多粘菌素B的体外抑菌试验

多粘菌素B的体外抑菌试验
赵海全1　钟健敏1　冯军1　陆英杰1　孔伟峰2　郭国富3
(11佛山科学技术学院　广东　南海　528231　21广州市花都区畜牧综合服务站　31河南省出入境检验检疫局)
摘　要采用试管二倍稀释法测定了多粘菌素B对大肠杆菌的最低抑菌浓度,结果表明多粘菌素B对试验菌株具有良好的生长抑制效果。

关键词多粘菌素B　革兰氏阴性杆菌　最低抑菌浓度
多粘菌素属多肽类化合物,包括A、B、C、D、E五种,其中
多粘菌素B的硫酸盐为白色或淡黄色粉末,易溶于水。

有资料表明,多粘菌素对革兰氏阴性杆菌有强大的抗菌作用,而且不易产生耐药性。

本实验通过观察该药对兽医临床上常见的几种革兰氏阴性杆菌的生长抑制作用,为临床合理用药提供理论依据。

1　材料与方法
111　试验菌株　大肠杆菌O12株、大肠杆菌O78株、沙门氏菌、葡萄球菌、链球菌,均由本校微生物教研室提供。

112　药物和试剂　多粘菌素B,由本校兽医院提供。

113　最低抑菌浓度(M I C)的测定　参照相关资料,用试管二倍稀释法测定多粘菌素B对试验菌株的M I C值。

11311　标准浓度菌液的制备　各冻干菌种用马丁汤繁殖培养后经麦康凯培养基分离纯化,然后各取2个菌落接种于10ml的MHB中,置37℃恒温震荡培养5h,收获的菌液用灭菌生理盐水校正浓度为015麦氏比浊标准(含菌量约108CF U/ml),再用MHB作1∶10稀释(含菌量约107CF U/ml),稀释后的菌液尽快(15min内)接种。

11312　多粘菌素B原液的配制　用pH610的磷酸盐缓冲液配制1280mg/L的多粘菌素B原液。

11313　M I C的测定步骤　试验分成五组:大肠杆菌O12株、大肠杆菌O
78
株、沙门氏菌、葡萄球菌和链球菌组。

每组设12个药物浓度梯度以及两个对照(肉汤对照和菌液生长对照)。

以大肠杆菌O
12
株为例,方法如下。

1131311　多粘菌素B原液的倍比稀释。

将多粘菌素B原液用MHB作10倍稀释。

取100mm×13mm试管14支。

除第一支试管外,每只试管内加MHB2m l:在第一和第二支试管中加入稀释后的多粘菌素B液2m l,第二管混匀后吸出2m l 加入到第三管中,依次对倍稀释至第12管。

所得溶液的多粘菌素B浓度依次为:128、64、32、16、8、4、2、1、015、0125、01125、0106mg/L。

第13管作为大肠杆菌O12株生长对照,第14管作为肉汤对照。

1131312　在1～13支试管中用微量加样器各加入011m l大
肠杆菌O
12
株标准浓度菌液,最终接种菌量约5×105CF U/m l,加样时注意吸头不要接触管内壁。

各试管震摇均匀后于35℃静置孵育24h。

11314　结果判定　孵育24h后,以没有细菌生长的最低药物浓度为多粘菌素B的最低抑菌浓度(M I C)。

全部试验进行三次重复,结果见表1。

表1　多粘菌素B对5株肠道菌的M I C测定结果
试验菌株菌液浓度(CF U/m l)M I C(mg/L)
大肠杆菌O
12
株5×105015
大肠杆菌O
78
株5×105015
沙门氏菌5×1051
葡萄球菌5×1052
链球菌5×1054
2　结果
由表1可知,多粘菌素B对大肠杆菌O
12
标准株和O
78
标准株的最低抑菌浓度为015mg/L,对沙门氏菌的最低抑菌浓度为1mg/L,对葡萄球菌的最低抑菌浓度为2mg/L,对链球菌的最低抑菌浓度为4mg/L。

3　结论与讨论
多粘菌素B以其良好的抗菌作用在人医临床上有着广泛的应用。

本试验表明,该药在体外对兽医监床上常见的几种革兰氏阴性肠杆菌也有很好的生长抑制作用,尤其对大肠
杆菌O
12
株以及大肠杆菌O
78
株的抑菌作用最强,所以兽医临床上可用该药治疗革兰氏阴性肠杆菌的感染。

但值得注意的是,有关报道认为多粘菌素可损害机体的肾脏和神经系统,故应避免大剂量长期用药,以免影响动物的健康或造成兽药残留,影响食品安全。

参考文献:
1　方炳虎　陈杖榴　魏光伟等1环丙沙星与其它抗菌药对鸡大肠杆菌　金黄色葡萄球菌的联合药敏试验1中国兽医科技11996, 26(11):29～31
2　潘百明1鸡大肠杆菌病发病情况调查及药敏试验1中国兽医科技11997,27(9):30～31
3　Goodnough MC,Johns on EA1Contr ol of Sal m onella enteritidis infec2 ti ons in poultry by poly myxin B and tri m ethp ri m1App l Envir on M icr o2 bi ol11999,57(3):785～8
赵海全(1966—),男,河南人,副教授,硕士,从事动物疾病诊断与防治的研究。

收稿日期:2007-03-05
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贵州畜牧兽医 2007年 第31卷 第3期。