溶血率实验方案

溶血率测定实验方案

1.实验目的

考察XXXX是否具有溶血反应。

2.实验原理

当稀释血液中加入溶血剂后，红细胞溶解并释放出血红蛋白（Hb），血红蛋白与溶血剂中的某些成分结合形成一种血红蛋白衍生物，在特定波长（530～550nm）下比色，吸光度变化与稀释液中Hb含量成正比，最终显示Hb浓度。溶血剂配方不同，所形成血红蛋白衍生物不同，吸收光谱不同，一般最大吸收峰接近540nm。

3.实验材料

3.1受试品

受试品XXXXX由本公司自制，受试品储备液浓度为XXX mg/mL。

3.2实验动物

SD大鼠，体重200±20 g，雌雄各半，上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，许可证: XXX

3.3实验仪器及试剂

试剂：磷酸盐缓冲液（PBS），XXX公司提供；Triton X-100（2%，w/v），，XXX公司提供。

仪器：离心机: 北京医用离心机厂，型号:XXX,恒温水浴锅: 上海跃进医疗器械厂，型号：XXXX。

4.实验方法

1. 2%红细胞悬液的制备取新鲜大鼠血～10 mL，1000～1500r/min离心10 min，除去上清液，沉淀的红细胞再用PBS按上述方法洗涤3次，至上清液不显红色为止。将所得红细胞用PBS配成2%的混悬液(红细胞2mL，加生理盐水至100mL)，供试验用。

2.实验分为4组，每组取5个离心管，每组各管分别加入材料A 0.9 mL （实验组A）、材料B 0.9 mL （实验组B）、同批号PBS 0.9 mL（阴性对照组）和Triton X-100（2%，w/v）0.9 mL（阳性对照组）。每管加稀释兔血0.1 mL，轻轻混匀

后置37℃水浴孵育1 h，1000r/min离心5 min，吸取上清移至96孔板，用酶标仪在波长545 nm处测吸光度（A）值，取平均值计算溶血率。

溶血率: 溶血率(%)=（实验组A值－阴性对照组A值）/（阳性对照组A值－阴性对照组A值）×100%。

预实验：正式实验之前用紫外分光光度计测定溶血后形成的血红蛋白衍生的最大吸收波长。

5 数据处理

6 实验结果

7 结论