叶酸修饰硬脂酸接枝白芨共聚物的合成及作为抗肿瘤药物载体的研究

管清香 ，纪丹 阳 ，孙 波 ，乔 瑾 ，何 彤 ，张广远 ， 虞振静 ，尹建元 ，杨 薇
（１．吉林大学药学 院 ，长春 １３００２１；２．吉林 大学 第二医院 ，长春 １３００４１）
摘要 制备 了叶酸修饰硬脂酸接枝 白芨 （ＦＡ—ＢＳＰｓ—ＳＡ）的共聚物 ，通过 氢核磁 光谱 （ Ｈ ＮＭＲ）、紫外一可见 分
Ａｖａｎｅｅ４００型核磁共振波谱（ Ｈ ＮＭＲ）仪 ，瑞 士 Ｂｒｏｋｅｒ公 司；ＬＣ一２０ＡＴ型高效液相 色谱仪 ，Ｅｔ本 Ｓｈｉｍａｄｚｕ公 司 ；８３００型傅 里 叶变 换红 外 光谱 （ＦＴＩＲ）仪 ，日本 Ｓｈｉｍａｄｚｕ公 司 ；Ｕｎｉｅ ２８００紫 外 分 光 光度 计 ，美 国优尼 科公 司 ；ＤＮＭ一９６０２型酶标 分 析仪 ，北 京普 朗新技 术有 限公 司 ；ＲＦ．５３０１型 荧光 分 光 光度 计 ，日本 Ｓｈｉｍａｄｚｕ公 司． １．２ 实验 过 程 １．２．１ ＦＡ．ＢＳＰｓ—ＳＡ 制备 反应 过程 见本 文 支持 信 息 Ｓｃｈｅｍｅ Ｓ１．ＢＳＰｓ．ＳＡ参 照文 献 ［１４］方法 合 成 ：分 别 称取 １２７．６ ｍｇ ＳＡ、５３．４ ｍｇ ＤＭＡＰ和 ９６．７ ｍｇ ＥＤＣ于 圆底 烧瓶 中 ，加 入 ３ ｍＬ ＤＭＳＯ超 声 溶解 ，室 温 磁 力搅 拌 １ ｈ，得 活化 反 应液 ．称 取 ４００ ｍｇ ＢＳＰｓ加 ６ ｍＬ ＤＭＳＯ超声 溶解 ，将 ＢＳＰｓ溶液 逐 滴 加入 到 恒 温 ３８℃ 的活化 反应 液 中 ，保持 ３８℃条 件下 反应 ４８ ｈ．反 应 结束 后 ，在搅 拌 下 将 反 应 液加 人 到冰 无 水 乙醇 中（反应 液 与冰 无水 乙醇 的体 积 比为 １：１０），继 续搅 拌 ５ ｒａｉｎ后 ，于 冰箱 中 ４ 静 置 过夜 后 抽 滤 ， 沉 淀物 交 替 以无 水 乙醇 和乙 醚洗 涤 至 洗 涤 液 无 色 透 明 后 ，沉 淀 物 于 ５０℃真 空 干燥 ，得 棕 色 ＢＳＰｓ—ＳＡ 粉 末 ．
杨 薇 ，女 ，博士 ，教授 ，主要从事载体材料 的研究 ．Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｅｉ８８１ｉｎｄａ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｎ
１８１６
高 等 学 校 化 学 学 报
Ｖ０１＿３９
１ 实 验 部 分
１．１ 试 剂 与仪 器 白芨 多糖 （ＢＳＰｓ，纯度 ９８．５％），Ｐｉｏｎｅｅｒ Ｂｉｏｔｅｅｈ有 限公 司 ；硬 脂 酸 （ＳＡ，纯 度 ９９％），国药集 团化
受体介导的靶向传递系统是利用配体与肿瘤细胞中过量表达受体结合 ，从而将药物靶向定 向输送 到 肿瘤 组织 内 ，增加 药 物在肿 瘤 部位 的 蓄积 ，同时减 少 药物 作用 于其 它 组 织 引起 毒 副作 用 ．叶 酸 （ＦＡ） 受体 是 一种糖 蛋 白受 体 ，在生 理 条件 下 ，能通 过 吞 噬作 用将 叶酸 摄 取 到细 胞 中 ’ ．在 生 理条 件 下 ，叶 酸受体在绝大多数正常组织 中几乎不表达 ，但在卵巢癌 、乳腺癌及结肠癌等许多肿瘤 细胞 中过度 表 达 Ｊ．叶酸 同药物 载体 连接 后 ，叶酸受 体对 叶酸 复合物 仍具 有 高度 亲 和 性．因此 ，通 过 与 叶酸 受 体 特 异性结合将药物靶 向传递到肿瘤组织 …．Ｌｊ等 ¨。。制备了接枝叶酸共聚物微球 ，与不含叶酸的微球相 比 ，含 有 叶酸 微球 可 更 有效 地将 药物 运送 到 ＭＣＦ一７细 胞 中 ，更 好 地 达 到抗 肿瘤 作 用 ．ｘｕ等 ¨ 合 成 了 叶酸修饰 的 一环 糊精 载体 ，药 物 被包 载后 可增 加其 在 靶部 位 的富集 ．
收 稿 日期 ：２０１８．Ｏ１—０８．网络 出版 日期 ：２０１８－０７—３０． 基金项 目：国家 自然科学基金（批准号 ：８１４０１５１３）和吉林卫生厅项 目（批准号 ：２０１７Ｊ０５６）资助． 联系人简介 ：尹建元 ，男 ，博士 ，教授 ，主要从事天然药物活性及 载体材料研究 ．Ｅ—ｍａｉｌ：ｙｉｎｊｙ＠ｊｌｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
Ｖｏ１．３９ ２０１８年 ８月
高 等 学 校 化 学 学 报
ＣＨＥＭＩＣＡＬ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＨＩＮＥＳＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＩＥＳ
Ｎｏ．８
１８１５— １８２２
叶 酸 修 饰 硬 脂 酸 接 枝 白芨 共 聚 物 的 合 成 及 作 为 抗 肿 瘤 药 物 载 体 的 研 究
ＳＡ胶束更强．ＦＡ—ＢＳＰｓ—ＳＡ共聚物有望作 为难溶性抗肿瘤药物 的纳米载体材料．
关键 词 叶酸；硬脂酸 ；白芨 ；胶束 ；自组装 ；抗肿瘤药物
中 图分 类 号 ０６３６ 来自文 献 标 志 码 Ａ
肿瘤仍是现今严重威胁人类健康和生命 的疾病之一．应用传统抗肿瘤药物进行治疗时 ，药物靶 向 性差 ，只有 少量 药物 随机 到达 肿瘤 组织 ，增加 给药剂 量 虽一 定程 度 上 可 提高 肿 瘤组 织 中的药 物 浓度 从 而 提高 治疗效 果 ，但 药 物 的毒 副作 用 也会 急剧 增 加 Ｊ．
本课 题组 前 期 已制备 硬脂 酸修 饰 白芨 （ＢＳＰｓ．ＳＡ）共 聚物 ，证 明其 在 水 中具 有 良好 的 自组 装 性 能 ， 且具 有 ｐＨ敏感 释药 性 ¨ ．本文 在 ＢＳＰｓ－ＳＡ共 聚物基 础 上进 一 步 接枝 叶酸 ，制 备 了可更 好 地 靶 向 于 肿瘤 细 胞 的 ＦＡ—ＢＳＰｓ—ＳＡ共 聚物 ，并 对其 结 构 进 行 确证 ．以多 西 他赛 为模 型药 物 ，采 用 乳 化一溶 剂挥 发 法制备载药胶束 ，考 察 了叶酸取代 度对胶 束平 均粒径 和 ｚｅｔａ电位 、载药 量及包 封 率 的影 响 ，并 对 ＦＡ—ＢＳＰｓ—ＳＡ共 聚物及 载药 胶束 的细胞 毒性 进行 评 价 ．
学 试剂 有 限公 司 ；二 甲基 亚砜 （ＤＭＳＯ），国药集 团化 学 试 剂 有 限公 司 ；叶 酸 （ＦＡ，纯 度 ９８％），阿拉 丁 化 学试 剂 有 限公 司 ；１一乙基 －（３一二 甲基 氨基 丙基 ）碳 酰二 亚 胺 盐 酸盐 （ＥＤＣ．ＨＣＩ，纯度 ９９％），Ｅｎｅｒｇｙ化 学 品有 限公 司 ；４一二 甲氨 基 吡 啶 （ＤＭＡＰ，纯 度 ９８．５％），Ｅｎｅｒｇｙ化 学 品有 限公 司 ；多 西他 赛 （ＤＴＸ，纯 度 ９９．６％ ），上海 波 以尔化 工 有 限公 司 ；噻 唑蓝 （ＭＴＩ＇，纯 度 ９８％ ），Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ公 司．
量与包封率均增 加．载药胶束 体外释药具有 ｐＨ依赖 性（ｐＨ＝５．０～７．４）．共 聚物 ＦＡ．ＢＳＰｓ．ＳＡ和 ＢＳＰｓ—ＳＡ浓度
为４０ ｇ／ｍＬ时 ，细胞存 活率均在 ８０％以上．与多西 他赛 溶液相 比，相 同药 物浓 度 的 ＦＡ．ＢＳＰｓ．ＳＡ和 ＢＳＰｓ—ＳＡ
载药胶束抗肿 瘤效 果更佳 ，且载 药 ＦＡ－ＢＳＰｓ－ＳＡ胶束对有 叶酸受体 表达 的肿瘤细胞 的抑制作 用较载 药 ＢＳＰｓ—
光光度法 （ｕＶ）及红外光谱法 （ＩＲ）对其进行结 构表 征．以乳化一溶剂 挥发 法制备 了载 多西他赛 胶束 并对其 进
行表 征 ，并采用噻唑蓝 （ＭＴＩ＂）法 测定 了共聚物及其 载药胶束的细胞毒性 ．结果证实硬脂酸和 叶酸 均已接枝 在
白芨 多糖 上．疏水性药物 多西他赛 可被包嵌于 ＦＡ—ＢＳＰｓ—ＳＡ的胶束 内．叶酸取代度增加 ，胶束粒径减小 ，载药