红外分光光度法培训2

常见的外界干扰因素
大气吸收
二氧化碳 水气 2350cm-1，667 cm-1。
3900～3300cm-1，1800～1500cm-1。
溶剂蒸汽。 干涉条纹
规律性的正弦形曲线叠加在光谱图上。
仪器分辨率的不同和不同研磨条件的影响。
IR-21红外光谱仪简易操作流程
启动工作站
以KBr 压片法为例 空白片：将约200mg干燥 KBr粉末压制成片。 样品片：将固体样品和适 当量KBr混合研磨，压制成片。 打开电脑，进入 Windows 界面，开启干涉 仪。启动IR Solution软件， 初始化软件。
积聚过量的二氧化碳和有机溶剂蒸汽。 供电电压和接地电阻应符合仪器说明书要 求。
测量操作注意事项
背景补偿或空白校正
记录供试品光谱时，应先进行空白背景扫
描，扫描供试品后扣除背景吸收，即得供试品
光谱。
测量操作注意事项
采用压片法时，以溴化钾最常用
若供试品为盐酸盐，可比较氯化钾压片和溴化钾 压片法的光谱，若二者没有区别，则使用溴化钾。所 使用的溴化钾或氯化钾在中红区应无明显的干扰吸收； 应预先研细，过200目筛，并在130℃干燥2h后分装并
供试品的测定
制剂鉴别
品种鉴别项下应明确规定制剂的前处理方法,通常 采用溶剂提取法。提取时应选择适宜的溶剂,以尽可能 减少辅料的干扰,避免导致可能的晶型转变。提取的样 品再经适当干燥后依法进行红外光谱鉴别。
测量操作注意事项
环境条件
红外实验室的室温应控制在（15～30℃），
相对湿度应小于65%，适当通风换气，以避免
在干燥器中保存备用，或每次使用之前用红外烤箱再
次干燥30min。
测量操作注意事项
供试品研磨粒度2～5um为宜
供试品过度研磨有时会导致晶格结构的破
坏或晶型的转化。粒度不够细则易引起光散射
能量损失，使整个光谱基线倾斜，甚至严重变 形。该现象在4000～2000cm-1高频端最为明显。 压片法及糊法中最易发生这种现象。
用聚苯乙烯薄膜(厚度约为0.04mm)校正仪器,
在4cm-1的分辨率下绘制其光谱图,用3027cm-1，
2851cm-1，1601cm-1，1028cm-1，907cm-1处的吸收峰
对仪器的波数进行校正。红外光谱仪(傅里叶变换)
在3000cm-1附近的波数误差应不大于±5cm-1，在
1000cm-1 附近的波数误差应不大于±1cm-1。
样品制备 图谱采集
将空白KBr测试片放在样 品架上。按背景按钮开始测定 空白。 空白KBr测试完毕后，将 制备好的样品测试片置于样品 架上，输入样品信息及保存路 径，按样品按钮开始测试样品， 保存图谱。
点击查看→选择所需图谱文件， 点击处理→峰表→调出所需峰面积→ 调整图谱坐标到适当范围→确定→保 存。
供试品的制备方法 膜法
参照上述糊法所述的方法,将能形成薄膜的液体样 品铺展于适宜的盐片中,使形成薄膜后测定。若为高分 子聚合物,可先制成适宜厚度的高分子薄膜,直接置于样
品光路中测定。熔点较低的固体样品可采用熔融成膜的
方法制样。
供试品的制备方法 溶液法
将供试品溶于适宜的溶剂中,制成1% ～ 10%浓度的 溶液,灌入适宜厚度的液体池中测定。常用溶剂有四氯 化碳、三氯甲烷、二硫化碳、己烷、环己烷及二氯乙烷
红外分光光度法培训
2015.08.14
红外分光光度法是在4000～400cm-1波数 范围内测定物质的吸收光谱,用于化合物的鉴 别、检查或含量测定的方法。除部分光学异 构体及长链烷烃同系物外,几乎没有两个化合 物具有相同的红外光谱,据此可以对化合物进
行定性和结构分析;化合物对红外辐射的吸收
程度与其浓度的关系符合朗伯-比尔定律,是
应不低于2cm-1。
聚苯乙烯薄膜标准红外光谱图
供试品的制备方法
在药物分析中,通常测定的都是透射光谱, 通常采用压片法、糊法、膜法、溶液法和气体 吸收法等。
供试品的制备方法 压片法
取供试品约1～1.5mg,置玛瑙研钵中,加入干燥的溴化钾或氯化 钾细粉约200 ～ 300mg (与供试品的比约为200：1)作为分散剂,充 分研磨混匀,置于直径为13mm 的压片模具中,使铺展均匀,抽真空约 2min,加压至(0.8×106)kPa (约8 ～ 10T/cm2),保持压力2min,撤 去压力并放气后取出制成的供试片,目视检测,片子应呈透明状,其 中样品分布应均匀,并无明显的颗粒状样品。亦可采用其他直径的 压模制片,样品与分散剂的用量需相应调整,以制得浓度合适的片子 （制成图谱的最强吸收峰透光率应在10%以下）。
波数的偏差
低于1000cm-1波数的偏差不超过0.5%，
其他波数的偏差不超过±10cm-1。
测量操作注互关联。图谱比较时，应从整体上比
较谱带最大吸收的位置、相对强度和形状与参 考图谱的一致性。
结果判定
红外光谱在药品分析中，主要用于定性鉴别和物相分析。定性鉴别时， 主要着眼于供试品光谱与对照光谱全谱谱形的比较，即首先是谱带的有与无， 然后是各谱带的相强弱。若供试品的光谱图与对照光谱图一致，通常可判定 两化合物为同一物质（只有少数例外，如有些光学异构体或大分子同系物 等）。若两光谱图不同，则可判定两化合物不同。但下此结论时，须考虑供 试品是否存在多晶现象，纯度如何，以及其他外界因素的干扰。采用固体样
红外分光光度法定量分析的依据。
红外吸收光谱法分类
●近红外区 波长0.76～2.5µ m，波数13158～4000cm-1 ●中红外区 波长2.5～25µm，波数4000 ～ 400cm-1 ●远红外区 波长25 ~1000µm，波数400～10cm-1
特征区和指纹区
特征区： 4000~1300cm1 化学键和基团的特征振动频率区，吸收峰较稀疏， 易辨认，每一个吸收峰都和一定的基团相对应，一 般可用于鉴定官能团的存在。 指纹区： 1300~400cm1 吸收峰的特征性强，可用于区别不同化合物结构上 的微小差异。吸收峰强度和位置相似，相互干扰较 大，再加上各种弯曲振动的能级差小，吸收峰密集、 复杂多变、不容易辨认。
两区域法的分区及其作用
区域 吸收峰类型 氢单键的伸缩振动峰 特征区 4000-1300cm-1 各种叁键、双键的伸缩 振动峰 部分氢单键的面内弯曲 振动峰 各种单键的伸缩振动峰 指纹区 1300-400cm-1 吸收峰密集、 ①某些特征峰及 多变且复杂，能 大量相关峰作为 够反映各化合物 确定基团的旁证； 小差异，可与标 ②确定化合物的 准图谱或已知物 谱图进行对比分 细微结构 析 ①确定化合物具 有哪些基团； ②确定化合物的 类别 吸收峰比较稀疏， 作用 特征
图谱处理
测定完成后，关闭IR Solution软件、关闭干涉仪电源 （注:仪器电源不能关闭）。清 洁样品架或ATR窗片，填写使用 记录。
打印报告 关机
选择文件 下的打印预览 →打印。
注：详见《岛津IR Prestige-21红 外光谱仪使用说明书》
供试品的制备方法 糊法
取供试品约5mg,置玛瑙研钵中,粉碎研细后,滴加少 量液状石蜡或其他适宜的糊剂,研成均匀的糊状物,取适 量糊状物夹于两个窗片或空白溴化钾片(每片约150mg)
之间,作为供试片,另以溴化钾约300mg制成空白片作为
补偿。亦可用专用装置夹持糊状物。制备时应注意尽量 使糊状样品在窗片间分布均匀。
等。选用溶液应在被测定区域中透明或仅有中至弱的吸
收,且与样品间的相互作用应尽可能小。
供试品的制备方法说明
除另有规定外,用作鉴别时应按照药典委员会编订的 《药品红外光谱集》第一卷(1995年版)、第二卷(2000年 版)、第三卷(2005年版)和第四卷(2010年版)收载的各光 谱图所规定的制备方法制备。具体操作技术可参见《药品 红外光谱集》的说明。当新卷收载旧卷相同谱号的光谱图
红外光谱仪的校正
分辨率
用聚苯乙烯薄膜校正时,仪器的分辨率要求在
3110～2850cm-1范围内应能清晰地分辨出7个峰,峰
2851cm-1与谷2870cm-1 之间的分辨深度不小于18%透
光率, 峰1583cm-1与谷1589cm-1 之间的分辨深度不小
于12% 透光率。仪器的标称分辨率,除另有规定外,
品制备法，如遇多晶现象造成的实测光谱与标准光谱有差异时，一般可按照
《药品红外光谱集》中所载重结晶处理法或与对照品平行处理后测定。但如 对药用晶型有规定时，则不能自行重结晶。
其它影响常可通过修改制样技术而解决。由于各种型号的仪器性能不同，
试样制备时研磨程度的差异或吸水程度不同等原因，均会影响光谱的形状。 因此，进行光谱比对时，应考虑各种因素可能造成的影响。
时,旧卷图谱作废。用作晶型、异构体限度检查或含量测
定时,试样制备和具体测定方法均按药典各品种项下有关 规定操作。
供试品的测定
原料药鉴别
采用固体制样技术时,最常碰到的问题是多晶现象,固体样品的晶
型不同,其红外光谱往往也会产生差异。当供试品的实测光谱与《药品 红外光谱集》所收载的标准光谱不一致时,在排除各种可能影响光谱的 外在或人为因素后,应按该药品光谱图中备注的方法或各品种项下规定 的方法进行预处理,再绘制光谱,比对。如未规定该品种供药用的晶型 或预处理方法,则可使用对照品,并采用适当的溶剂对供试品与对照品 在相同的条件下同时进行重结晶,然后依法绘制光谱,比对。如已规定 特定的药用晶型,则应采用相应晶型的对照品依法比对。
测量操作注意事项
片厚要求
压片法制成的片厚在0.5mm左右时，常可
在光谱上观察到干涉条纹，对供试品光谱产生
干扰。一般可将片厚调节至0.5mm以下即可减 弱或避免。
测量操作注意事项
红外附件
压片模具及液体吸收池等红外附件，使用
完后应及时擦拭干净，必要时清洗，保存在干
燥器中，以免锈蚀。
测量操作注意事项
容易辨认
多数基团的面外弯曲振 动峰
傅里叶变换红外光谱仪组成 （IR）
光学台 （包括光源、干涉仪、样品室和检测器） 记录装置 数据处理系统
红外光谱仪就是记录以等间隔波数为横坐标、 吸光度或透过度为纵坐标表示的谱图即为红外光 谱图。
傅里叶变换红外光谱仪原理图
红外光谱仪的校正
波数准确度