Qubit4.0使用及维护SOP

Qubit ? 4.0 荧光计的使用与保护标准操作规程
1.目的
检测核酸建库成效，作为核酸建库的质量控制举措。

2.合用范围
合用于检测核酸和蛋白的含量。

3.职能
用于建库及 DNB 制备有关的实验员检测核酸或蛋白质。

4.内容
4.1 仪器型号
ThermoFishQubit ? 4.0Fluorometer
4.2 检测原理 :
Qubit ? 4 荧光仪定量检测核酸，其原理是鉴于特定荧光染料与所检测的核酸靶分子联合。

这些荧光染料只有与这些靶分子联合时才会发射荧光信号，即便在浓度很低时。

Qubit ? 4.0荧光定量仪比传统的紫外吸光法更为正确。

紫外吸光法不拥有选择性，丈量260nm全部分子的吸光值，包含DNA 、RNA 、蛋白质、游离核苷酸或剩余的盐离子。

别的，紫外分光光
度计的敏捷度不足，没法达成低浓度DNA 和 RNA 的精准定量。

使用Qubit ? 4 荧光定量仪，将大大提高正确性。

由于 Qubit ? 4 剖析试剂盒里的荧光染料只与样品中的特异分子结合—— DNA 、 RNA 或蛋白，防止不正确丈量带来的重复工作。

4.3 检测操作 :
4.3.1 使用要求：
（1 ）请勿在阳光直射下操作仪器。

（2 ）办理样品时戴无粉手套。

（3 ）仅在室温（ 22-28℃）下使用仪器。

（4 ）在室温下保留全部的试剂盒，仅在Qubit ? 4 荧光计测定荧光时才插入剖析管。

（5 ）在丈量从前请勿用手握住剖析管。

（6 ）丈量前仪器已经用适合的校准品校准过。

（7 ）将样品或标准品与工作液混淆以后，让Qubit ? DNA 和 RNA 剖析管孵育 2min 。

（8 ）将样品或标准品与工作液混淆以后，让Qubit ? 蛋白剖析管孵育15min 。

（9 ）假如要多次读取同一支管，请从仪器中拿出剖析管，让其均衡至室温30s ，再进行下一次读取。

（10 ）不建议多次读取RNA样本。

4.3.2 配置工作液：
（1 ）在主界面上选择试剂计算器计算出配置Qubit ? 工作液所需的染料缓和冲液的量。

（2 ）输入将在 Qubit ? 4 荧光仪上运转的样本数和标准品数目。

可选：假如您想在计算
的总容量中包含一个额外的管，请按下“超额”复选框。

（3 ）按 Enter 计算配置 Qubit ? 工作液所需的 Qubit ? 染料缓和冲液的量。

注意：在此屏幕上能够改正计划检测的管数或超额选择。

（4 ）按 Done 返回主界面运转Qubit ? 检测。

4.3.3 标准品校准：
（1 ）从试剂盒里拿出标准品standard1,2，在主界面选摘要读取新标准的检测种类。

要进入可用于检测的第二页，请将屏幕向右滑动。

要返回第一页，将屏幕向左滑动。

（2 ）选择所需的检测方法
（3 ）点选试验，假如第一次选择会直接提示进行校准，如从行进行过校准，则会提
示使用从前的或新进行校准。

若要将先前的校订应用于样本读数，请按下“运转样本”。

这
里选择进行校准。

（4 ）出现下边界面，将试剂盒顶用于校准的标准品1# 放入样品室，点击
“ Read standard”，大概3秒，读取达成进入到下一步，放入标准品2# ，点击
“ Read standard”（蛋白质校准还需放入标准品3# ）。

（5 ）在读取标准品 2# 后（或读取标准品 3# 后），校准就达成了。

假如校准成功 ,软件显
示读取标准的屏幕 ,显示荧光与浓度图。

（6 ）荧光与浓度图:标准数据点被一条线连结。

（圆圈表示正确的标准）假如校准失败，会显示“校准错误”，需从头进行校准。

（7 ）假如用于 RNA IQ 检测：检测成功，软件将显示准备好样本信息。

假如校准失败 , 会
显示“校准错误”。

（8 ）假如收到“校准错误”信息，需要从头运转校准。

在弹犯错误的屏幕中，按“OK ”。

查察Read 标准屏幕。

假如希望从头运转标准或运转新的标准，按Read 标准，而后重复校准过程。

（9 ）检测 RNA IQ ，能够依据校准错误从头运转特定的校准。

错误信息供给了怎样纠
正校准错误的指导。

4.3.4 样品检测
DNA和RNA为（1 ）将品与反响液混淆（混淆方案详细见试剂盒）孵化一段时间（
2min, 蛋白质需要 15min ）。

（2）在Read standard（用于 Qubit ? 定量剖析）或Ready for samples界面，按Run samples。

（3 ）在样本量屏幕中，选择用于 Qubit ? 定量剖析或 Qubit ? RNA IQ 检测的样本体积和单位。

在方向盘上按+ 或- 按钮选择检测管中样本体积（1-20ul ），从下拉菜单中选择输出样本浓度的单位。

在 RNA IQ 检测中，没有有关的单位，只选样本检测体积。

（4 ）将样品管插入到样品室，关上盖子，而后点击读取管。

定量剖析大概需要 3 秒，质量剖析需要 5 秒。

（5 ）在屏幕上就会显示所检测的浓度。

（6 ）多个样品检测：
a.同样体积和浓度单位：只要改换样本室中样本管，点击读取。

b.不一样体积和浓度单位，改正体积和浓度单位重复上述步骤。

4.3.5 数据读取：
（1 ）假如结果在检测范围内，则显示浓度值。

顶部的数值（大概字）是原始浓度。

底部的数值为稀释后浓度（插入 Qubit ? 4 荧光计的样品管中样品浓度）。

检测浓度存在必定范围，如高出检测范围会显示“高出范围”。

（2 ）能够点击屏幕上左右箭头进入体积和浓度设置界面和荧光与浓度图
a.空心圆表示进行校准的标准品
b.大的灰色圆圈代表最新样品
c.蓝色圆圈代表在检测范围内
d.黄色圆圈代表在拓展范围内
e.红色圆圈代表在仪器检测范围外
单个样本多个样本高出检测高限高出检测低限
（3 ）数据管理
对保留的数据，能够进行以下操作：
a.针对每个样本查察详尽的数据:从浓度检测界面、荧光与浓度图界面、主屏幕点击
“ Data", 出现数据屏幕 ,点击想查察的数据集。

b.重命名数据文件 :如需改正数据显示名称，在详尽数据界面点击数据名，在弹出的界
面输入想要改正的即可。

c.能够保留数据，导出到 USB 储存器或电脑中：将 USB 储存器插入 Qubit ? 4 USB
接口上，假如想导出的是数据集，则勾选该数据集；如需导出的是单个的数据，则点击数据集进入再勾选需要导出的数据；点击导出数据，数据就会以CSV 格式保留到 USB 储存器。

若将数据直接导入到计算机，则使用 USB 电缆将 Qubit ? 仪器连结到计算机，计算机作为外面设施接见 Qubit ? 荧光剂，使用操作系统的一般文件阅读菜单接见保留在
Qubit ? 仪器上的文件，把需要的文件复制到计算机上。

d.删除数据文件：在浓度、图形、RNA IQ 结果或主屏幕上，点击数据。

在导出数据
屏幕上，选中要删除数据左边的选择框。

按下删除出现一个警示窗口，按Delete 可永久删除选中的数据或数据集。

按“撤消”可返回到先前的页面，而不删除任何数据。

4.4 仪器保护
4.4.1 Qubit ? 4 荧光计不需要按期保护，不要进行任何维修或服务免得破坏仪器。

为
解决仪器故障，请联系技术支持。

4.4.2 不要将 Qubit ? 4 荧光计裸露在阳光直射下。

4.4.3 按期冲洗：洁净的 Qubit ? 4 荧光计用湿布擦抹表面。

洁净触摸屏，断开电源线，用沾有 LCD（液晶显示）洁净剂的软布轻轻擦抹来洁净触摸屏。

注：使劲过大会破坏触
摸屏；立刻把屏幕擦干；不要使用研磨性洁净剂或资料防止划伤触摸屏。

4.4.4 消毒仪器：断开荧光计的电源电缆，包含触摸屏，用软布轻蘸70% 乙醇， 70% 异丙醇或 10% 的漂白剂（ 0.6% 次氯酸钠）进行洁净。

注：仪器自带的布不建议与乙醇或异丙醇一同使用；保证洁净液不进入电源按钮、电源进口、
样本槽、或USB 驱动器端口；切勿将任何液体直接倾倒或喷在仪器上，免得仪器通电时触电。