透明质酸酶抑制实验
八种常见食用菌的抗过敏和抗氧化活性成分研究_刘方方
由此可知，八种食用菌的透明质酸酶抑制率 由高到低的顺序为： 海鲜菇 ＞ 草菇 ＞ 秀珍菇 ＞ 金 针菇 ＞ 鸡腿菇 ＞ 蘑菇 ＞ 平菇 ＞ 杏鲍菇。透明质酸 酶是透明质酸的特异性裂解酶，透明质酸在人体 发育和调控过程中如细胞粘附、创伤愈合、肿瘤发 生和血管形成时起主要的抑制作用，抑制透明质 酸酶的活性可使透明质酸不被分解，从而不能维 持正常的生理功能。研究表明，透明质酸酶是 I 型过敏反应的参与者，其与炎症、过敏具有强相关 性。Kakegawa［11］曾 经 报 道 了 促 肥 大 细 胞 释 放 组 胺的药物能调节透明质酸酶的活性，透明质酸酶 抑制率的测定作为研究抗过敏作用的一个指标已 被广泛地采用。
＞ 蘑菇 ＞ 平菇 ＞ 杏鲍菇。草菇、海鲜菇、秀珍菇有强抗过敏作用。八种食用菌的透明质酸酶抑制率与抗坏血 酸含量( Ｒ2 = 0. 4692) 、总酚含量( Ｒ2 = 0. 8466) 之间呈负相关性。透明质酸酶抑制率与总黄酮含量 ( Ｒ2 = 0. 4180) 、DPPH·清除率( Ｒ2 = 0. 4858) 之间呈正相关性，但相关性较弱。食用菌的抗过敏性与抗氧化性之间
经检 测 八 种 食 用 菌 的 DPPH · 清 除 率 分 别 为： 蘑菇 10. 79% 、海鲜菇 16. 83% 、平菇 16. 65% 、 鸡腿菇 13. 91% 、草菇 22. 96% 、金针菇 16. 28% 、 杏鲍菇 12. 91% 、秀珍菇 23. 67% 。
透明质酸酶抑制实验
Elson-Morgan 改良法
一、实验原理
透明质酸酶是Ⅰ型过敏反应的参与者，透明质酸酶与炎症、过敏有强相关性，研究报道各种肥大细胞释放组胺的药物能调节透明质酸酶活性，一些抗敏药物有强抑制透明质酸酶活性，因此抑制透明质酸酶活性作为研究抗过敏作用的指标。
二、试剂和仪器
1、透明质酸酶：浓度500U/ml，现配现用，不能过夜，用醋酸缓冲液做溶剂；
2、透明质酸钠：0.5mg/ml，一次配制，多次使用，用醋酸缓冲液做溶剂；
3、Buffer：溶液A（0.2 mol/L 醋酸11.55ml冰醋酸溶于1L蒸馏水中）4.8ml
溶液B（0.2 mol/L醋酸钠16.4g无水醋酸钠或27.2g三水合醋酸钠溶于1L蒸馏水中）45.2ml，混合稀释至100ml，配制成PH=5.6的醋酸缓冲液；
4、乙酰丙酮溶液：50ml 1.0mol/L 碳酸钠溶液和3.5ml乙酰丙酮溶液混合均匀（临用现配）
5、P-DAB显色剂：0.8g 对二甲氨基苯甲醛溶于15ml浓盐酸和15ml无水乙醇混合均匀。
6、氯化钙溶液CaCl2：2.5mol/L
7、氢氧化钠溶液NaOH：5 mol/L
样品参考浓度1.2mg/ml
三、试验步骤
四、计算
透明质酸酶抑制率（%）=[(C-D)-(A-B)]/ (C-D) ×100%
试中：A—（透明质酸酶+样品+透明质酸钠）试样溶液的OD值B—（醋酸缓冲液+样品+醋酸缓冲液）试样空白的OD值
C—（透明质酸酶+去离子水+透明质酸钠）对照溶液的OD值
D—（醋酸缓冲液+去离子水+醋酸缓冲液）对照空白的OD值。
透明质酸酶的作用机制
透明质酸酶的作用机制全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：透明质酸酶是一种酶类蛋白质，也被称为玻尿酸酶，其主要功能是降解或分解透明质酸分子。
透明质酸是一种多糖，是一种在人体皮肤组织中具有重要功能的成分。
它存在于胶原蛋白和弹力蛋白中，并与它们一起维持着皮肤的弹性和水分，使皮肤看起来光滑紧致。
透明质酸酶主要作用于皮肤组织中的透明质酸。
透明质酸酶通过水解透明质酸分子，使其分解成较小的片段或单糖单元。
这样，透明质酸酶能够促进透明质酸的新陈代谢和再生，从而增强皮肤组织的弹性和保湿性能。
透明质酸酶通过分解透明质酸，使其能够更容易地被皮肤吸收。
透明质酸是一种高分子聚合物，分子量较大，难以穿透皮肤屏障，因此透明质酸酶在皮肤表面的作用非常重要。
透明质酸酶可以将透明质酸分子分解成较小的片段，这些片段更容易被皮肤吸收，从而提高了透明质酸在皮肤组织中的有效性。
透明质酸酶还具有促进胶原蛋白和弹力蛋白合成的作用。
透明质酸酶通过促进透明质酸的新陈代谢和再生，增强了皮肤组织中透明质酸的含量，从而进一步促进了胶原蛋白和弹力蛋白的合成。
这些蛋白质是皮肤组织中主要的支撑结构，能够增强皮肤的弹性和紧致度，减少皱纹和松弛现象。
透明质酸酶的作用机制还包括抑制黑色素的形成。
透明质酸酶能够调节皮肤中黑色素的合成，减少黑色素在皮肤表面的沉淀，有助于减少皮肤色斑和暗沉现象。
透明质酸酶在皮肤美白和均匀肤色方面具有一定的作用，能够帮助皮肤恢复明亮光泽。
透明质酸酶在皮肤保养和美容方面具有重要作用。
它能够降解透明质酸、促进胶原蛋白和弹力蛋白的合成、调节黑色素的形成，从而改善皮肤的弹性、保湿性能和肤色，使皮肤看起来更加年轻健康。
透明质酸酶可以被广泛应用于护肤品和美容产品中，是一种非常重要的皮肤保养成分。
第二篇示例：透明质酸酶是一种重要的酶类蛋白质，它在机体中发挥着重要的生理作用。
透明质酸是一种多糖，在皮肤组织中占有很大比例，具有保湿和塑性的作用。
透明质酸酶主要起到分解透明质酸的作用，从而保持皮肤组织的弹性和光泽。
色氨酸二钠透明质酸酶抑制实验
色氨酸二钠透明质酸酶抑制实验
色氨酸二钠透明质酸酶抑制实验是一种用来研究某些化合物或物质对色氨酸二钠透明质酸酶活性的影响的实验方法。
色氨酸二钠透明质酸酶，也称为透明质酸酶或玻尿酸酶，是一种能够降解透明质酸分子的酶。
下面是一种可能的色氨酸二钠透明质酸酶抑制实验的步骤：
1. 准备实验所需的试剂和材料，包括色氨酸二钠透明质酸酶、透明质酸底物、待测化合物或物质、缓冲液等。
2. 预先调配适当的缓冲液，以维持实验环境的pH和离子浓度稳定。
3. 准备试验组和对照组。
试验组是加入待测化合物或物质的实验样品，对照组是没有添加待测化合物或物质的实验样品。
4. 在试验组和对照组的试管中，分别加入适量的色氨酸二钠透明质酸酶和透明质酸底物。
5. 将试管放置在恒温器中，并设定适当的温度和时间，以使酶反应发生。
6. 酶反应结束后，停止酶活性的进一步发展。
可以通过加入酸或碱来改变反应环境的pH，或者通过加入特定的抑制剂来停止酶活性。
7. 使用适当的分析方法（例如分光光度法、比色法、荧光法等），测量酶反应产生的产物或底物的浓度。
8. 对试验结果进行统计分析，并比较试验组和对照组之间的差异。
如果待测化合物或物质对色氨酸二钠透明质酸酶产生了抑制作用，那么试验组的酶活性应该较对照组低。
需要注意的是，具体的实验步骤可能因为不同实验目的和研究要求而有所差异。
在进行任何实验之前，确保已经详细阅读相关文献，并遵循实验室的安全操作规程和指南。
透明质酸酶溶液配制
透明质酸酶溶液配制透明质酸酶溶液配制1. 引言透明质酸酶（Hyaluronidase）溶液在医学和生物学领域中扮演着重要的角色。
透明质酸酶是一种酶类物质，可以降解透明质酸分子，从而在细胞外基质中起到调节作用。
透明质酸酶溶液的配制是使用透明质酸酶的前提，正确的配制可以提高实验的可靠性和准确性。
2. 透明质酸酶的应用透明质酸酶作为一种生物活性物质，广泛应用于医学和生物学研究中。
其主要应用包括：组织解剖学研究、细胞培养和细胞分离、肿瘤治疗和药物传递等。
透明质酸酶能够降解细胞外基质中的透明质酸，从而释放出细胞并促进细胞的迁移，这对于研究组织形态学和细胞发育具有重要意义。
3. 透明质酸酶溶液配制的步骤为了得到一种高质量的透明质酸酶溶液，以下是配制的步骤和注意事项：3.1 材料准备- 透明质酸酶粉末- 缓冲盐水溶液（如磷酸盐缓冲液）- 离心管- 烧杯或容量瓶- 洗涤好的镊子或移液器等实验工具3.2 配制过程步骤一：根据透明质酸酶的使用需求，计算所需溶液的浓度和体积。
步骤二：按照浓度和体积计算结果，称取透明质酸酶粉末，并加入适量的缓冲盐水溶液中。
步骤三：用移液器或镊子轻轻搅拌溶液，使透明质酸酶充分溶解。
步骤四：将溶液转移到离心管中，并在低温条件下离心，以去除悬浮的颗粒物。
4. 透明质酸酶溶液的注意事项4.1 温度控制透明质酸酶在配制和使用过程中，需要严格控制温度。
通常，在4摄氏度的低温下进行配制可以减少透明质酸酶的失活，同时也可以抑制细菌和霉菌的生长。
4.2 储存条件透明质酸酶溶液应保存在冷藏或冷冻条件下，以确保其稳定性和活性。
在正常的低温存储下，透明质酸酶可以有效保持其活性长达数月甚至更久。
4.3 溶液的稀释和储存透明质酸酶溶液在使用前可能需要稀释到所需的浓度。
为了确保稀释后的透明质酸酶溶液的质量，建议使用新鲜的缓冲盐水溶液进行稀释，并尽快使用。
5. 个人观点与理解透明质酸酶溶液的配制是准确科学实验的重要一环。
不同相对分子量透明质酸功能及应用的研究
不同相对分子量透明质酸功能及应用的研究黄岳山，潘艺茗，薛静【摘要】透明质酸是一种大分子粘多糖，其牛物活性和使用效果具有Ｍｒ相关性，应根据使用目的的不同，选择合适的分子量。
本文主要综述了，近年来不『川相对分子量透明质酸功能及应用的研究进展。
其中详细介绍ｒ高分子量的ＨＡ具有较好的粘弹性、保湿性、抑制炎性反应、润滑、药物缓释等功能，及在骨关节炎的治疗、术后防粘连、眼科手术黏弹剂和滴眼液等领域的广泛应用。
低分子量ＨＡ（ＬＭＷＨＡ）和ＨＡ寡聚糖（ｏ－ＨＡ）有抗肿瘤、促进伤口愈合、促进ｆＩｌＬ管生成、免疫调节等作用，且通过对ＨＡ的降解町获得ＩＭＷＨＡ和。
一ＨＡ。
【关键词】透明质酸；分子量；功能；应用中图分类号：Ｒ３１８．０８文献标志码：Ａ文章编号：１００５—０８０９（２０１０）０４－００２２—０４ＲｅｓｅａｒｃｈｏｎｔｈｅＦｕｎｃｔｉｏｎａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＨｙａｌｕｒｏｎｉｃＡｃｉｄｗｉｔｈＤｉｆｆｅｒｅｎｔＭｏｌｅｃｕｌａｒＷｅｉｇｈｔｓＨＵＡＮＧＹｕｅ－ｓｈａｎ，ＰＡＮＹｉ－ｍｉｎｇ，ＸＵＥＪｉｎｇ（Ｂ／ｏｌｏＣｃ口ｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＣｏｌｌｅｇｅ，ＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０００６，吼ｉ，叫【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄｉｓａｋｉｎｄｏｆｍａｃｘｏｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｕｅｏｐｏｌｙｓａｅｃｈａｒｉｄｅ。
ｗｈｏｓｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｕｓｅｅｆｆｅｃｔａｓｓ∞ｉａｔｅｗｉｔｈｉｔｓｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔ，ＳＯｗｅｓｈｏｕｌｄａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｕｒｐｏｓｅｓ，ｓｅｌｅｃｔｔｈｅａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔ．Ｔｈｉｓｐａｐｅｒｒｅｖｉｅｗｓｔｈｅｐｒｏｇｒｅｓｓｏｎｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｈｙａｌｕｒｏｎｉｅａｃｉｄｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔｓｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ，ｔｈｅＨＡｗｉｔｈｈｉｉｇｈｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔ（ＨＭＷＨＡ）ｈａｓｂｅｅｎｗｉｄｅｌｙａｐｐｌｉｅｄｉｎｔｈｅｆｉｅｌｄｓｏｆｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ。
透明质酸酶抑制实验
Elson-Morgan 改良法
一、实验原理
透明质酸酶是Ⅰ型过敏反应的参与者，透明质酸酶与炎症、过敏有强相关性，研究报道各种肥大细胞释放组胺的药物能调节透明质酸酶活性，一些抗敏药物有强抑制透明质酸酶活性，因此抑制透明质酸酶活性作为研究抗过敏作用的指标。
二、试剂和仪器
1、透明质酸酶：浓度500U/ml，现配现用，不能过夜，用醋酸缓冲液做溶剂；
2、透明质酸钠：ml，一次配制，多次使用，用醋酸缓冲液做溶剂；
3、Buffer：溶液A（ mol/L 醋酸冰醋酸溶于1L蒸馏水中）
溶液B（ mol/L醋酸钠无水醋酸钠或三水合醋酸钠溶于1L蒸馏水中），混合稀释至100ml，配制成PH=的醋酸缓冲液；
4、乙酰丙酮溶液：50ml L 碳酸钠溶液和乙酰丙酮溶液混合均匀（临用现配）
5、P-DAB显色剂：对二甲氨基苯甲醛溶于15ml浓盐酸和15ml无水乙醇混合均匀。
6、氯化钙溶液CaCl2：L
7、氢氧化钠溶液NaOH：5 mol/L
样品参考浓度ml
三、试验步骤
四、计算
透明质酸酶抑制率（%）=[(C-D)-(A-B)]/ (C-D) ×100%
试中：A—（透明质酸酶+样品+透明质酸钠）试样溶液的OD值
B—（醋酸缓冲液+样品+醋酸缓冲液）试样空白的OD值
C—（透明质酸酶+去离子水+透明质酸钠）对照溶液的OD值
D—（醋酸缓冲液+去离子水+醋酸缓冲液）对照空白的OD值。
透明质酸酶抑制实验
Elson-Morgan 改良法
一、实验原理
透明质酸酶是Ⅰ型过敏反应的参与者，透明质酸酶与炎症、过敏有强相关性，研究报道各种肥大细胞释放组胺的药物能调节透明质酸酶活性，一些抗敏药物有强抑制透明质酸酶活性，因此抑制透明质酸酶活性作为研究抗过敏作用的指标。
二、试剂和仪器
1、透明质酸酶：浓度500U/ml，现配现用，不能过夜，用醋酸缓冲液做溶剂；
2、透明质酸钠：0.5mg/ml，一次配制，多次使用，用醋酸缓冲液做溶剂；
3、Buffer：溶液A（0.2 mol/L 醋酸 11.55ml冰醋酸溶于1L蒸馏水中）4.8ml
溶液B（0.2 mol/L醋酸钠 16.4g无水醋酸钠或27.2g三水合醋酸钠溶于1L蒸馏水中）45.2ml，混合稀释至100ml，配制成PH=5.6的醋酸缓冲液；
4、乙酰丙酮溶液：50ml 1.0mol/L 碳酸钠溶液和3.5ml乙酰丙酮溶液混合均匀（临用现配）
5、P-DAB显色剂：0.8g 对二甲氨基苯甲醛溶于15ml浓盐酸和15ml无水乙醇混合均匀。
6、氯化钙溶液CaCl2：2.5mol/L
7、氢氧化钠溶液NaOH：5 mol/L
样品参考浓度1.2mg/ml
三、试验步骤
四、计算
透明质酸酶抑制率（%）=[(C-D)-(A-B)]/ (C-D) ×100%
试中：A—（透明质酸酶+样品+透明质酸钠）试样溶液的OD值
B—（醋酸缓冲液+样品+醋酸缓冲液）试样空白的OD值
C—（透明质酸酶+去离子水+透明质酸钠）对照溶液的OD值 D—（醋酸缓冲液+去离子水+醋酸缓冲液）对照空白的OD值。
八种常见食用菌的抗过敏和抗氧化活性成分研究
于治 疗疾病 的 观念正 在从药 物治疗 转变 到注重 利 用食 物来保 持健 康 、 预 防疾病 的发 生 。研 究发现 ，
植物 性食物 中除含 人 体需 要 的各种 营养 素 外 ， 还
１ 材料 与 方 法
１ ． １ 实验 原料
蘑菇 、 草菇 、 平菇 、 金针菇 、 杏鲍 菇 、 鸡腿 菇 、 海
一
３２ —
２ ０ １ ３ Ｎｏ ． ３
Ｃｕ ｌ ｉ ｎ ａ ｒ ｙ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｙａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ
Ｖｏ １ ． ３ ０ Ｓ ｕ ｍ Ｎｏ ． １ １ １
长期食 用 的食 品 中， 天 然抗 过 敏 成分 的毒性 远远
家， 过 敏 的多发 ｌ 生和常 见性使 其 成 为影 响人类 健 康 的社会 问 题 。过 敏不 但 影 响人 类 的正 常生 活 ， 而且会 危及 生 命 。因此 ， 过 敏 性 疾病 已经 成 为最 受人们 关注 的 公共 卫 生 问 题之 一 。 目前 ， 针对 食
随着 环 境 污染 的加 剧 和 人 们 生 活 习 惯 的改
医药 名著 均有 记 载 Ｊ 。现代 医学 研究 表 明 ， 食 用
变， 过敏 性疾 病 的发 病率 正逐年增 加 ， 严重影 响到
人 们 的生活 、 工作 和学 习。在美 国 、 日本等发 达 国
菌 具有增 强人 体的免 疫机能 、 抗肿 瘤 、 抗 过敏 等作 用 。但 目前对食 用 菌在抗过 敏成 分方 面的利 用还 不 充分 ， 有关食 用菌 抗过敏 方面 的文献 报道很 少 ， 食 用菌 的开发 利用 还受 到极 大 限制 。鉴于传 统合 成 的抗 过敏 药物存 在 毒 性 和不 安 全 性 ， 而 在人 们
细胞透明质酸酶的作用和生物技术应用
细胞透明质酸酶的作用和生物技术应用细胞透明质酸（hyaluronan，HA）是一种在生物体内广泛存在的多糖分子。
它除了作为一种结构性组分之外，还能够调节细胞的生长、运动和信号转导，而细胞透明质酸酶则是调节这些生物学过程的关键酶类之一。
细胞透明质酸酶（hyaluronidase，HAase）是一种特殊的酶，它能够裂解细胞透明质酸，促进细胞分裂、迁移和侵袭等生物过程。
细胞透明质酸酶被发现存在于许多细胞和组织中，包括白细胞、细胞外基质和一些肿瘤细胞。
它们的表达和活性的异常增加与很多疾病的发生和发展相关，因此细胞透明质酸酶在药物研发和治疗中有着广泛的研究和应用价值。
细胞透明质酸酶的生物学作用主要涉及以下三个方面：1. 细胞移动和迁移细胞透明质酸作为一种胶原基质的主要组分之一，具有很强的黏附性和保水性，能够形成一种网状结构，起到支撑和保护细胞的作用。
但在细胞迁移和侵袭过程中，大量的细胞透明质酸需要被分解。
细胞透明质酸酶就是维持这个过程的关键酶之一，能够降解细胞外基质的细胞透明质酸，为细胞的移动和迁移创造条件。
这种作用不仅对正常生理过程有重要作用，也是肿瘤细胞转移的关键步骤之一。
2. 细胞分裂和增殖细胞透明质酸酶还能够参与细胞的周期调控和增殖。
在细胞周期进入S期时，细胞透明质酸的合成会显著增加，同时细胞透明质酸酶的活性也会持续增强，促进细胞分裂和增殖。
这种调节作用与许多疾病的发生和发展密切相关，因此细胞透明质酸酶在药物研发和治疗中有着广泛的应用潜力。
3. 免疫反应和炎症反应细胞透明质酸酶在免疫反应和炎症反应中也扮演着关键角色。
在感染和炎症反应中，细胞透明质酸的分解产物能够激活一些免疫细胞和炎症细胞，调控免疫反应和炎症反应的发生和发展。
因此，对细胞透明质酸酶的控制和调节也成为药物研发和治疗中的重要方向之一。
细胞透明质酸酶除了在基础研究中的广泛运用外，还被广泛应用于医药学、生物工程和化妆品等领域。
例如，利用细胞透明质酸酶对细胞透明质酸的降解，可以制备出一系列各种分子量和结构的透明质酸，用于在医药、美容和保健领域中制备填充剂、面霜和功效化妆品等产品。
透明质酸酶的研究进展_苏康
1.3 微生物透明质酸酶
透明质酸裂解酶是微生物致病过程中的毒力因 子，通常与宿主组织直接接触或使病菌逃过其防卫 机制。透明质酸裂解酶降解宿主基质中的透明质酸， 使得宿主易患气性坏疽、脑膜炎、滑膜炎、增生、肾炎、 霉浆菌症、牙周疾病、乳腺炎、肺炎、败血症、梅 毒及毒性休克综合症等病症［21-23］。宿主体内的高分 子量透明质酸参与免疫调节且具有抗炎活性，而微 生物产生的透明质酸裂解酶将其所含高分子量透明 质酸裂解成寡聚透明质酸，成为诱导炎症反应的因 子，在宿主体内为微生物的生长塑造环境。
众多毒液来源的透明质酸酶中关于蜜蜂毒液透 明质酸酶（Bee venom hyaluronidase，BVH）的研究
2014年第3期
苏康等 ：透明质酸酶的研究进展
17
较早且较为深入，究其缘由是因为蜜蜂毒液中透明 质酸酶的含量相对较高。BVH 是首个经 cDNA 克隆 于大肠杆菌表达所得的真核生物来源的透明质酸酶， 是一种透明质酸 4-糖苷裂解酶（E.C.3.2.1.35），归属 于糖苷裂解酶 56 家族，作用终产物为四糖［13］。该 酶是由 349 个氨基酸组成的 40.746 kD 的糖蛋白，糖 含量在 7%，蛋白结构中有 4 个半胱氨酸构成的二硫 键和 3 个糖基化位点［14］。Markovic-Housley 等［15］将 BVH 与 HA 四聚体合成结晶，晶体分析显示蛋白进 行（β/α）7 折叠而非常规的（β/α）8 折叠，酶与 HA 结合位点位于保守氨基酸丰富的 C 末端，催化过程 中谷氨酸为质子给予体，HA 结构中的羧基基团为亲 核体。除蜜蜂外，来自于虎头蜂、黄蜂等其他蜂类 的透明质酸酶也有所研究。虎头蜂毒液中的透明质 酸酶经 cDNA 克隆序列测定 ：含 331 个氨基酸，与 BVH 有 56% 的 序 列 相 似 性［16］。SDS-PAGE 以 及 质 谱分析鉴定到黄蜂 P.paulista 毒液中有 4 种不同分子 结构的透明质酸酶，通过蛋白质组学分析已将其中 含量最高的 Hyal III 进行测序，建构 3D 结构。Hyal III 含有 288 个氨基酸，分子量在 44.340，pI 9.50［17］
几丁质酶抑制检测
平板透明圈法测定几丁质酶抑制率一、实验原理几丁质酶在节肢动物蜕皮过程中发挥了极为重要作用，通过抑制几丁质酶的活性，阻止幼虫和蛹蜕皮起到杀虫作用。
几丁质酶抑制化合物筛选平板含有胶体几丁质和琼脂。
在平板上打孔加入酶液。
几丁质酶能分解平板中的胶体几丁质而产生透明圈。
用相同量的酶液与待测液混合是，与对照相比，透明圈越小表明受抑制程度越高。
二、试剂和仪器1、几丁质酶液：0.5U/ml 几丁质酶溶于磷酸缓冲液中。
2、PBS缓冲液：溶液A Na2HPO4浓度0.2mmol/ml，71.6g Na2HPO4溶于1L蒸馏水中；溶液B NaH2PO4浓度0.2mmol/ml，31.2g NaH2PO4溶于1L蒸馏水中；取A 37.5ml、B 62.5ml混合PH=6.6 4℃保存，一周使用完。
3、几丁质胶配置：取粉状几丁质2g置于烧杯中，加入40ml浓盐酸搅拌，几丁质被浓盐酸溶解成糊状物质，加入200ml去离子水，不断搅拌至乳白色胶体析出，将胶体用200目纱布过滤，倒去滤液。
在胶体中加入200ml去离子水搅拌过滤，重复此步骤至PH﹥5，再用磷酸缓冲液冲洗胶体至中性左右。
4℃密封保存备用。
试验前取出定量胶体几丁质，加去离子水溶解，配置成浓度为0.5%的溶液，进行超声处理，使溶液成为均质絮状胶体溶液。
4、平板配置：取胶态几丁质5g，琼脂粉2g，用蒸馏水定容至100ml，在250ml三角瓶中加热搅拌至沸腾，室温冷却至60℃，摇匀倒平板，冷却至培养基凝固。
三、试验步骤用内径为D=8mm打孔器在制备好的平板上对称打4个孔。
四、计算透明质酸酶抑制率（%）=(D对照- D样品）/ D对照×100%试中：D对照—对照组的透明圈直径D样品—测试组的透明圈直径。
透明质酸酶抑制实验
Elson-Morgan 改良法
一、实验原理
透明质酸酶是Ⅰ型过敏反应的参与者，透明质酸酶与炎症、过敏有强相关性，研究报道各种肥大细胞释放组胺的药物能调节透明质酸酶活性，一些抗敏药物有强抑制透明质酸酶活性，因此抑制透明质酸酶活性作为研究抗过敏作用的指标。
二、试剂和仪器
1、透明质酸酶：浓度500U/ml，现配现用，不能过夜，用醋酸缓冲液做溶剂；
2、透明质酸钠：0.5mg/ml，一次配制，多次使用，用醋酸缓冲液做溶剂；
3、Buffer：溶液A（0.2 mol/L 醋酸11.55ml冰醋酸溶于1L蒸馏水中）4.8ml
溶液B（0.2 mol/L醋酸钠16.4g无水醋酸钠或27.2g三水合醋酸钠溶于1L蒸馏水中）45.2ml，混合稀释至100ml，配制成PH=5.6的醋酸缓冲液；
4、乙酰丙酮溶液：50ml 1.0mol/L 碳酸钠溶液和3.5ml乙酰丙酮溶液混合均匀（临用现配）
5、P-DAB显色剂：0.8g 对二甲氨基苯甲醛溶于15ml浓盐酸和15ml无水乙醇混合均匀。
6、氯化钙溶液CaCl2：2.5mol/L
7、氢氧化钠溶液NaOH：5 mol/L
样品参考浓度1.2mg/ml
三、试验步骤
四、计算
透明质酸酶抑制率（%）=[(C-D)-(A-B)]/ (C-D) ×100%
试中：A—（透明质酸酶+样品+透明质酸钠）试样溶液的OD值B—（醋酸缓冲液+样品+醋酸缓冲液）试样空白的OD值
C—（透明质酸酶+去离子水+透明质酸钠）对照溶液的OD值
D—（醋酸缓冲液+去离子水+醋酸缓冲液）对照空白的OD值。
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Elson-Morgan 改良法
一、实验原理
透明质酸酶是Ⅰ型过敏反应的参与者，透明质酸酶与炎症、过敏有强相关性，研究报道各种肥大细胞释放组胺的药物能调节透明质酸酶活性，一些抗敏药物有强抑制透明质酸酶活性，因此抑制透明质酸酶活性作为研究抗过敏作用的指标。
二、试剂和仪器
1、透明质酸酶：浓度500U/ml，现配现用，不能过夜，用醋酸缓冲液做溶剂；
2、透明质酸钠：ml，一次配制，多次使用，用醋酸缓冲液做溶剂；
3、Buffer：溶液A（ mol/L 醋酸冰醋酸溶于1L蒸馏水中）
溶液B（ mol/L醋酸钠无水醋酸钠或三水合醋酸钠溶于1L蒸馏水中），混合稀释至100ml，配制成PH=的醋酸缓冲液；
4、乙酰丙酮溶液：50ml L 碳酸钠溶液和乙酰丙酮溶液混合均匀（临用现配）
5、P-DAB显色剂：对二甲氨基苯甲醛溶于15ml浓盐酸和15ml无水乙醇混合均匀。
6、氯化钙溶液CaCl2：L
7、氢氧化钠溶液NaOH：5 mol/L
样品参考浓度ml
三、试验步骤
四、计算
透明质酸酶抑制率（%）=[(C-D)-(A-B)]/ (C-D) ×100%
试中：A—（透明质酸酶+样品+透明质酸钠）试样溶液的OD值
B—（醋酸缓冲液+样品+醋酸缓冲液）试样空白的OD值
C—（透明质酸酶+去离子水+透明质酸钠）对照溶液的OD值 D—（醋酸缓冲液+去离子水+醋酸缓冲液）对照空白的OD值。