PCR法鉴定RorcγtGFP突变小鼠子代基因型

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Objective Methods Results Conclusion To investigate the feasibility of PCR in the genotype identification of Rorc t mutation mouse offspring.The genome DNA was extracted from the tails of six newborn mice produced by a male Rorc t(-/-)mouse and a female Rorc t(-/+)mouse.Rorc t gene fragments were amplified by PCR and then detected by agarose gel electrophoresis.Three mice had Rorc t(-/-)genotype with 241bp gene fragment,while three mice possessed Rorc t (-/+)genotype with 174bp and 241bp gene fragments.PCR-based method is simple and feasible for the genotype identification of Rorc t mutation mouse offspring.
mouse;orphan receptor;genotype;PCR
???????GFP GFP PCR Rorc t 法鉴定突变小鼠子代?GFP 基因型
陈嵘，阿彩岭，周英，樊翌明祎（广东医学院附属医院皮肤科，广东湛江）
524001ＰＣＲ－ｂａｓｅｄｇｅｎｏｔｙｐｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｆｉｌｉａｌｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｉｎＲｏｒｃｔｍｕｔａｔｉｏｎｍｉｃｅ?ＧＦＰCHEN Rong-yi,E Cai-ling,ZHOU Ying,FAN Yi-ming (Department of Dermatology,Affiliated Hospital of Guangdong Medical College,Zhanjiang 524001,China)
摘　要：关键词：中图分类号：文献标识码：文章编号：目的方法结果结论ＤＯＩ：PCR()Rorc t Rorc t(-/-)Rorc t(-/+)6DNA PCR PCR 3PCR 241bp Rorc t(-/-)3174bp 241bp Rorc t(-/+)PCR Rorc t
R 394.1A 1005-4057(2012)05-0477-06-0603-0310.3969/j.issn.1005-4057.2012.06.003探讨聚合酶链式反应法鉴定突变小鼠子代基因型的可行性。

基因型
雄性与基因型雌性小鼠产生的只新生小鼠，取尾部组织提取，进行扩增及琼脂糖凝胶电泳检测产物，根据产物片段大小鉴定新生小鼠基因型。

只小鼠产物具有片段，为基因型；其余只具有及片段，为基因型。

是检测突变品系小鼠基因型的简便、可靠方
法。

小鼠；核受体；基因突变；聚合酶链式反应
??????GFP GFP 基金项目：收稿日期：修订日期：作者简介：通讯作者：国家自然科学基金面上项目广东医学院博士启动基金；陈嵘－，美国杜兰大学博士后，教授，硕士生导师。

樊翌明，：。

(No.81171512)(No.B2010014)2012-11-122012-12-22(1977)E-mail ymfan1963@ 祎副基因突变动物在科研中的应用日益广泛，但其
子代属于何种基因型，是否符合相关课题研究的要
求是开展科研的关键。

如何采用简便、准确方法来
鉴定基因突变动物子代基因型，以保证科研严谨性
是目前亟待解决的问题。

本文以美国杜兰大学实验
室对突变品系小鼠基因型鉴定方法为例，介绍基因突变动物子代基因型检测方法。

实验动物：小鼠雌雄一对，种属编号，为遗传背景，购自实验室。

雌性基因型为带荧光报告基因的杂合子，雄性基因缺失，敲除基因位点带荧光报告基因。

雌雄交配后于第周产生只黑色新生小鼠，雌雄各半、、号为雌性，、、号为雄性。

待新生小鼠成长后约进行基因型鉴定，以决定该小鼠是否
能运用于后续实验研究。

小鼠提取步骤剪取周龄新生小鼠尾部组织，置离心管，加入、蛋白酶，℃孵育过夜。

次日漩涡混匀后再置℃孵育，加入漩涡混
匀，离心。

吸上清转移到
新管，加入冷无水乙醇μ，混匀后离心。

弃上清，加入体积分数为的乙
醇，混匀后离心。

弃上清，
加入双蒸水，枪头抽吸混匀。

加入酚氯彷用力振荡混匀，离心。

吸上清Rorc t 1.1(B6.129P2(Cg)-007572)C57BL/6Jackson GFP GFP 46(136245)20d (25~30g)1.21.2.1DNA 42mm
1.5mL TNES 300K 15555510min 6mol/L NaCl 9014800r/min 10min 360EP 360L 14800r/
min 10min 70%3608000r/min 3min 200200
14800r/min 15min ?µL µL µL µL µL µL µL GFP 1材料和方法实验动物及材料
实验方法
Rorc tm2Litt Rorc t
Rorc t Rorc t Rorc t ????GFP
ßß
ß
ß
-Crosslaps N-MID (IOF)AS -Crosslaps CTX-AS Arends AS -Crosslaps CTX-N-MID AS -Crosslaps N-MID CTX-AS AS 和是国际骨质疏松症基金会推荐使用的骨转换标志物。

本研究显示，对比健康
同龄人，患者的血清、尿Ⅰ水平升高，推测在疾病骨质疏松和病理骨化并存的机制中，破骨细胞的活性增加可能占主要位置，成骨细胞同时为代偿性增高。

与等研究结果不
同的是，本文患者在病情活动期，血清、尿Ⅰ水平升高，血清水平则明显降低，提示全身或局部的免疫炎性反应促发破骨细胞活性增加的同时抑制了成骨细胞的活性，骨钙蛋白活性降低，抑制了骨形成。

患者存在骨代谢异常，检测血清、、尿Ⅰ水平能够动态地反映患者的骨代谢水平，对判断病情活动性及预后均有一定的临床意义，但是病变部位骨质疏松和病理骨化并存的分子机制仍有待于更深入的研究。

[6]参考文献：
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：50%。

该方法操作简便、成本低廉、结果准确，对其它基因突变动物子代基因型鉴定有较高的参考价值。

鸣谢：特别感谢美国杜兰大学医学院结构与细胞生化学系的尤宗兵教授、张秋杨博士后等对本项目实验方法及技术上的指导。

参考文献：
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