天冬中总皂苷含量测定方法的探讨

试验结果表明, 在 1 h 内同一样品液的测定结 果基本稳定 , RSD 为 1. 72% 。 2. 7 精密度试验 定量吸取同一样品液液 , 共 6 份 , 按 2. 2 项 下方法显色后测定 , 数据见表 3。
表 3 精密度试验
序号 1 2 0. 4 708 3 0. 4599 4 0. 4604 5 0. 4657 6 0. 4710 RSD( % ) 1. 03
Method Research to Assay Total Saponin Content in Cochinchinese Asparagus Root
LI Min , FEI Ze, LI Li - xia , et al College of pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine ( Chengdu, 610075, China) Abstract: Obiective: To study the assay method of total saponin content in Cochinchinese Asparagus Root. Method: Selecting bamboo brier sapogenin as control article, colorating with perchloric acid, determining absorbability in the point of 310nm by adopting spectrophotometric method, then calculating total saponin content in Cochinchinese As paragus Root. Result : The linear relationship is good for bamboo brier sapogenin in scope of 0. 18- 0. 42mg ( r= 0. 9991) with average recovery 98. 8% and RSD 1. 18% . Conclusion: This method is simple, accurate and sensitive with good reproducibility and can be used for quality control and GAP research. Key words: Cochinchinese Asparagus Root; total saponin; bamboo brier sapogenin, spectrophotometric method 天冬为百合科植物天门冬 Asp aragus cochinchinensis ( Lour. ) Merr. 的干燥块根 , 具有养阴润燥、 清肺生津的功效 , 为临床常用中药之一。现代药理 研究发现其具有 抗肿瘤、抑 菌、抗衰 老、镇咳 祛 痰、抗蚊蝇等药理作用。天冬中含有皂苷类、多糖 类和氨基酸类等多种化学成分, 其中皂苷类成分 , 主要包括以菝葜皂苷元、薯蓣皂苷元、雅姆皂苷元 等皂苷元为非糖部分的多种甾体皂苷, 是天冬中主 要有效成分。药理研究也显示天冬中皂苷类成分具 有抑 菌、抗 肿 瘤、提 高 机 体 免 疫 能 力 等 药 理 活 性
11~ 33
定进行了方法学考察, 重点考察了样品的不同制备 方法及不同显色剂对总皂苷含量测定的影响, 尽可 能的排除天冬中大量糖类成分的干扰。首次采用分 光光 度法 , 选 用 菝葜 皂 苷元 ( Sarsasapogenin, C27 H 44O3 ) 为对照品, 通过高氯酸显色, 计算天冬药 材中总皂苷的含量 , 并测定了不同产地天冬及四川 内江天冬 CAP 基地中不同生育期的天冬药材中总 皂苷的含量。该实验为考察天冬的内在质量提供了 一定的依据。 1 仪器与材料 1. 1 仪器 Perkin Elmer 分 光光 度 计 ( Larabola 35 UVNIS spectrometer) ; BP2110 电 子分 析 天平 ( 德国 Sarto rius) ; DSY 一 2 4 孔电热恒温水浴锅 ( 北京爱琦 商贸中 ) 。
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成都中医药大学学报 Journal of Chengdu University of TCM
2004 年 12 月第 27 卷第 4 期 Dec. 2004, Vol. 27, No. 4
中药研究
天冬中总皂苷含量测定方法的探讨
李 敏
1
费
曜
1
李丽霞
1
方道硕
2
( 1. 成都中医药大学药学院 , 四川成都 610075; 2. 成都铁路局中心医院四川成都 610081)
不同产地样品含量测定结果
品种
体皂苷 , 因此上述方法测定范围较狭窄, 可行性不 高。在与天冬的功能主治相吻合的化学成分不明确 的情况下, 笔者选用菝葜皂苷元为对照品 , 通过高 氯酸显色, 来测定计算天冬中总皂苷的含量, 该法 简便、准确、灵敏 , 重现性良好 , 可用于天冬质量 控制及 GAP 研究。 3. 2 样品制备 样品溶液制备时, 笔者根据天冬药材的性质及 所含化学成分 , 参照人参等药材中总皂苷含量测定 方法[ 5~ 7] , 分别从是否脱脂、 水饱和的正丁醇萃取次 数及是否用正丁醇饱和的水洗涤等 3 个方面考察了 样品溶液制备方法对总皂苷含量测定的影响。实验 结果表明: 样品溶液经过氯仿脱脂后 , 除去非皂苷类 的亲脂性杂质, 再用甲醇热提, 然后用水饱和的正丁 醇萃取 4 次, 最后再用正丁醇饱和的水洗涤 1 次 , 制 得的样品溶液澄清, 基本排除了天冬中大量糖类等 杂质的干扰 , 且对皂苷提取完全 ( 萃 取 4 次与萃取 5、 6 次制得的样品所测含量相差极小 ) 。该样品制 备方法简单 , 对实验设备要求不高, 适用于一般实验 室测定大量样品, 尤其适用于天冬药材 GAP 研究中 各项规范化 操作规程 ( SOP) 的 大量因 素的筛 选比 较 , 故确定采用 2. 5 样品制备方法。 3. 3 天冬的加工 天冬药材的传统加工方法是将生品蒸或煮后剥
。因此, 测定天冬中总皂苷含量对评价天冬
药材的质量具有重要意义。 2000 版中国药典 中天 冬项下只有水分和醇溶性浸出物的检查 , 无内在质 量控制指标 。显然 , 现有标准难以客观评价天冬 的内在质量。因此, 笔者对天冬中总皂苷的含量测
基金项目 : 四川省科技厅科研基金资助 作者简介 : 李敏 , 女 , 1963 年 11 月生 ; 副教授 ; 研究方向 : 中药品质和中药材 GAP 研究 。
2. 1 对照晶溶液的制备
对照品质量 ( mg) 图 1 菝葜皂苷元回归曲线
2. 6
稳定性实验 取样品按 2. 2 项下方法显色后, 每隔 10 min
表 2 稳定性试验结果
测定 1 次 , 数据见表 2 。
观察时间( min) 测定值 10 20 30 40 50 60
0. 1243 0. 1240 0. 1238 0. 1235 0. 1209 0. 1197
第 4期
李敏等
天冬中总皂苷含 量测定方法的探讨
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1. 2 材料 天冬样品均由鉴定教研室李敏副教授自行采集 并鉴 定, 见 表 4; 菝 葜 皂 苷 元 对 照 品 ( Sarsasa pogenin ) ( 中国药品生物制品鉴定所 < 定量用 > ) ; 其余所用试剂均为分析纯。 2 方法学考察 精密称取菝葜皂苷元对照品 3 mg, 置于 10 ml 容量瓶中 , 加甲醇溶解并定容即得。 2. 2 显色剂的筛选 因菝葜皂苷元分子中 不具共轭结 构, 不宜 用 UV 检测, 故须采用显色剂显色。本实验对 4 种显 色剂 ( 0. 2 ml 香草醛 - - 冰醋酸和 0. 8 ml 高氯 酸; 8% 香草醛乙醇液和 77% 硫酸; 高氯酸: 94% 硫酸) 进行了比较 , 发现用高氯酸 在 65 水 浴加 热显色 15 min 后 , 取 出, 立即置冰水浴中 15 min 停止反应 , 摇匀, 随行试剂空白 , 在 200~ 600 nm 波长范围内绘制吸收曲线 , 发现对照品溶液与样品 溶液在 308~ 315 nm 间均有最大吸收峰 , 且较为稳 定, 漂移较小, 方法简单 , 故最后确定采用高氯酸 在上述条件下显色。 2. 3 波长的选择 精密吸取菝葜皂苷元对照品溶液与样 品溶液 0. 8ml, 按 2. 2 显色方法显色后 , 在 200~ 600nm 波长范围内绘制吸收曲线, 发现菝葜皂苷元在 308 ~ 31lnm 处; 样 品溶液在 309~ 315nm 处显较强 吸 收, 空白溶液在此范围内仅有微弱吸收 , 经多次扫 描后确定测定波长为 310nm 。 2. 4 标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液 0. 6 ml、0. 8 ml、1. 0 ml、1. 2 ml、 1. 4 ml 于三角瓶中 , 置水浴中挥干 甲醇, 加高氯酸 10 ml, 摇匀后同 2. 2 项下显色方 法显色 , 随行试剂空白, 在 310 nm 处测定吸收值。 以菝葜皂苷元质量 ( mg) 为横坐标 , 吸收值 A 为 纵坐标, 绘制标准曲线, 所得数据见表 1、图 1。
测定值 0. 467 3
试验结果表明 , 方法的精密度较好 , RSD 为 1. 03% 。 2. 8 加样回收率试验 分别精密称取已测知含量的天冬样品 5 份。每 份重 0 5g 。分别各加入一定量菝葜皂苷元对照品, 按 2. 5 项下方法制备样品溶液, 依法测定, 计算 回 收 率。结 果 平 均 回 收 率 为 98 80% , RSD 为 1 18% 。 2. 9 样品的含量测定 精密吸取各样品液 , 按标准曲线制备项下的方 法显色, 测定 , 以菝葜皂苷元 ( C27 H 44 O3 ) 计算各 样品中天冬总皂苷的含量, 含量均以干燥品计。本 实验共测定了 6 个不同产地 ( 生长期均为 2~ 3 年) 和 12 个不同生育期、不同药用部位样品中总皂苷
0. 2945 0. 4123 0. 5169 0. 6072 0. 7247
经计算得回归方程为 ; Y= 1 7588X- 0 0165, r= 0 9991, 菝葜皂苷元在 0 18~ 0 42 mg 范围内具 有良好的线性关系, 因标准曲线为不经过原点, 故 采用外标两点法测定样品。 2. 5 样品溶液制备方法 精密 称取 0 5g 药材 粉末 , 置索 氏提 取器内 ,
48 的含量, 结果见表 4、表 5。
表4
样号 产地
成都中医药大学学报
2004 年第 27 卷
盐酸一对二甲氨基苯甲醛试剂) 为开环类甾体皂苷 的专属性显色剂, 而天冬含皂苷并非全为开环类甾
RSD ( %) 1. 81 2. 75 1. 78 3. 10 1. 19 3. 19 含量 ( n= 3) (% ) 3. 219
摘
要:
目的 研究天冬中总皂苷的含量测定方法。 方法 首次选用菝葜皂310 nm 处测定吸收度 , 计算天冬中总皂苷含量 。结果: 菝葜皂苷元在 0. 18~ 0. 42 mg 范 围内线性关系良好( r= 0. 9991) , 平均回收率为 98 80% , RSD 为 1. 18% 。 结论 本法简便、 准确 、 灵敏, 重现性 良好 , 可用于天冬质量控制及 GAP 研究。 关 键 词 : 天冬 ; 总皂苷; 菝葜皂苷元 ; 分光光度法 中图分类号 : R282 6; R931 5 文献标识码: A 文 章 编 号: 1004 -0668( 2004) 04 - 0046 - 03
表 1 标准曲线测定结果
对照品质量( mg) 吸收值 A 0. 18 0. 24 0. 30 0. 36 0. 42
加 l00ml 氯仿脱脂 2h, 残渣挥去溶剂后, 再加甲醇 100ml 在 80 回流 提取至 无色 , 溶 液回 收甲 醇至 干 , 加蒸馏水 10ml 溶解 , 用水饱和的正丁醇萃取 四次 ( 15 ml、10 ml、10ml、 10ml) , 合并正丁醇部 分 , 用正丁醇饱和的水洗涤 , 减压回收至干, 残渣 用甲醇溶液定容至 50 ml, 制得样品溶液。