UPLC快速测定清开灵注射液中栀子苷的含量

UPLC快速测定清开灵注射液中栀子苷的含量
汤丹;周小琴;李锦坤;梁洁雯
【摘要】Objective:To establish a rapid method for simultaneous determination of geniposide and crocin-1 in Gardeniae
Fructus.Methods:Waters ACQUITY UPLC ? BEH Shield RP18
(2.1mm×100mm, 1.7μm) was used with the acetonitrile water (10:90) solution as the mobile phase.Detection wavelength was 238
nm.Results:The calibration curves of geniposide was in good linearity among the ranges of 6.112～152.80μg/mL.For the precision test, stability test, repeatability test, the RSD was less than 3％.The average recoveries were100.29％, and all the RSD were less than 2％.Conclusion:The developed method is simple, rapid, accurate and can be used for the detection of Geniposide in Qingkailing injection.%目的:建立UPLC快速测定清开灵注射液中栀子苷含量的方法.方法:采用Waters ACQUITY UPLC ? BEH Shield RP18色谱柱(2.1mm×100mm, 1.7μm) ,乙腈-水 (10:90) 溶液为流动相, 检测波长238nm.结果:栀子苷在6.112～152.80μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系 (r=0.9999) ,仪器精密度、稳定性、重复性试验中RSD均小于3％,平均加样回收率为100.29％,RSD均小于2％.结论:该方法简便、快速、准确、重复性好,可为高效检测清开灵注射液中栀子苷含量提供依据.
【期刊名称】《北方药学》
【年(卷),期】2019(016)002
【总页数】2页(P1-2)
【关键词】清开灵注射液;栀子苷;UPLC;快速分析
【作者】汤丹;周小琴;李锦坤;梁洁雯
【作者单位】广东药科大学中药学院,广州 510006;广州白云山明兴制药有限公司,广州 510250;广州白云山明兴制药有限公司,广州 510250;广州白云山明兴制药有限公司,广州 510250
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
清开灵注射液由胆酸、猪去氧胆酸、水牛角（粉）、黄芩苷、珍珠母、栀子、板蓝根、金银花组成[1]，中国药典一部采用高效液相色谱法（HPLC）测定栀子苷等指标成分的含量，生产企业产品批次较多，为节省企业检验时间，本文以栀子苷为例探索超高效液相色谱法（UPLC）测定指标成分含量，为制定高效可行的内控标准提供依据。

1 仪器与试药
1.1 仪器：Waters Acquity UPLC超高效液相色谱仪（配备在线脱气四元泵，自动进样器，柱温箱，TUV检测器，ELS检测器）；MUS/1006型超声波清洗器（深圳现代超声实业有限公司）；BP211D型十万分之一分析天平（赛多利斯公司）。

1.2 试药：栀子苷（批号:110749-201316）对照品，购于中国食品药品检定研究院；乙腈为色谱纯（德国Merck公司）；水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

清开灵注射液批号分别为170106、170107、170108。

2 方法与结果
2.1 色谱条件：Waters ACQUITY UPLCRBEH Shield RP18色谱柱
（2.1mm×100mm，1.7μm），流动相乙腈-水（10∶90）溶液，检测波长
238nm，流速0.3mL/min；柱温30℃，进样体积1μL。

色谱图见图1。

图1 清开灵注射液超高效液相色谱图谱
2.2 对照品溶液的制备：精密称取栀子苷对照品15.28mg，置于50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。

再精密吸取5mL对照品储备液置于50mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每1mL含30.56μg
栀子苷的对照品溶液。

2.3 供试品的配制：精密量取清开灵注射液5mL，置于50mL容量瓶中，加甲醇
稀释至刻度，摇匀，用0.22μm滤头过滤，取续滤液。

2.4 阴性对照试验溶液的配制：按药品制备工艺自制不含栀子组分的阴性样品，按照“2.3”项下的方法，配制成阴性对照试验溶液。

2.5 线性关系考察：精密吸取“2.2”项下对照品储备液0.2，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，5.0mL，分别置于10mL 量瓶中，加甲醇定容至刻度，依次注入液相色谱仪，测定色谱峰面积，以对照品浓度X（μg/mL）为横坐标，色谱峰面积积分值Y为
纵坐标，进行线性回归，结果栀子苷的回归方程分别为：y=4482.73x+295.84
（r=0.9999）。

结果表明栀子苷在6.112～152.80μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验：取“2.2”项下的对照品溶液，按上述色谱条件连续进样6次，
记录峰面积。

结果栀子苷峰面积RSD（n=6）为0.24%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验：取同一批次的供试品溶液，放置于室温，分别于0，2，4，8，12，24h 进样1μL进行分析，记录峰面积。

结果测定栀子苷的峰面积RSD为
1.9%，表明供试品溶液在24h内稳定。

2.8 重复性试验：精密吸取同一批供试品溶液样品6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，进样1μL，以外标两点法计算栀子苷的含量，结果平均含量为
0.637mg/mL（RSD=1.1%），表明该方法重复性良好。

2.9 回收率试验：精密吸取已知含量的样品（批号为170106）2mL，共6份，分别加入相当于样品中栀子苷含量的对照品储备液适量。

按“2.3”项下的方法制备供试品溶液，进样1μL测定，计算栀子苷的回收率和RSD，结果见表1。

表1 加样回收率结果1.274 1.274 1.274 1.274 1.274 1.274 1.222 1.222 1.222 1.222 1.222 1.222 2.513 2.502 2.487 2.520 2.494 2.481 101.39 100.49 99.26 101.96 99.84 98.77 100.29 1.2
2.10 样品含量测定：取3批清开灵注射液，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，进样测定，结果见表2。

表2 清开灵注射液样品中栀子苷的含量（mg/mL，n=3）?
3 讨论
UPLC是基于小颗粒填料的液相色谱技术，通过减少颗粒粒径达到快速分析目的[2]，在中药组分的分析应用中也日趋广泛[3]，本实验与药典HPLC方法相比，检验时间缩减了一半，对于企业大批量样品的检验来说可大大节约时间，并为其他成分的快速测定方法制定提供依据。

参考文献
【相关文献】
[1]国家药典委员会，中华人民共和国药典2015年版一部[S].北京：中国医药科技出版社，2015：1529.
[2]陈佳，王钢力，姚令文，等.超高效液相色谱（UPLC）在药物分析领域中的应用[J].药物分析杂
志，2008，28（11）：1976-1981.
[3]刘丹，齐双辉，马海英.UPLC在中药组分分析及代谢组学中的应用进展[J].中国药房，2016，27（7）：973-975.。