有机酸检测方法

甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、柠檬酸、苹果酸、琥珀酸、酒石酸、草酸、苯乙酸、阿魏酸
甲酸、乙酸、丙酸、柠檬酸、苹果酸、琥珀酸、酒石酸、草酸、
仪器与设备
waters2695 Alliance SeparationsModule高效液相色谱仪;waters2996 PhatadiodeArray二极管阵列检测器;Heraeus离心机;HORIBApH计。

色谱分析
(1)混标配置。

分别准确称取适量上述10种有机酸并用超纯水溶解或稀释,以孔径0. 45μm 的微孔滤膜过滤,转移至50mL容量瓶中,定容,配制浓度为100mg/L的储备液,保存于4℃冰箱中。

(2)标准曲线绘制。

有机酸标准液的配置:根据紫外吸收灵敏度,将草酸、酒石酸、苹果酸、甲酸、丙二酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、琥珀酸、丙酸按照0. 2∶2. 5∶5∶5∶5∶2. 5∶5∶5∶5∶5的比例配制混标,逐级稀释,配制成A、B、C、D、E五个浓度级别的标准溶液,以绘制标准曲线。

其中A级别标准溶液浓度为0. 2; 2. 5, 5, 5, 5, 2. 5, 5, 5, 5, 5(μg/mL);B、C、D分别为上一个级别浓度的5倍稀释,E级为D级的2倍稀释。

并将这10中有机酸编号为:OA01-OA10。

(3)色谱条件。

反相C18柱CAPCellPAK C18MG 4. 6mm×250mm, 5um, pH范围: 2~10,流动相: 0. 1%H3PO4的去离子水和乙腈(V/V)98∶2;检测器波长: 210nm;流速: 1mL/min;进样量: 20u;l柱温: 35℃;
(4)流动相配置。

取1mLH3PO4用超纯水稀释至1000mL,经孔径为0. 45μm的微孔滤膜过滤,超声脱气后备用。

乙腈(色谱纯)超声脱气备用。

阿魏酸
阿魏酸的测定:称取风干样品1.0000g置50ml量瓶中，加入乙酸乙酯约45ml，超声处理30min 并静置过夜，加乙酸乙酯到刻度，摇匀，过滤，吸取滤液25ml水浴蒸干，残渣加甲酸溶解并移入10ml容量瓶，定容之后用荧光分析仪测定。

实验仪器
KQ-360DE型数控超声波清洗器、玻璃仪器烘干器、TDI5-WS多管架自动离心机、电子天平、RF-540荧光分光光度计。

实验药品
乙醇、乙酸乙酯、1%碳酸氢钠、2%碳酸钠等试剂均为分析纯,水为亚沸高纯去离子水,阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号: 0773-9910)。

激发波长和发射波长的选择
精密称取阿魏酸对照品12. 00 mg,置100 mL容量瓶中,加2%碳酸钠溶解,室温下对不同浓度的阿魏酸对照溶液在200-600 nm波长范围内进行激发波长扫描,阿魏酸的最大激发波长(λex)为343 nm,固定该激发波长,扫描得发射谱图,得到其发射波长(λem)为463 nm,且随着阿魏酸浓度的增加其波长没有偏移,荧光强度随着阿魏酸浓度的增加而增大,因此,选择该最大激发波长和最大发射波长(即λex/λem为343 nm/463 nm)作为后继测定的工作条件。

标准曲线
精密量取适量的阿魏酸对照品溶液,分别稀释成浓度为0. 3、0. 6、1. 2、1. 8、2. 4、3μg/mL标准溶液,选定激发波长和发射波长条件下,测定其荧光强度,以阿魏酸对照品溶液的浓度为横标轴(x),以荧光强度为纵坐标轴(y),得回归方程为y=19.469x +4·805 8,r=0.997,结果表明进样量在0. 3-3μg/mL范围内线性关系良好。

样品测定
精密称取当归药材0. 5 g,置具塞三角瓶中,加1%碳酸氢钠25mL,超声提取30min,离心10min,取上清,加稀盐酸调pH值至2-3,用乙酸乙酯10 mL萃取3次,取上清液合并为30 mL 乙酸乙酯液,再加2%碳酸钠20 mL,萃取3次[4]。

取下层溶液用2%碳酸钠定容至100 mL,微孔滤膜滤过液取1 mL,加2%碳酸钠溶液稀释至10 mL。

即作为供试品溶液
高效液相色谱法测定阿魏酸的含量
潘成学贾欣申小静
郑州大学药学院郑州市450052
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摘要目的建立妇科调经片q-阿魏酸含量测定方法：方法采用HPLC法，使用C。

柱，流动相为甲醇
一0．1％磷酸溶液(30：70)，流速1．0 ml／min，紫外检测波长313 nm。

结果阿魏酸线性范围0．0388—
0．3104 tzg，平均回收率97．16％：结论所建立的方法稳定可靠、灵敏、准确、简便，可用于该制剂的质量控制。

关键词妇科调经片阿魏酸HPLC
中图分类号：11927．2 文献标识码：A 文章编号：1672．3422(2005)18-0023-02
Determination of Content of Ferulic Acid by HPLC
PAN Chengxue，JIA Xin。

SHEN Xiaojing
School of Pharmacy，Zhengz hou Universit)’，Zhengzhou，450052，China ABSTRACT Objective To establish a RP—HPLC method for determinating content of ferulic
acid in Fuketiaojing tablet．Methods The content was determined by HPLC．The analysis was carried
on C 1 8 column，the mobile phase was consisted of methanol一0．1％phosphoric acid(30：70)with
the flow rate at 1．Oml／min and the UV detection wavelength was at 3 1 3 nm．Results The linear re．
gression for Fuketiaojing tablet was over the range of 0．0388～0．3104 Ixg(r=0．9999)．The average
recovery rate of Fuketiaojing tablet was 97．16％(RSD =0．17％．n：5)．Conclusion This method
was sensitive，accurate，reproducible and exclusive．
KEY WoRDS Fuketiaojing tablet：Ferulic acid：HPLC
已有文献’ 采用高效液相色谱法对妇科调经
颗粒中芍药苷的含量测定的报道；对于妇科调经
片，文献一采用HPLC方法对阿魏酸进行了含量测
定，但采用的流动相为甲醇一1％冰醋酸(30：70)。

我们采用高效液相色谱法，对妇科调经片及其中
的药材当归、川I芎中阿魏酸进行含量测定。

1 仪器与试药
1．1 仪器高效液相色谱仪(P200II，大连依利特科学仪器有限公司生产)，UV200 11紫外可见波长检测器，ODS C。

色谱柱，Echrom98色谱工作站。

1．2 试药阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号：773—9202)；妇科调经片(河南仲景保健药业有限公司)；甲醇为色谱纯；水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果
2．1 色谱条件与系统适用性试验ODS C。

色
1 河南省人口和计划生育科学技术研究院郑州市450002谱柱(4．6 mm ×250 mm，5 m)；流动相：甲醇一0．1％磷酸溶液(30：70)；流速1．0 ml／min，柱温40℃，检测波长313 nm；进样量10 l。

理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000。

2．2 线性关系考察精密取阿魏酸对照品，分别制成浓度为3．88 g／ml、7．761xg／ml、15．52txg／ml、23．28 g／ml、31．041xg／ml的样品，进样量101xl，测定阿魏酸峰面积积分值，以峰面积积分值为纵坐标(Y)，阿魏酸的进样量(x)为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程，Y=0．03126255X一0．2889704：(r=0．9999，n =5)，表明阿魏酸在0．0388～0．31041xg之问呈良好的线性关系。

2．3 精密度试验精密吸取同一对照品溶液10 ，重复进样5次，测定其峰面积积分值，结果其色谱峰的相对标准差为0．72％，表明其精密度良好。

2．4 样品含量测定
2．4．1 对照品溶液制备取阿魏酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每12．5oe／ml的溶液，即得。

2．4．2 供试品溶液的制备取装量差异项下本品同批次(040428)10片，除去包衣，研细，
混匀，取约l g，精密称定，分别置5O ml具塞锥形瓶中，精密加甲醇l5 ml，密塞，称定重量，超声处理60 rain，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，续滤液用微孔滤膜滤过，即得。

2．4．3 阳性对照品溶液的制备依据处方中的比例，按供试品溶液的制备方法制备缺当归和川芎的阳性对照溶液。

结果经进样证明阴性无干扰。

2．4．4 样品含量测定分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液各l0 l，进样，由峰面积计算阿魏酸的含量，同法制备并测定l0批中试产品，计算阿魏酸的含量，测定结果见表l。

表1 样品含量测定结果
2．4．5 稳定性试验精密吸取对照品溶液lO l，注入液相色谱仪，按0、2、4、6、8 h各测定1次阿魏酸峰面积，并计算阿魏酸含量，RSD=0．50％。

2．4．6 重现性试验取批号为040428的样品，按供试品溶液制备方法制备5份供试液，测定分别测定阿魏酸含量，其RSD=0．46％。

2．4．7 回收率试验取批号为040428的样品(阿魏酸含量81．841．zg／片)20片，精密称定重量：医药论坛杂志2005年9月第26卷第18期
7．0346g，平均片重0．3517g／片，研细，取0．5g，精密称定，共取5份，分别加入阿魏酸对照品适量，进样量l0 l，测定阿魏酸峰面积，计算阿魏酸含量，计算回收率，测定结果见表2。

表2 回收率测定结果
取样量(g)样品中含量加入量测得值回收率平均回收率RSD(％)
【g ( g ( g) (％) (‘ )
0．498l ll5．9 l20．0 232．34 97 03
0．50Il l16．6 l20．0 233．26 97．22
0．5158 120．0 l20．0 236．80 97．33 97．16 0．17
0．499l 116．1 l20 0 232．44 96 95
0 4974 l l 5 7 l 20 0 2 2 44 97 ，R
3 讨论
因当归、川芎中均含有阿魏酸，为保证制剂质量，我们对药材中当归和川芎中的阿魏酸含量也进行了测定。

根据测定结果，拟定本品当归中阿魏酸含量不少于0．050％，川芎中阿魏酸含量不少于0．020％。