HPLC法测定果蔬中维生素C

二氯苯酚吲哚酚钠盐滴定法比较，定量结果基本一致，但对
常有色素物质存在，造成滴定法滴定终点观察困难的生物
组织液更能发挥其特长。
4 参考文献
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农业基础科学
现代农业科技 2011 年第 3 期
HPLC 法测定果蔬中维生素 C
郝学宁 郝嫱嫱 刘雪莲
（青海省农林科学院分析测试中心，青海西宁 810016）
摘要 通过高效液相色谱法和国标法 2 种方法测定了果蔬中的维生素 C，通过精密度、准确度、回收率等方法对比结果表明：液相色 谱法是一种高效、快速、准确、高灵敏度的分离分析方法。
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（Analysis and Testing Center of Qinghai Agriculture and Forestry Sciences，Xining Qinghai 810016） Abstract In this paper，high performance liquid chromatography and national standard method were used to determine VC in fruits and vegetables. Through the precision， accuracy，recovery methods，etc.，such as comparative results showed that liquid chromatography was an efficient， fast，accurate and high sensitivity separation analysis method. Key words HPLC method；fruits and vegetables；vitamin C；determination
泵、U6K 进样器、481 紫外检测器、740 数据处理机；MILLI-Q 理机采用单点外标法进行定量，直接打印出分析结果。
型 超 纯水 装 置 ；GL-20 型 高 速 冷 冻 离 心 机 。试 剂 ：磷 酸 二 氢 2 结果与分析
铵，偏磷酸，浓磷酸，抗坏血酸；均为分析纯。
2.1 精密度
1.2 样品前处理
荧 光 光 度 法 、电 位 法[1]和 紫 外 分 光 光 度 法[2-3]等 ，各 种 方 法 均 取 上 清 液 5 mL，0 ℃ 、2 700 r/min 离 心 10 min， 用 0.45 μm
有特长和不足。高效液相色谱是近年来发展起来的一种快 膜过滤后进样。
速、高效的分离技术 。运用这一现代色谱工具进行维生素 C 1.3 试验方法
因此，测定 水 果 及 蔬 菜 中 的 维 生 素 C 含 量 ， 对 评 定 其 营 养 磷酸定容至 100 mL 容量瓶。少量样品，称取样品 1~5 g 倒入
价值有重要意义。
研钵 内 ，加 入 少 量 3%偏 磷 酸 充 分 研 磨 成 糊 状 ，全 部 转 移 定
维生素 C 的测定方法有多种，包括容量法、比色法以及 容 至 100 mL 容 量 瓶 。将 定 容 好 的 容 量 瓶 超 声 提 取 10 min，
24 h 0.010 0 0.050 7 0.011 9
48 h 0.009 8 0.047 7 0.011 9
3 结论 试 验 结 果 表 明 ，反 相 HPLC－UV 检 测 法 具 有 样 品 用 量
少、预处理简单、流动相无毒、速度快、选择性好、灵敏度高 等特点[7-8]，具有较高的精密度和准确度。与普通应用的 2，6-
0.44 0.19
变异系数 %
1.42 2.01
试验条件下维生素 C 的最小检测量为 2.5×10-9 g。 2.2 方法可靠性
历经制样全过程，在不同基样中加入维生素 C，回收考 察其准确度，结果见表 2。由表 2 可知 ，样品平均回收率为 99.2%。标准维生素 C 和典型样品的色谱图见图 1。
作者简 介 郝 学宁 （1955-），男，河 北 永 清 人 ，高 级 实 验 师 ，从 事 农 样 样品 1 样品 2
起始 0.010 0 0.055 8 0.013 4
2h 0.010 0 0.054 0 0.012 6
维生素 C 浓度∥mg/mL 4h 6h 8h 0.010 0 0.010 0 0.010 0 0.053 8 0.053 7 0.052 0 0.012 6 0.012 5 0.011 9
回收率 %
97.2 92.2 109.8 97.2 99.7
注：表中检出量均为 5 次平行测定平均值。
部分样品的测定结果与 2，6-二氯苯酚吲哚酚钠盐滴定
30
郝学宁等：HPLC 法测定果蔬中维生素 C
维生素 C
维生素 C
维生素 C
0.00
2.5 0.00
2.5 0.00
2.5
样品 1
样品 2
维生素 C标样
研究过程中得到桃江县农业局刘若书高级农艺师、林温华站长的 帮助，特此致谢！
5 参考文献
[1] 冉 茂 林 ，陈 铮.我 国 稻 田 养 鸭 的 发 展 及 研 究 现 状 [J].中 国 畜 牧 杂 志 ，
无变 化 ，48 h 内 稍 有 下 降 ；而 样 品中 由 于 存 在 抗 坏 血 酸 酶 ， 2 h内 分 别 比 原 浓 度 下 降 3.2%和 6.0%，48 h 内 分 别 比 原 浓 度 下 降 14.5%和 11.2%。因此 ，样 品 应 迅 速 处 理 后 立即 上 机 为好。
效无明显变化。柱压一直保持在 1 500 Pa 左右。维生素 C 峰 的保留时间稳定在 1.8 min±1 s。 2.4 维生素 C 溶液的可保存性
在（20±2）℃的 室 温 下 ，经 连 续 测 定 维 生 素 C 的 氧 化 程 度 ，结 果 见 表 4。 由 表 4 可 知 ， 标 样 在 试 验 浓 度 下 ，24 h 内
配 制 0.005 0 mg/mL 的 标 准 维 生 素 C 溶 液 ， 进 样 量 从
用超纯水配制 0.5%的磷酸二氢铵，用 0.45 μm 膜过滤， 2.5 μL开始，以响应值与进样量绘制标准曲线均成线性 。试
将浓磷酸调至 pH 值为 2.3 作为流动相。
验结果见表 1。回归方程为：
标样配制：准确称取维生素 C 标样 50 mg，用 3%偏磷酸
如下。
481 紫 外 检 测 器 ； 波 长 243.5 nm； 灵 敏 度 0.1 AuFS； 进 样 量
1 材料与方法
10 μL。
1.1 仪器与试剂
根据经典的保留值法和样品中维生素 C 与加入标样后
仪 器 ： 高 效 液 相 色 谱 仪 ， 美 国 Waters201 型 ， 包 括 510 色谱峰迭加来定性。将标准液注入色谱柱中 ，经 740 数据处
在 3 个区的自然增长率，常规用药区、稻-鱼区、稻-鸭鱼区分别为 r=0.063 1、r=0.153 2、r=0.137 3。说明在稻-鱼 区 和稻-鸭-鱼区，蜘蛛的数量增长属于较高增长率，说明此复 合生态系统中，鸭和鱼对蜘蛛的数量增长繁殖影响不大，而 在常规用药区，化学农药在杀灭害虫的同时也杀死了天敌蜘 蛛，自然增长率 r 值仅 0.063 1，比稻-鱼区的 r 值 0.153 2 和 稻-鸭-鱼 区 的 r 值 0.137 3 低 58.8%和 54.0%。处 于 极 低 的 增长率，化学农药的危害由此可见一斑。 4 致谢
的 检 测 ，国 内 外 曾 有 报 道[4-6]。在 此 基 础 上 ，开 展 了 液 相 色 谱 测定果蔬中维生素 C 的工作，效果较好。现将试验情况总结
色谱条件：色谱柱 NOVA—PAKC18；流动相 0.5%NH4H2PO4， 流 速 1 mL/min； 纸 速 1 cm/min； 洗 脱 时 间 2.5 min； 检 测 器
维生 素 C 是 人 类 营 养 中 最 重要 的 维 生 素 之 一 ，它 能 增 定容至 500 mL 容量瓶摇匀，再吸取 1 mL 定容至 100 mL。
强人体抵抗力，预防坏血病，因此又称抗坏血酸。维生素 C
样品制备 ：大 量 样 品 ，迅 速 称取 切 碎 样 品 100 g 加 等 量
分 布 很 广 ，主 要 存 在 于植 物 性 食 物 的 果 实 、浆 果和 蔬 菜 中 。 3%偏磷酸，倒入组织捣碎机捣碎，称取匀浆 20.0 g，用 3%偏
图 1 标准维生素 C 和典型样品色谱
法结果比较见表 3。 表 3 测定方法比较结果
样品
苹果 1 苹果 2 早酥梨 茄子 辣椒 白菜
维生素 C 含量∥mg/100 g
色谱法
滴定法
8.00
7.34
11.92
12.42
6.76
5.94
7.30
6.47
120.10
117.40
55.80
58.30
2.3 柱效 在有预柱的情 况 下 ，1 根 柱 子经 过 500 余 次 的 进 样 ，柱
关键词 HPLC 法；果蔬；维生素 C；测定 中图分类号 O652.63 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2011）03-0030-02
Determination of Vitamin C in Vegetables and Fruits with HPLC Method HAO Xue-ning HAO Qiang-qiang LIU Xue-lian
y=1.030x-2.431×10-5
（r=0.999 7）
表 1 精密度试验结果
样品
刀豆角 西瓜皮
1 31.60 9.80
2 31.20 9.40
维生素 C 含量∥mg/100 g
3
4
5
30.80
30.9
30.30
9.50
9.4
9.30
6 31.20 9.30
平均 31.00 9.45
标准差 mg/100 g
收稿日期 2010-12-18
表 2 回收率
样品
苹果 菜瓜 辣椒 西红柿 杏
样品含量 mg/100 g 11.92 14.20 155.90 16.08 15.36
加入标样量 mg 20.0 20.0 50.0 20.0 20.0
检出量 mg
19.44 18.44 54.90 19.44 19.94
（上接第 29 页） K=936.371 2，K=893.813 7。
由 比 较 知 ，稻-鱼 区 的 环 境 容 纳 量 为 K=936.371 2，稻鸭-鱼区的环境容纳量为 K=893.813 7，易知在这 2 个区鱼鸭 的活动对蜘蛛的数量影响不大，稻-鸭-鱼区的 K 值稍小，则 说明鸭活动对蜘蛛的数量变化稍有影响，而在常规用药 区，由于化学农药的破坏性作用，K 值最大仅为 444.219 6，这 也反映了化学农药的副作用，化学农药的不合理施用会对 生 态 环 境 造 成 极 大 的 破 坏 [17]。