微生物的实验室培养基础知识点梳理

微生物的实验室培养基础梳理
一、微生物的营养
1．碳源
2．氮源
【注意】
①对许多微生物来说，既可利用无机含氮化合物作为氮源，也可利用有机含氮化合物作为氮源。

②固氮微生物可以利用氮气作为氮源。

③铵盐、硝酸盐等既可作为微生物最常用的氮源，也可作为某些化能自养微生物的能源物质。

④自养微生物与异养微生物类型的划分主要是依靠能否以CO2作为生长的主要或唯一的碳源，而不是由氮源决定。

3．水
水是微生物生命活动必需的一种重要物质。

4．无机盐
无机盐对微生物的生理功能有：构成微生物细胞的组成成分；作为酶的组成成分，也是某些酶的激活剂；调节和维持微生物细胞的渗透压和pH；某些无机盐具有特殊功能，如化能自养细菌的能源物质NH4+等。

5．生长因子
6．其他条件
培养微生物时还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。

二、培养基
1．培养基的概念
人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供适合其生长繁殖的营养基质。

2．配制原则
目的要明确；营养要协调；pH要适宜；要经济节约。

3．培养基的类型
（1）按物理性质分：
（2）按化学性质分：
（3）按功能分：
①全程要求无菌操作，无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染
外，还能有效地避免操作者自身被微生物感染。

②培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。

可以用手触摸盛有培养
基的锥形瓶，当感觉到锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板。

操
作时应使锥形瓶的瓶口通过火焰，以防止瓶口的微生物污染培养基。

③平板冷凝后皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，若将平板倒
置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。

④在倒平板的过程中，不能将培养基溅到皿盖与皿底之间的部位，因为空气中的微生
物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。

三、无菌技术
1．无菌技术的主要内容
①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒；
②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌
③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；
④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。

2．实验室常用的消毒方法
煮沸消毒；化学药物消毒；紫外线消毒。

3．实验室常用的灭菌方法
①灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精
灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或
瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰燃烧来灭菌；
②干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金
属用具等，可以采用这种方法灭菌；
③高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的
灭菌效果，一般在压力为100 kPa，温度为121 ℃的条件下，维持15～30 min。

四、微生物实验室培养的实验操作
1．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
其基本过程为计算、称量、溶化、灭菌、倒平板五个步骤。

2．纯化大肠杆菌
（1）原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个单个菌落就是一个纯化的细菌菌落。

（2）微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培
养。

在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养
后可形成单个菌落。