益气养阴活血方对2型糖尿病肾病大鼠肾功能的影响
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浙 江 中医 杂 志 ２０１８年 ４月 第 ５３卷 第 ４期
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益气养 阴活血方对 ２型糖尿病 肾病大 鼠肾功能 的影响
顾 超 王 磊 杜 月 光 柴可 夫 浙 江 中 医药大学 浙 江 杭 州 ３１００５３
摘 要 目的 ：观 察 益 气养 阴活血 方 对糖 尿 病 肾病 大 鼠 肾功 能 的保 护作 用 。方 法 ：用 Ｚｕｃｋｅｒ糖 尿 病 肥胖 （ｚｕｃｋｅｒ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｆａｔｔｙ，ＺＤＦ）大鼠制备糖尿 病 肾病 大鼠模型 ，ｚＬ大鼠作 为正常对 照组。模 型大鼠随机 分为模 型组 、中西 医结合 治疗早期干预 组（简称早期 干预组 ）、益 气养 阴活血方 治疗组 （简称 中药组 ）、西药 治疗组 （简称 西药组 ）以及 中西 医结合 治疗组 （简称 中西 医组 ）；早期干预 组早 于其他 各组 ３周 予以长效胰 岛素及 中药结合 干预 ，中药组 予 以中药干预 ，西药组予 以长效胰 岛素 干预 ，中西医组 予 以长效胰 岛素及 中 药结合 干预 ，早期 干预组给 药 １１周 ，其余各 治疗组给 药８周 。麻 醉 ，进行腹 主动脉取血 ，颈椎脱 臼处死后 摘 取 大 鼠肾脏 组 织并腹主 动脉取血检 测相 关指标 。结果 ：药物干预 ８周后 ，应用益 气养 阴活血 方进行 治疗的 中西 医组和早期 干预 组 ，其血脂水 平、肾功能和 肾脏组 织纤维化程度 指标 ，均优 于其他 治疗组 以及 对照组。 结论 ：益 气养 阴活血方 可通过 调节控制糖尿 病 肾病 大鼠糖 脂代谢及 肾脏 纤维化 ，从 而改善 自发 性 ２型糖尿 病 肾病大鼠 肾功能 ，延缓糖 尿病 肾病 的进程 。 关键词 糖 尿病 肾病 益 气养 阴活血方 肾功 能 大鼠
浙 江 中 医杂 志 ２０１８年 ４月 第 ５３卷 第 ４期
Байду номын сангаас
合 氯醛 ３．５ｍｇ／ｋｇ腹 腔注射麻 醉 ，麻 醉后腹 主动脉 取血 ， 差 异无统计学 意义 （Ｐ＞０．０５）。治疗处 理后 ，模 型组 与对
颈椎 脱 臼处死 大鼠。
照组 比较 ，ｕＰ水平 显著 上升 （Ｐ＜Ｏ．０５）；与模 型组 比较 ，
木 基金 项 目：浙江 省 自然科 学基金 项 目从 细胞 能量调 节 器 ＡＭＰＫ探讨 益 气养 阴活血 法调控 代谢记 忆 防治糖 尿病 肾病 的 作 用机 制 ，编 号 ：ＬＹ１６Ｈ２７０００８
＃ 通 讯 作 者 ：柴 可 夫 ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｋｆ６６６＠１６３．ｃｏｍ
的为模 型成 功 。称重 ，按 随机数字表 分为 ：模 型组 、中西 医结合治疗早期 干预组 （简称早期干预组 ）、益气养 阴活 血方治疗组 （简称 中药组 ）、西药治疗组 （简称 西药组 ）以 及 中西 医结合 治疗组 （简称 中西 医组 ）。８只 ｚＬ大 鼠为正 常对照组 。以上各组 大鼠均分笼饲养 ，自由饮水及进食 。 实验期间除正常对 照组 大 鼠以普通饲料喂养 ，其余各组 均以高糖高脂饲料 喂养 ，实验期间大 鼠饲养环境为温度 ２２±１℃、湿度 ５９％一６１％，１２ｈ交替 照明 ，大 鼠 自由饮水 ， 摄食 。分组后 ，各组大 鼠进行相 对应 干预治疗 ：正常对照 组 不加 以任何 处理 因素 ；糖尿病模 型组 每 日灌 ２ｍｌ生理 盐水 ；中药组予 以益气养 阴活血方 灌 胃给药 ，按体 表面 积换算 ，以等效 剂量计算大 鼠用 药量 ，每 天灌 胃 １次 ；西 药组 予 以长效胰 岛素 （鱼 精蛋 白锌 胰 岛素 ）每 日皮 下注 射 ，１５Ｕ／ｋｇ，使 空腹血糖接近正 常 （６—８ｍｍｏｌ／Ｌ）；中西 医 组 在益 气养 阴 活血方 灌 胃给 药 同时 ，予 以长效 胰 岛素 （鱼精蛋 白锌胰 岛素）每 日皮下注射 。早期 干预组处理 同 中西 医组 ，时 间早 于其他各 组 ３周 进行 。实验期 间 每周 测量每组实验 大 鼠血 糖并予 以记录 ；用代谢笼 每周 收集 各组大 鼠尿液进行 ２４ｈ尿蛋 白定量检测并 记录 。实 验大 鼠从糖 尿病 肾病 的发生到实 验结束 ，经 历 了早 、中 、晚 ３ 期的过程 。 １．３ 标 本收 集与 处理 ：整个 实验共 连续 进行 １１周 ，其 中早期 干预组为 干预 １ｌ周 ，其余各组 干预 ８周 。处死前 ２４ｈ用 大 鼠代谢 笼收集 ２４ｈ尿标 本 ，禁食 ８ｈ后 用 １０％水
本 实验 拟通 过 观察益 气 养 阴活血 方对 自发 性 ２型 糖尿病 肾病 （ｄｉａｂｅｔｉｃ ｋｉｄｎｅｙ ｄｉｓｅａｓｅ，ＤＫＤ）大 鼠空腹 血 糖 （ＦＢＧ）、血 肌 酐 （Ｓｃｒ）、血 尿 素 氮 （ＢＵＮ）、总 胆 固醇 （ＣＨＯＬ）、高密度脂蛋 白胆 固醇（ＨＤＬ—Ｃ）、低密度脂 蛋 白胆 固醇 （ＬＤＬ—Ｃ）、甘油三 酯 （ＴＧ）、２４ｈ尿 蛋 白定 量 （ｕＰ）以及 ＴＮＦ—Ｑ（肿瘤坏 死因子一Ｑ）、ＴＧＦ－ １（转化生 长因子一Ｂ １）指标变化 的影响 ，并运用动 物实验的方法对其疗效 进 行验证 。 １ 材料与方法 １．１ 药物 ：益气养 阴活血方主要组成 药物为生黄芪 、灵 芝 、女贞子 、葛根 、丹参 、制 大黄 ６味 中药 ，由浙江 中医药 大学滨 江 中医 门诊部 提供 。 １．２ 动物模 型 的建立及分 组 ：健康雄 性 Ｚｕｃｋｅｒ糖尿病 肥 胖 （ｚｕｃｋｅｒ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｆａｔｔｙ，ＺＤＦ）大 鼠 ４０只 ，体 重 ２５０±ｌＯｇ，健康 雄 性 ｚＬ大 鼠 ８只 ，体 重 １８０±ｌＯｇ，均购 自北 京维通 利华 生物公 司 ，实验动 物生产 许可号 ：ＳＣＸＫ （京）２００２—０００３，由浙江 中医药大 学动物 实验 中心 饲养 及管 理 。将 ４０只 ＺＤＦ大 鼠适应 性 喂养 １周 后 ，改用 高脂 高糖 饲料 喂养 ３周 。尾静 脉取 血 ，血糖 高于 １６．７ｍｍｏｌ／Ｌ
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益气养 阴活血方对 ２型糖尿病 肾病大 鼠肾功能 的影响
顾 超 王 磊 杜 月 光 柴可 夫 浙 江 中 医药大学 浙 江 杭 州 ３１００５３
摘 要 目的 ：观 察 益 气养 阴活血 方 对糖 尿 病 肾病 大 鼠 肾功 能 的保 护作 用 。方 法 ：用 Ｚｕｃｋｅｒ糖 尿 病 肥胖 （ｚｕｃｋｅｒ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｆａｔｔｙ，ＺＤＦ）大鼠制备糖尿 病 肾病 大鼠模型 ，ｚＬ大鼠作 为正常对 照组。模 型大鼠随机 分为模 型组 、中西 医结合 治疗早期干预 组（简称早期 干预组 ）、益 气养 阴活血方 治疗组 （简称 中药组 ）、西药 治疗组 （简称 西药组 ）以及 中西 医结合 治疗组 （简称 中西 医组 ）；早期干预 组早 于其他 各组 ３周 予以长效胰 岛素及 中药结合 干预 ，中药组 予 以中药干预 ，西药组予 以长效胰 岛素 干预 ，中西医组 予 以长效胰 岛素及 中 药结合 干预 ，早期 干预组给 药 １１周 ，其余各 治疗组给 药８周 。麻 醉 ，进行腹 主动脉取血 ，颈椎脱 臼处死后 摘 取 大 鼠肾脏 组 织并腹主 动脉取血检 测相 关指标 。结果 ：药物干预 ８周后 ，应用益 气养 阴活血 方进行 治疗的 中西 医组和早期 干预 组 ，其血脂水 平、肾功能和 肾脏组 织纤维化程度 指标 ，均优 于其他 治疗组 以及 对照组。 结论 ：益 气养 阴活血方 可通过 调节控制糖尿 病 肾病 大鼠糖 脂代谢及 肾脏 纤维化 ，从 而改善 自发 性 ２型糖尿 病 肾病大鼠 肾功能 ，延缓糖 尿病 肾病 的进程 。 关键词 糖 尿病 肾病 益 气养 阴活血方 肾功 能 大鼠
浙 江 中 医杂 志 ２０１８年 ４月 第 ５３卷 第 ４期
Байду номын сангаас
合 氯醛 ３．５ｍｇ／ｋｇ腹 腔注射麻 醉 ，麻 醉后腹 主动脉 取血 ， 差 异无统计学 意义 （Ｐ＞０．０５）。治疗处 理后 ，模 型组 与对
颈椎 脱 臼处死 大鼠。
照组 比较 ，ｕＰ水平 显著 上升 （Ｐ＜Ｏ．０５）；与模 型组 比较 ，
木 基金 项 目：浙江 省 自然科 学基金 项 目从 细胞 能量调 节 器 ＡＭＰＫ探讨 益 气养 阴活血 法调控 代谢记 忆 防治糖 尿病 肾病 的 作 用机 制 ，编 号 ：ＬＹ１６Ｈ２７０００８
＃ 通 讯 作 者 ：柴 可 夫 ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｋｆ６６６＠１６３．ｃｏｍ
的为模 型成 功 。称重 ，按 随机数字表 分为 ：模 型组 、中西 医结合治疗早期 干预组 （简称早期干预组 ）、益气养 阴活 血方治疗组 （简称 中药组 ）、西药治疗组 （简称 西药组 ）以 及 中西 医结合 治疗组 （简称 中西 医组 ）。８只 ｚＬ大 鼠为正 常对照组 。以上各组 大鼠均分笼饲养 ，自由饮水及进食 。 实验期间除正常对 照组 大 鼠以普通饲料喂养 ，其余各组 均以高糖高脂饲料 喂养 ，实验期间大 鼠饲养环境为温度 ２２±１℃、湿度 ５９％一６１％，１２ｈ交替 照明 ，大 鼠 自由饮水 ， 摄食 。分组后 ，各组大 鼠进行相 对应 干预治疗 ：正常对照 组 不加 以任何 处理 因素 ；糖尿病模 型组 每 日灌 ２ｍｌ生理 盐水 ；中药组予 以益气养 阴活血方 灌 胃给药 ，按体 表面 积换算 ，以等效 剂量计算大 鼠用 药量 ，每 天灌 胃 １次 ；西 药组 予 以长效胰 岛素 （鱼 精蛋 白锌 胰 岛素 ）每 日皮 下注 射 ，１５Ｕ／ｋｇ，使 空腹血糖接近正 常 （６—８ｍｍｏｌ／Ｌ）；中西 医 组 在益 气养 阴 活血方 灌 胃给 药 同时 ，予 以长效 胰 岛素 （鱼精蛋 白锌胰 岛素）每 日皮下注射 。早期 干预组处理 同 中西 医组 ，时 间早 于其他各 组 ３周 进行 。实验期 间 每周 测量每组实验 大 鼠血 糖并予 以记录 ；用代谢笼 每周 收集 各组大 鼠尿液进行 ２４ｈ尿蛋 白定量检测并 记录 。实 验大 鼠从糖 尿病 肾病 的发生到实 验结束 ，经 历 了早 、中 、晚 ３ 期的过程 。 １．３ 标 本收 集与 处理 ：整个 实验共 连续 进行 １１周 ，其 中早期 干预组为 干预 １ｌ周 ，其余各组 干预 ８周 。处死前 ２４ｈ用 大 鼠代谢 笼收集 ２４ｈ尿标 本 ，禁食 ８ｈ后 用 １０％水
本 实验 拟通 过 观察益 气 养 阴活血 方对 自发 性 ２型 糖尿病 肾病 （ｄｉａｂｅｔｉｃ ｋｉｄｎｅｙ ｄｉｓｅａｓｅ，ＤＫＤ）大 鼠空腹 血 糖 （ＦＢＧ）、血 肌 酐 （Ｓｃｒ）、血 尿 素 氮 （ＢＵＮ）、总 胆 固醇 （ＣＨＯＬ）、高密度脂蛋 白胆 固醇（ＨＤＬ—Ｃ）、低密度脂 蛋 白胆 固醇 （ＬＤＬ—Ｃ）、甘油三 酯 （ＴＧ）、２４ｈ尿 蛋 白定 量 （ｕＰ）以及 ＴＮＦ—Ｑ（肿瘤坏 死因子一Ｑ）、ＴＧＦ－ １（转化生 长因子一Ｂ １）指标变化 的影响 ，并运用动 物实验的方法对其疗效 进 行验证 。 １ 材料与方法 １．１ 药物 ：益气养 阴活血方主要组成 药物为生黄芪 、灵 芝 、女贞子 、葛根 、丹参 、制 大黄 ６味 中药 ，由浙江 中医药 大学滨 江 中医 门诊部 提供 。 １．２ 动物模 型 的建立及分 组 ：健康雄 性 Ｚｕｃｋｅｒ糖尿病 肥 胖 （ｚｕｃｋｅｒ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｆａｔｔｙ，ＺＤＦ）大 鼠 ４０只 ，体 重 ２５０±ｌＯｇ，健康 雄 性 ｚＬ大 鼠 ８只 ，体 重 １８０±ｌＯｇ，均购 自北 京维通 利华 生物公 司 ，实验动 物生产 许可号 ：ＳＣＸＫ （京）２００２—０００３，由浙江 中医药大 学动物 实验 中心 饲养 及管 理 。将 ４０只 ＺＤＦ大 鼠适应 性 喂养 １周 后 ，改用 高脂 高糖 饲料 喂养 ３周 。尾静 脉取 血 ，血糖 高于 １６．７ｍｍｏｌ／Ｌ