外周血淋巴细胞染色体标本制备的质量控制

表 1 水样中 Cd2+ 的测定结果 ( n = 7)
水样
平均测定值 ( g/m l)
R SD 加标量 测定值 回收率 ( % ) ( g /m l) ( g /m l) ( % )
井水 中游河水 污水水样
0 029 1 060
2 09 1 27
0 050 0 050 1 000
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
0 053 0 076 2 010
细胞遗传学指标 外周血淋巴细胞染色体 畸变和微核 分析, 是放射工作人员健康 监护 和评价 慢性 小剂量 受照 人员远 期医 学效应的重要观察指 标 [ 1, 2], 是最直接 反映辐射损伤的检查项 目之一 [ 3~ 5] 。细胞遗传 学工 作的特 点是, 研究 对象 为活 的细 胞, 手工操作 多、环节 多、时间 较长, 易 受各 种因 素的 影响 而导致结果 的 偏离 [ 6] 。提 高 染色 体畸 变 检出 率和 阅 片效 率, 及时准确反映辐射损 伤情 况, 需要 优 良的 染色 体片, 这 就要 求我们必须做好染 色体 标本 制备的 质量 控制工 作。根据 本实 验室细胞遗传学工 作的 经验, 简 要介 绍适合 于职 业健康 检查
品中生物可利用镉 [ J] . 光谱实验室, 2007, 24 ( 4) : 751 753. [ 4] R oa G, R am irez S ilva M T, R om ero R om o M A, et a.l D eterm ina
tion of lead and cadm ium us ing a polycyclodextrin m od ified carbon paste electrode w ith anod ic stripp ing voltamm etry [ J] . A nal B ioan al Chem, 2003, 377 ( 4) : 763 769. [ 5 ] 谢华林, 李爱阳. 电感耦合等离子体质谱测定陶瓷器皿中微晶溶 出铅镉的研究 [ J] . 中国陶瓷工业, 2004, 11 ( 4) : 36. [ 6] 滕文锋, 彭茵, 杨 波. 巯基棉 富集分 离 火 焰原子 吸收光 谱法测 定食盐中痕量镉 [ J] . 光谱实验室, 2004, ( 3 ): 402 404. [ 7 ] W alter N L S, Jorge L O C, R ennan G O A, et a.l A n onl ine p re concent rat ion system for determ ination of cadm ium in d rink ing w ater u sing FAA S [ J] . Journal ofH azardous M aterials, 2006, 137 ( 3 ): 1357 1361. [ 8] 杨慧仙, 李 贵荣, 何爱桃, 等. Cd2+ I- CV 三元 缔合物 共振瑞 利散 射 法 测 定 镉 [ J ] . 中 国 卫 生 检 验 杂 志, 2007, 17 ( 8 ): 1366 1367.
106 0 96 0 95 0
注: 排污口靠近河流中游 表 2 两种方法测定污水水样中 Cd2+ 的比较
样品
本法测定值 ( n = 7 ) 原子吸收法测定值 相对标准偏差
( g /m l)
( g /m l)
(% )
污水水样 1
0 85
污水水样 2
1 06
污水水样 3
1 27
0 88 1 11 1 32
对实验室严格 的质 量控 制, 是保证 职业 健康 检查质 量的 关键, 同时也是认证 一个 机构 水平的 关键 [7] 。染 色体标 本片 制备操作过程质量控 制, 只是 室内 质量 控 制的 一部 分, 室内 质控还包括人员、实验室 前的 质量 控制 、标本 接种 前的 质量 控制、培养基 的质量 控制、染 色液 及染色 方法 质量 控制、常
0 5) ! 。 ( 3) 秋水仙素处 理时间过 长, 分裂细 胞多, 染色 体短小; 反之, 则 少而 细长, 都 不宜 观察形 态及 计数。 故秋 水仙素的浓度及时间 要准确控制。 ( 4) 低渗使红细胞膜 破裂, 淋巴细胞膨 胀。低渗 过度, 淋 巴细 胞也会 破裂; 低 渗不 足则
中期核型胞 浆厚、染 色体 分散不 开。低渗 液的 量、处理 时间
1 89 1 56 1 25
4 结论 本研究用消化 的方 法除 掉污水 样中 的有机 物, 通过 控制
巯基棉 柱 吸 附 与 吸 脱 的 pH 值, 排 除 镉 污 染 水 样 中 Pb2+ 、 H g2+ 等离子的干扰, 同时可 富集水 样中 的镉。该 方法检 测镉 简便快速、灵 敏度高、 显色快、生 成的 有色 配合物 稳定 时间 长, 用于环境镉水样 分析 与原子 吸收 分光光 度法 的测定 结果 基本一致。
外周血淋巴细胞染色体标本制备的质量控制
Quality contro l on chrom osom al specim en p reparation of per ipheral lym phocytes
王喜爱, 韩林, 王平, 吕玉民
W ANG X i a ,i HAN L in, WANG P ing, LV Y u m in (河南省职业病防治研究所, 河南 郑州 450052)
摘要: 为提高染色体 畸变 的检 出 率和 阅片 效率, 应 严格 按照操作规程进行实 验操 作, 搞好 质 量控 制, 以确 保染 色体 标本片的制备质量。
关键词: 外周血淋巴细胞 ; 染色体 ; 质量控 制 中图分类号: R 446 11 文献标识码: B 文章编号: 1002- 221X ( 2009) 03- 0228- 02
中期细胞分 裂相 多, 每个 核型染 色体 分散 均匀, 长 短适 中, 染色清晰。通过实验前、实验 中和畸变分 析的质量 控制, 提高了外周血淋巴细 胞染色体畸变的检出率及阅片效率。
染色体标本制备 操作过程中 应注意: ( 1) 接种血 液量要 适当。血液 量 太少, 中期 细胞 分 裂相 少 或 无; 血 液量 太 多, 染色体核型分散不好 或无。 ( 2) 培养温度 应严格 控制在 ( 37
染色体标本片制备操作过程质量控制只是室内质量控制的一部分室内质控还包括人员实验室前的质量控制标本接种前的质量控制培养基的质量控制染色液及染色方法质量控制常用仪器的质量控制发报告前的质量控制即从人员到设备试剂操作过程各个环节都要有质量保证的工作内容
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中国工业医学杂志 2009 年 6月第 22卷第 3 期 Ch inese J Ind M ed Jun e 2009, V o.l 22 N o. 3
1 2 2 2 培养 接 种后 将培 养瓶 放于 ( 37 0 5) ! 恒 温培
中国工业医学杂志 2009年 6月第 22 卷第 3期 C hinese J Ind M ed June 2009, V o.l 22 N o. 3
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养箱内, 切勿 放 在加 热板 上 或紧 贴加 热 板。培 养 24~ 28 h, 加入终浓度为 0 05 g /m l的秋水仙素, 摇匀后继续 培养至 48 ~ 52 h。秋水仙素的 浓度 及时 间要 准确 控制, 以确 保中 期染 色体相的长 度适 中, 否则 秋水仙 素浓 度大、作 用时 间长, 染 色体短, 而 浓 度小、 作用 时间 短, 分裂 相 少且 染 色体 细 长, 均不能得到便于分析 的中期相。 1 2 2 3 收 获 ( 1) 收 集 细 胞: 去 上 清 液, 加 低 渗 液 ( 0 075 m o l/L KC l) 8 m ,l 用滴管轻打混匀, 将培养 物全部转 入洁净离心管 中。离心 管上编 号同 培养 瓶。 ( 2) 低 渗处 理: 将装有培养 物 的 离 心管 置 37 ! 恒 温 水浴 箱 中 低 渗 30 m in。 ( 3) 预固定: 低 渗 后 加 入 0 5 m l固 定 液 ( 甲 醇 #冰 乙 酸 = 3#1), 轻轻混匀 后, 1 200 r /m in离心 8 m in。固定 液应在 使用 前临时配制。 ( 4 ) 一 次固定: 弃 上清液, 加入 8 m l固定 液, 轻轻混匀, 室温下固定 20 m in。 1 200 r/m in离心 8 m in, 弃上 清液。 ( 5) 二次固定: 同一次固定。 ( 6) 制细胞 悬液: 离心 弃上清液 后, 离 心管 底 部若 为一 薄 层细 胞, 加 4 滴固 定 液; 若为一厚层细胞, 加 6~ 8滴固定液, 用滴管轻轻混匀。 1 2 2 4 滴片 吸取细胞悬 液以一 定高度 ( 10 ~ 20 cm ) 滴 在一张经酸浸泡过洁 净的、 37 ! 预 温的湿 载玻片 上, 轻轻吹 散, 气干。及时正确编号 (或作其它标记 ) 。 1 2 2 5 染色 1#10 G iem sa染色 8~ 10 m in, 细小流水洗去 多余染液, 气干。 1 2 3 染色体畸变分析中的质量控制 1 2 3 1 畸变分析方法 在 低倍光学 镜下 ( 100 ∃ ) 寻找适 宜分析的中期分裂相 , 然后在油镜 下 ( 1 000 ∃ ) 分析。只分 析记录 ( 46 1) 个着丝粒的 分裂相, 每 例标本 至少分 析 100 个中期分裂相。
参考文献: [ 1 ] 吴双桃. 镉污染土壤治理的研究进展 [ J]. 广东 化工, 2005, 4:
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1 2 3 2 计数标 准 记录 观察 到 的非 稳定 性畸 变, 如 无着 丝粒断片 ( ace)、环状 染色体 ( r) 、双着丝粒 体 ( dic) 和微 小体 ( m in) , 以及较明显的稳定性畸变, 如易位 ( t) 和倒位 ( inv ); 对伴随 r和 d ic产生 的 ace, 仅 作为 r或 dic伴 随断片 计数为一个 畸变。观察 到的 畸变 由 2人 复验确 认。观察 结果 以染色体畸变细胞率 (% ) 和染色体畸变率 (% ) 表示。 2 结果与分析
收稿日期: 2008- 10- 15; 修回日期: 2009- 02- 05 作者简介: 王喜爱 ( 1963 ) , 女, 主治 医师, 主 要从事 健康监 护工作。
中染色体标本制备操 作过程的质量控制体会, 供参考。 1 材料与方法 1 1 材料
外周全血。 1 2 方法 1 2 1 实验前质量控制 对受到意外照射者或怀疑受意外照 射者, 应尽早 抽血培 养。自制 的培 养液或 购买 的培 养液, 首 次使用前都必须做 预试 验, 与已 经过 实验验 证的 培养液 作对 比, 确定能使用。所用仪器性能正常, 所用试剂 能正常使用。 1 2 2 实验中质量控制 1 2 2 1 接种 抽 静脉 血接 种于 含混 合培 养液 ( 每瓶 培养 液 内 含 RPM I1640, 新 生 小 牛 血 清, 庆 大 霉 素、 肝 素 钠、 PHA、谷氨酰胺适 量, 5% N aHCO3 溶液 调 pH 值 为 7 2 ~ 7 4) 的培养瓶内, 注意无菌操 作, 摇匀, 浓度适 当。培养液 的量、 接种血液量、低渗液用 量要 相互 匹配。 正常 情况 下, 5 m l培 养液接种 20~ 25滴外周全血。如 已知是受到 大剂量照 射的事 故病人要多接种 4~ 6瓶。瓶上写清楚受 检者姓名或 编号及接 种或培养时间。
均与细胞的数量有关 。低 渗处 理浓 度及 时 间要 适当, 且 低渗 后预固定和第一次 固定 混匀 细胞时 要尽 量避免 出现 气泡, 否 则会引起淋巴细胞膜破裂, 人为造 成完整核 型中染色体 丢失。 ( 5) 离心速度过高或 时间过长 , 细胞团 块不易 打散或造 成细 胞破碎; 反之, 好的中 期细胞易丢 失。 ( 6) 固 定液应 在使用 前临时配制。 ( 7) 载 玻片一定 要洁净, 否则 影响中期 核型染 色体的分散和阅 片。 ( 8) 制片 过程中, 如 发现低 渗不够、细 胞膜没有破裂、染色体聚 集一 团伸 展不 开 或胞 浆过 厚, 可增 加固定次数或在 第三次进 行过夜固定。 ( 9) 在严格按 照操作 规程 (作业指导书 ) 进 行实验 操作的 情况下, 夏 天制作 染色 体标本片时容易出现 质量 不良, 可 能与 夏 季温 度高、湿 度大 而影响固定效果有 关。出 现此问 题时 可通过 控制 实验室 温湿 条件 (如使用空调和除湿器 ) 和增加固定次数解决。 3 讨论