王仁杰实验报告(O2-含量测定)

O2-含量测定
学院；资源环境学院 姓名：王仁杰
前言：超氧阴离子自由基，不仅具有毒性，而且可以经过一系列反应生成其它氧离子自由基，
进一步对生物产生损害作用。

在逆境胁迫的研究中，O 2-是一种逆境指标。

因此对超氧离子自由基的研究在生物体内的含量具有重要的意义。

测定原理：NH 2OH + 2O 2- + H + → NO 2- + H 2O 2 +H 2O
NO 2- + 对氨基苯磺酸 → 重氮盐 →α-萘胺 → 红色偶氮化合物 材料与方法：材料：小麦幼苗 方法步骤： 1、提取液制备：
1g 叶片 →冰溶中研磨，50mmol.l -1
PBS ，PH 7.8 定量转换至5ml ，1000rpm 、4℃，离心10min ，取上清液，1500rpm 、4℃，离心20min ，取上清液备用。

2、测定
2.1 制作标准曲线
用分光光度计测定吸光值，制作标准曲线，得出回归方程。

2.2 O 2-含量测定 2.2.1 NO 2-产生
试剂 编号 对照 样品 H 2O （ml ） 2.0 0 提取液（ml ） 0 2.0 PBS （ml ） 1.5 1.5 盐酸羟胺（ml ）
0.5
0.5
2.2.2 NO 2-显色
取对照和样品各2ml ，同标准曲线的操作，然后用A530测定。

实验结果：
试剂 编号
1
2
3
4
5
6
NO 2-(5μg/ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 H 2O
2.0
1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 对氨基苯磺酸(25℃
20min ) 2.0
2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 α-萘胺
2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 每管NO 2-
(μg/ml)
1.0
2.0
4.0
6.0
8.0
1 2 3 4 5 6 7
NO2-浓度0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
吸光度A 0 0.125 0.239 0.508 0739 0.910 0.1.180
得出标准曲线如下图：
测定所得样品的新光度分别为0.236、0.180 0.213，计算平均值为0.210，带入y=1.1805x 得浓度为0.178，考虑到分取倍数经计算的C NO2-最终含量为0.89 g/ml。

那么O2-的含量为1.223µg/ml。

注意事项
1、离心机离心时应该先配平。

2、加试剂的顺序一定不可以错。

3、每次加完一种试剂后都要充分摇匀。