史。1998 年罗氏收购了德国宝灵曼公司。这两家在诊断领域内最有经验的公司的融合进一步加强
了罗氏诊断的实力。
1996 年宝灵曼公司在第 16 届世界临床化学大会上推出的 Elecsys2010 系统是世界上第一台应用电化学发光免疫技
术的全自动免疫分析仪，次年宝灵曼又推出应用相同检测原理的 Elecsys1010 系统。罗氏收购宝灵曼之后，罗氏便是目
前全球唯一应用电化学发光免疫检测技术制造仪器的厂商，为顺应当前实验室自动化、一体化的发展趋势，罗氏将在
2001 年在 Elecsys1010/2010 的基础上推出电化学发光免疫模块 E170。
（二）流动池中的电化学发光反应 1、流动池的基本结构 流动池是电化学发光过程中所有电化学发光反应进行的场所（图 5）。反应液由蠕动泵运送入流动池，反应后由流 动池流出。一个激发电极在流动池的下方，两个测定电极安装在激发电极上方的两侧，留出一个清晰的窗口以便使发射 的光子被光电倍增管收集。在流动池下装置可移动的用以吸引磁性微粒的磁铁。
（四）电化学发光反应：电化学发光（electro－chemiluminescence，ECL)是一种在电极表面由电化学引发的特异性
化学发光反应，实际上包括了电化学和化学发光两个过程。化学发光剂三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+(图 1）和电子供体三丙胺 （TPA）在阳电极表面同时各失去一个电子发生氧化反应（图 2）。二价的[Ru(bpy)3]2+被氧化成三价，后者是一种强氧 化剂。TPA 被氧化成阳离子自由基 TPA+*（参见图 2），后者很不稳定，自发地失去一个质子（H+），形成自由基
技术指标：
1、分析项目：同时分析 6 项。
2、处理能力：60 测试/小时
3、样品量：10－50ul
4、试剂量：6.5ml－18ml（含 M、R1、R2）
5、试剂存放能力：6 盒，含条形码识别
6、急诊设定：两个急诊位
7、反应容量：最少 200ul，最多 400ul
o
o
8、反应温度：37 C ± 0.3 C
单个模块每小时可进行 170 个测试。作为模块，它还可以进行组合，同种模块组合使工作量成倍地上升，与其它模块如
生化模块等组合，可扩大检测范围，有助于提高临床检验的自动化，实现一体化，它适用于大工作量的实验室或检测中
心使用 。
（一）Elecsys1010 全自动免疫分析仪 性能特点：
Elecsys1010 是德国宝灵曼公司于 1997 年推出的一台应用电化学发光技术的多批处理的台式全自动免疫分析仪。 该系统为方便的触摸屏操作，使用液体试剂，特别设计的试剂组合（RackPack）包括测试所需要的所有试剂。每一 个 RackPack 及定标液、质控液都有一个含所有测试特异数据的二维条形码（PDF417），另附有亦为二维条形码形式的 定标卡和质控卡。仪器由条形码阅读器（BCR）读入二维条形码中的参考曲线、试剂批号、过期日期等有关信息，减少 了手工输入，极大简化了仪器的操作步骤。 罗氏诊断用特殊的 master 试剂包和世界卫生组织的参考标准制备了 10－12 点的参考曲线。在该曲线基础上，用批 特异性试剂包和 5－6 点 master 定标液制备了批定标曲线。该曲线储存在试剂的二维条形码中。用户使用时只需做两点 定标平移校正批定标曲线即可。 该系统检测所需样本量少，大约 10－50ul。测试敏感度高，测试时间短，9－18 分钟完成一个测试。试剂保存期 长，货架期有 18 个月，开封使用后 2－8 oC 可保存 3 个月。 Elecsys1010 系统提供了自动稀释和自动重测功能，自动稀释可达 1：100，当测试样品的结果超出了用户定义的范 围可自动重测，缩短了报告结果所需的时间。有理想的急诊系统。设置了两个急诊位，可随时编入急诊样本，进行优先 操作而不影响常规样品的测试排序。具有液面感应（LLD）和凝块感应等安全保护功能。
电化学发光免疫测定及其临床应用
罗氏诊断.巴塞尔.瑞士
目录
第一篇 电化学发光免疫测定 一、化学发光反应 （一）氨基苯二酰肼类参加的 CL 反应 （二）口丫啶酯参加的 CL 反应 （三）Dioxatene 参加的 CL 反应 （四）电化学发光反应 二、电化学发光免疫测定 （一）试管内的化学反应 （二）流动池中的电化学发光反应 三、Elecsys 系列全自动电化学发光免疫分析系统 （一）Elecsys1010 全自动免疫分析仪 （二）Elecsys2010 全自动免疫分析仪 （三）E170 免疫分析模块
Elecsys 全自动分析仪分成两个部分：在试管内化学反应部分和在流动池内的 ECL 反应部分。 （一）试管内的化学反应 1、试剂的组成 在 Elecsys 试剂的制备中，包括电化学发光剂的标记和抗原或抗体的固相化，应用了多种先进技术，简述如下： （1）电化学发光剂的标记 [Ru(bpy)3]2+需经化学修饰形成活化的衍生物后才能与抗体或抗原形成结合物。有多种活性基团可与[Ru(bpy)3]2+ 分子中的砒啶基反应。在 Elecsys 试剂中采用的是 N 羟基琥珀酰胺酯（NHS）（图 1）。该衍生物具有水溶性，可与抗 体、蛋白质抗原、半抗原、激素、核酸等各种分子结合形成稳定的标记物。而且[Ru(bpy)3]2＋NHS 分子量很小，与免疫 球蛋白结合的分子比超过 20 仍不会影响抗体的可溶性和免疫活性。 （2）固相载体 Elecsys 中采用的固相载体是带有磁性的直径约 2.8µm 的聚苯乙烯微粒。其特点是表面积极大，吸附效率高；在液 体中形成均匀的悬液，参与反应时类似液相，反应速度快。由于带有磁性，在游离标记物与结合标记物分离时，只需用 磁铁吸引，方便迅速。 （3）链霉亲和素与生物素系统的应用 链霉亲和素（streptoavidin，SA）和生物素（biotin，B）是具有很强的非共价相互作用的一对化合物。一分子 SA 可与 4 分子 B 相结合。在 Elecsys 的试剂中，SA 通过特殊的蛋白结合物均匀牢固地包被在磁性微粒上，形成通用的能 与 B 结合的固相载体。另一试剂为与经活化的 B 衍生物化合的抗原或抗体。两种试剂混合时，B 化合的抗原或抗体即 结合在磁性微粒上。 2、在试管中的反应 反应分两个步骤。以双抗体夹心法测抗原为例，试剂含以下组分：
一、化学发光反应 在常温下，一些特定的化学反应产生的能量使其产物或反应中间态分子激发、形成电子激发态分子；当其衰退至基 态时，所释放出的化学能量以可见光的形式发射，这种现象称为化学发光（chemiluminescence，CL）。能产生 CL 反应 的物质称为化学发光剂或化学发光底物。CL 反应绝大多数属于氧化反应。因为该反应能提供足够的能量使其产物分子 或反应中间态分子上升至电子激发态。目前应用在免疫测定中的重要 CL 反应有以下几类。 （一）氨基苯二酰肼类参加的 CL 反应 这类反应需有催化剂（如过氧化物酶，POD）的参与。主要是鲁米诺（luminol）及异鲁米诺衍生物。发射光的波 长为 375－550nm，以 425nm 波长为主。鲁米诺的分子结构及 CL 反应式如下：
2、电化学发光反应的步骤 （1）将试管内两步反应结束的反应液输入流动池，由于磁铁吸引，磁性微粒被吸着在电极上，其余反应物流出流 动池，完成游离的和结合的标记抗体的分离。 （2）将 TPA 溶液送入流动池,将残余的游离标记抗体排出流动池,在流动池中充满 TPA 溶液。 （3）撤下磁铁，电极上通电，三联吡啶钌与 TPA 发生电化学发光反应，发出的光被光电倍增管收集，测定光强 度。 （4）通过换算得出待测标本中的抗原浓度。 （5）在流动池中送入清洗液，将反应物彻底冲洗，即可测定下一个标本。