3-Crystal Structure of Human Enterovirus 71
科学家利用小分子化合物将成人星形胶质细胞转变为神经细胞
科学家利用小分子化合物将成人星形胶质细胞转变为神经细胞佚名
【期刊名称】《肿瘤防治研究》
【年(卷),期】2017(44)5
【摘要】《干细胞报道》（Stem Cell Reports）在线发表了中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所裴钢研究组利用小分子化合物组合实现将成人星形胶质细胞直接转变为神经细胞的研究成果。
【总页数】1页(P370-370)
【关键词】星形胶质细胞;小分子化合物;神经细胞;成人;科学家;上海生命科学研究院;细胞生物学;中国科学院
【正文语种】中文
【中图分类】R285.5
【相关文献】
1.利用小分子化合物将小鼠体细胞诱导转化为多能干细胞 [J],
2.我国科学家成功合成有效对抗幽门螺杆菌的小分子化合物 [J],
3.我科学家发现治疗肝癌的新型小分子化合物 [J], 赵汉斌
4.Internet上的小分子化合物公共数源的利用 [J], 郑颖;邓勇
5.利用计算机模拟筛选可特异性结合并抑制FtsZ聚合的小分子化合物 [J], 余浩源;陈亨野;杨冬
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三维细胞培养技术培训ppt课件
3 水凝胶三维细胞培养
试剂盒组分 ① BD Matrigel ② PBS缓冲液 ③ 细胞回收液
赛哲生物®水凝胶三维细胞培养系列试剂盒（#SZCE13001~#SZCE13010） 乳腺癌系列、胃癌系列、宫颈癌系列、肝癌系列、肺癌系列 分别用于胶上培养、胶内培养
3 水凝胶三维细胞培养
胶内培养
胶上培养
Байду номын сангаас
3 水凝胶三维细胞培养
细胞处理
药物刺激： 胶上层培养液中加入刺激药物
细胞转染： 胶上培养： ① 使用sagene 3D-HG（#SC1201） 三维培养专用转染试剂 ② 使用慢病毒or 腺病毒感染 胶内培养： 使用慢病毒or 腺病毒感染
3 水凝胶三维细胞培养
细胞的回收
细胞回收液（cell recovery solution）：不含酶，能够解聚matrigel 1-2ml 细 胞 回 收 液 ， 轻 轻 刮 起 含 有 细 胞 的 凝 胶 （ 禁 止 吹 吸 ） ， 转 入
水凝胶三维细胞培养
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① 什么是三维细胞培养 ② 如何实现三维细胞培养 ③ 水凝胶三维细胞培养 ④ 更多问题
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1 什么是三维细胞培养
——Kenneth M. Yamada, and Edna Cukierman. Modeling Tissue Morphogenesis and Cancer in 3D. [J]cell. 130, 601-610.
2 如何实现三维细胞培养
水凝胶三维培养：
将细胞培植在一定的细胞外基质中 , 细胞外基质（extracellularmatrix, ECM ）蛋白充当生长支架。
细胞生物学 读书心得
读《Nature：颜宁等揭示人源葡萄糖转运蛋白GLUT1的结构及工作机理》心得广二师生物系hexuecheng摘要：清华大学医学院颜宁教授研究组在世界上首次解析了人源葡萄糖转运蛋白GLUT1的晶体结构，初步揭示了其工作机制及相关疾病的致病机理。
此研究成果可帮助人类理解分子转运最基本过程，人类有望有望阻断癌细胞营养，“饿死癌细胞”。
关键词：葡萄糖转运蛋白颜宁癌细胞5月18日，清华大学医学院教授颜宁研究组在Nature在线发表了题为Crystal structure of the human glucose transporter GLUT1的研究论文，在世界上首次报道了人源葡萄糖转运蛋白GLUT1的晶体结构，初步揭示其工作机制以及相关疾病的致病机理。
该研究成果意义重大，该研究成果被国际学术界誉为“具有里程碑意义”的重大科学成就。
首先，从科研的角度说，第一个揭示了人源转运蛋白的结构，可以帮助人类理解分子转运这一生命科学中最基本的过程。
从临床的角度说，有助于了解幼儿癫痫、癌症、糖尿病的发病机制以研发相应的药物。
不仅如此，该研究成果使人类相对完整地理解人体内葡萄糖运转机理的整个过程仅差一步。
那么这个葡萄糖转运蛋白GLUT1究竟是什么东西呢？功能是怎样的呢？人们都很清楚，葡萄糖（D-glucose）是地球上包括从细菌到人类各种生物已知最重要、最基本的能量来源。
葡萄糖代谢的第一步就是进入细胞：亲水的葡萄糖不能自由穿透疏水的细胞膜，其进出细胞需要通过镶嵌于细胞膜上的葡萄糖转运蛋白完成。
其中一类属于主要协同转运蛋白超家族（Major Facilitator Super family ，简称MFS）的转运蛋白是大脑、神经系统、肌肉、红细胞等组织器官中最重要的葡萄糖转运蛋白（glucose transporters，简称GLUTs）。
在人体的14个GLUTs中，GLUT1、2、3、4这四种蛋白生理功能最重要，研究最广泛，其中GLUT1因发现最早而得名。
博士复试英文PPT
3. PTBP1 enhances exon11a skipping of Mena premRNA in lung cancer cells
Results
1. PTBP1 is highly expressed in lung adenocarcinoma (LUAD) tissues and 95-D cells and upregulation of PTBP1 is associated with EMT progress
2. PTBP1 promotes migration and invasion of lung cancer cells
Master Research
PTBP1 enhances exon11a skipping in Mena premRNA to promote migration and invasion in lung
carcinoma cells
Background Objectives Technology Methods Results Conclusions
5. PTBP1-mediated migration and invasion of 95-D cells are partially dependent on MenaINV
Results
2.1. Overexpressed PTBP1 promotes levels of EMT-related proteins in lung cancer cells
Technology Methods
Results
1. PTBP1 is highly expressed in lung adenocarcinoma (LUAD) tissues and 95-D cells and upregulation of PTBP1 is associated with EMT progress
琥珀酸通过活性氧途径诱导人脐静脉内皮细胞焦亡
[收稿日期]㊀2020-08-28[修回日期]㊀2020-10-27[基金项目]㊀国家自然科学基金(31670962,81370378);湖南省卫健委临床重大专项(20200011-1003);湖南省大学生创新创业训练计划项目(S201910555137)[作者简介]㊀章舒蕾,硕士研究生,研究方向为动脉粥样硬化病因发病学与防治基础,E-mail 为1029645492@㊂通信作者危当恒,博士,教授,博士研究生导师,研究方向为动脉粥样硬化病因发病学与防治基础,E-mail 为759353094@㊂㊃实验研究㊃[文章编号]㊀1007-3949(2021)29-01-0042-06琥珀酸通过活性氧途径诱导人脐静脉内皮细胞焦亡章舒蕾,梁亚敏,罗涔方,危当恒(南华大学心血管疾病研究所动脉硬化学湖南省重点实验室湖南省动脉硬化性疾病国际科技创新合作基地,湖南省衡阳市421001)[关键词]㊀琥珀酸;㊀人脐静脉内皮细胞;㊀线粒体;㊀活性氧;㊀焦亡;㊀动脉粥样硬化[摘㊀要]㊀目的㊀探讨琥珀酸对人脐静脉内皮细胞(HUVEC )焦亡的影响及其调控机制㊂方法㊀用琥珀酸类似物琥珀酸二乙酯(DS )处理HUVEC 24h ,比色法检测细胞内琥珀酸含量,Western blot 检测细胞焦亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)㊁白细胞介素1β(IL-1β)㊁IL-18㊁NOD 样受体蛋白3(NLRP3)㊁消皮素D N 端(GSDMD-N )的含量;ATP 测定试剂盒以及活性氧(ROS )荧光探针分别检测琥珀酸对HUVEC 的ATP 以及ROS 生成的影响㊂ROS 清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC )检测ROS 在琥珀酸诱导HUVEC 焦亡中的作用㊂琥珀酸氧化抑制剂丙二酸二甲酯(DMM )检测琥珀酸氧化代谢对ROS 产生的影响㊂结果㊀DS 促HUVEC 内琥珀酸蓄积,上调焦亡相关蛋白Caspase-1㊁IL-1β㊁IL-18㊁GSDMD-N 和NLRP3的表达,抑制ATP 生成并上调ROS 产生㊂NAC 抑制琥珀酸诱导的ROS 生成,并下调上述焦亡相关蛋白的表达㊂DMM 下调琥珀酸诱导的ROS 产生以及HUVEC 的焦亡㊂结论㊀琥珀酸通过氧化代谢上调ROS 生成,进而促进HUVEC 焦亡㊂[中图分类号]㊀R54[文献标识码]㊀ASuccinate induces pyroptosis of human umbilical vein endothelial cells via reactive ox-ygen species pathwayZHANG Shulei,LIANG Yamin,LUO Cenfang,WEI Dangheng(Institute of Cardiovascular Disease &Key Laboratory for Arteriosclerology of Hunan Province &Hunan International Scientif-ic and Technological Cooperation Base of Arteriosclerotic Disease ,Hengyang Medical College ,University of South China ,Hengyang ,Hunan 421001,China )[KEY WORDS ]㊀succinate;㊀human umbilical vein endothelial cell;㊀mitochondria;㊀reactive oxygen species;㊀py-roptosis;㊀atherosclerosis[ABSTRACT ]㊀㊀Aim ㊀To investigate the effect of succinate on pyroptosis of human umbilical vein endothelial cells (HUVEC)and its regulatory mechanism.㊀㊀Methods ㊀HUVECs were treated with succinate analogue diethyl succinate (DS)for 24h,and the content of succinate was detected by colorimetry.㊀Western blot was used to detect the expressions of pyroptosis-related protein cysteinyl aspartate specific proteinase 1(Caspase-1),interleukin-1β(IL-1β),IL-18,NOD-like receptor protein 3(NLRP3),gasdermin D N termine (GSDMD-N).㊀The effects of succinate on ATP and reactive oxygen species (ROS)production of HUVEC were detected by ATP assay kit and ROS fluorescent probe.㊀ROS scavenger N-acetylcysteine (NAC)was used to observe the role of ROS in HUVEC pyroptosis induced by succinate.㊀Dimethyl mal-onate (DMM),a succinate oxidation inhibitor,was used to detect the effect of succinate oxidative metabolism on ROS pro-duction.㊀㊀Results ㊀DS promoted the accumulation of succinate in HUVEC,up-regulated the expressions of pyroptosis-related proteins Caspase-1,IL-1β,IL-18,GSDMD-N and NLRP3,inhibited ATP production and up-regulated ROS pro-duction.㊀NAC inhibited the production of ROS induced by succinate and down-regulated the expressions of above pyropto-sis-related proteins.㊀DMM down-regulated succinate-induced ROS production and HUVEC pyroptosis.㊀㊀Conclusion ㊀Succinate up-regulates ROS production through oxidative metabolism,thus promoting HUVEC pyroptosis.㊀㊀动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)为慢性炎症性病理过程,血管内皮细胞炎性活化为As发生发展过程的重要环节[1]㊂近来的研究发现,三羧酸循环中间体及其衍生物通过 非能量代谢途径 调控细胞功能并参与As的发生发展进程[2]㊂琥珀酸为三羧酸循环重要的中间代谢产物,其促进炎症因子的释放以及血管内皮细胞的损伤[3]㊂琥珀酸上调小鼠骨髓来源的树突状细胞白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达[4]㊂高糖通过琥珀酸/G蛋白偶联受体91(G-protein coupled receptor 91,GPR91)信号促进血管紧张素Ⅱ释放,损伤人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell, HUVEC)[5]㊂Koenis等[6]发现Nur77敲除促As病变,该模型小鼠血清琥珀酸水平明显增加,并且Nur77-/-的巨噬细胞中琥珀酸大量积蓄,但琥珀酸积蓄与血管内皮细胞炎性活化间关系尚不清楚㊂血管内皮细胞焦亡(炎性㊁程序性细胞死亡)发生于As进程,并与As的稳定性密切相关[7]㊂在焦亡过程中,Nod样受体蛋白3(NOD-like receptor pro-tein3,NLRP3)炎性小体被活化,半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(cysteinyl aspartate specific proteinase1,Caspase-1)前体蛋白被激活,并介导IL-1β和IL-18的加工和成熟㊁活化及裂解消皮素D (gasdermin D,GSDMD)㊂此外,Pro-Caspase-1还能直接裂解GSDMD触发焦亡,参与血管内皮细胞的损伤以及炎性活化[8-9]㊂活性氧(reactive oxygen species,ROS)是细胞焦亡重要的诱导分子,Koenis 等[6]发现琥珀酸大量蓄积的Nur77-/-巨噬细胞伴随有大量的ROS产生㊂因此,本文采用外源性的琥珀酸类似物观察琥珀酸对血管内皮细胞ROS产生以及焦亡的影响,以探讨琥珀酸对血管内皮细胞炎性活化的影响及其机制㊂1㊀材料和方法1.1㊀细胞株与试剂HUVEC购自中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所,琥珀酸二乙酯(diethyl succinate, DS)㊁丙二酸二甲酯(dimethyl malonate,DMM)㊁N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)购自TCI(上海)化成工业发展有限公司,琥珀酸比色测定试剂盒购自美国Sigma-Aldrich公司,DMEM高糖培养基㊁胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)购自美国Gibco公司,ATP测定试剂盒购自中国南京建成生物工程研究所,ROS检测荧光探针二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)购自江苏凯基生物技术股份有限公司,BCA蛋白定量试剂盒购自中国上海康为世纪生物科技有限公司,消皮素D N端(GSDMD-N)㊁IL-1β㊁GAPDH㊁Caspase-1㊁NLRP3抗体购自美国Proteintech公司,IL-18抗体购买于美国GeneTex 公司㊂1.2㊀HUVEC培养与处理HUVEC采用含10%FBS的DMEM高糖培养基培养,加入琥珀酸类似物DS(可显著增加胞质和线粒体基质中的琥珀酸),DS的终浓度为10mmol/L;2.5mmol/L NAC预处理3h后加入DS处理24h,观察ROS对DS诱导的血管内皮细胞焦亡的影响; DMM预处理6h后加入DS处理24h,观察琥珀酸氧化代谢途径对血管内皮细胞ROS产生以及焦亡的影响,DMM的浓度10mmol/L㊂1.3㊀BCA蛋白定量法按照说明书处理样品,用酶标仪在562nm波长处测定并记录吸光度,根据标准曲线计算样品中蛋白浓度㊂1.4㊀ATP含量测定将收集好的细胞加入90~100ħ双蒸水,置于热水浴(90~100ħ)中将其匀浆破碎,后将细胞悬液于沸水浴中加热10min,取出细胞悬液用1mL移液枪混匀1min㊂然后按照说明书加试剂,最后混匀,常温静置5min㊂检测波长为636nm,光径为0.5cm,双蒸水调零,测定各管吸光度值,保存并分析结果㊂1.5㊀ROS荧光探针DHE检测从培养箱中取出处理好的细胞,用PBS洗3次㊂加入终浓度为50μmol/L的DHE液,在37ħ水浴箱避光条件下孵育45min,PBS清洗细胞3次,每次6min㊂荧光显微镜拍照,保存并分析结果㊂1.6㊀Western blot检测蛋白的表达收集细胞,使用预冷的PBS洗3次,加入裂解液后4ħ静置30min,12000r/min离心10min,取上清后采用BCA法进行蛋白定量㊂目的蛋白经SDS-PAGE凝胶电泳分离并转移至PVDF膜上,5%脱脂牛奶室温封闭2h,加入单克隆抗体GSDMD (1ʒ1000)㊁IL-1β(1ʒ1000)㊁IL-18(1ʒ1000)㊁Caspase-1(1ʒ1000)㊁NLRP3(1ʒ1000)㊁GAPDH (1ʒ2000)4ħ孵育过夜,TBST洗3次,每次10 min,相应二抗室温孵育2h,ECL发光试剂显色,拍照并保存结果㊂1.7㊀琥珀酸含量测定收集细胞,在冰中快速匀浆,加入100μL低温琥珀酸测定缓冲液,以10000r /min 离心10min ,收集上清液㊂采用琥珀酸比色测定试剂盒,加入各反应物,在37ħ下避光孵育30min ,450nm 波长处测定吸光度㊂1.8㊀统计学方法所有实验数据均用x ʃs 表示,运用Image ProPlus ㊁GraphPad Prism 5统计软件进行数据分析,组间比较采用方差分析及t 检验,P <0.05表示差异具有统计学意义㊂2㊀结㊀果2.1㊀琥珀酸促HUVEC 焦亡㊀㊀为了探讨琥珀酸对血管内皮细胞焦亡的影响,首先观察了琥珀酸的类似物DS 处理24h 后血管内皮细胞内琥珀酸含量,结果显示DS 明显增加血管内皮细胞内琥珀酸含量(图1A)㊂然后Western blot 检测了DS 对血管内皮细胞焦亡相关蛋白NLRP3㊁GSDMD-N㊁Caspase-1㊁IL-18以及IL-1β蛋白表达的影响,结果表明DS 上调NLRP3㊁GSDMD-N㊁Caspase-1㊁IL-18以及IL-1β的表达(图1B)㊂这些结果表明细胞内琥珀酸蓄积促焦亡㊂2.2㊀琥珀酸抑制HUVEC 的ATP 生成线粒体是细胞的能量工厂,ATP 是维持机体正常生理活动的重要物质㊂ATP 含量检测的结果表明DS 抑制ATP 生成(图2)㊂图1.琥珀酸促HUVEC 焦亡(n =3)A 为DS 促HUVEC 内琥珀酸蓄积;B 为DS 处理HUVEC 24h,Western blot 检测焦亡相关蛋白NLRP3㊁Caspase-1㊁GSDMD-N㊁IL-18以及IL-1β的表达㊂a 为P <0.05,b 为P <0.01,与Control 组比较㊂Figure 1.HUVEC pyroptosis promoted by succinate (n =3)图2.琥珀酸对HUVEC 线粒体ATP 生成的影响(n =3)a 为P <0.01,与Control 组比较㊂Figure 2.Effect of succinate on mitochondrial ATPproduction in HUVEC (n =3)2.3㊀琥珀酸增加HUVEC 的ROS 水平随后,我们采用荧光探针检测琥珀酸对ROS 的影响,结果表明DS 显著增加HUVEC 的ROS 水平(图3)㊂图3.琥珀酸增加HUVEC 的ROS 水平Figure 3.Succinate promoted the generation ofROS in HUVEC2.4㊀ROS 清除剂NAC 抑制琥珀酸诱导的HUVEC 焦亡为了探讨ROS 在琥珀酸诱导血管内皮细胞焦亡中的作用,我们采用ROS 清除剂NAC(2.5mmol /L)预处理血管内皮细胞3h,再DS 孵育HUVEC,结果表明NAC 预处理抑制琥珀酸诱导的ROS 积聚(图4A),并且抑制琥珀酸诱导的焦亡相关蛋白表达(图4B)㊂图4.NAC 抑制琥珀酸诱导的HUVEC 焦亡(n =3)A 为NAC 预处理3h 减少琥珀酸诱导的线粒体ROS 含量;B 为NAC 减少焦亡相关蛋白NLRP3㊁GSDMD-N㊁Caspase-1㊁IL-18和IL-1β的含量㊂a 为P <0.05,与Control 组比较;b 为P <0.05,与DS 组比较㊂Figure 4.NAC inhibited HUVEC pyroptosis induced by succinate (n =3)2.5㊀琥珀酸氧化抑制剂DMM 抑制琥珀酸诱导的HUVEC 焦亡为了进一步探讨琥珀酸促ROS 生成的机制,我们采用琥珀酸氧化抑制剂DMM(10mmol /L)抑制琥珀酸的氧化㊂结果表明DMM 减少血管内皮细胞中ROS 的积聚(图5A),焦亡相关蛋白NLRP3㊁GS-DMD-N㊁Caspase-1㊁IL-18以及IL-1β表达水平降低(图5B),这些结果表明琥珀酸氧化促进ROS 的生成进而促HUVEC 焦亡㊂3㊀讨㊀论琥珀酸是三羧酸循环中间产物,由琥珀酰辅酶A 合成酶催化生成㊂研究发现,琥珀酸通过非能量代谢底物途径参与多种生理和病理过程㊂琥珀酸上调心肌细胞肥大标志物心房利钠多肽和p-Akt /t-Akt 的水平,参与右心室肥厚的形成[10];肿瘤组织琥珀酸/GPR91信号靶向PI3K-HIF-1α轴介导肿瘤相关巨噬细胞极化和肿瘤转移[11]㊂琥珀酸通过HIF-1α/VEGF 轴诱导类风湿关节炎滑膜血管生成[12]㊂我们的研究发现琥珀酸上调血管内皮细胞焦亡标记物的表达,提示细胞内的琥珀酸蓄积促进焦亡㊂焦亡是一种新发现的促炎性㊁程序性细胞死亡方式,在经典的Caspase-1依赖性焦亡通路中,活化的NLRP3促前体Caspase-1成熟,进而剪切IL-18㊁IL-1β和GSDMD,介导细胞焦亡㊂Wu 等[13]发现尼古丁引起血管内皮细胞损伤并诱发焦亡;阿托伐他汀通过lncRNA NEXN-AS1/NEXN 通路抑制血管内皮细胞焦亡,以非降脂途径保护血管内皮细胞功能[14]㊂我们的结果表明,琥珀酸促血管内皮细胞焦亡,提示琥珀酸可能通过焦亡途径引起血管内皮细胞损伤以及炎症活化㊂ROS 是细胞焦亡重要的激活分子,介导氧化低图5.DMM抑制琥珀酸诱导的HUVEC焦亡(n=3)A为DMM抑制琥珀酸诱导的ROS产生;B为DMM减少琥珀酸诱导的焦亡相关蛋白NLRP3㊁GSDMD-N㊁Caspase-1㊁IL-18和IL-1β的含量㊂a为P<0.05,与Control组比较;b为P<0.05,与DS组比较㊂Figure5.DMM inhibited HUVEC pyroptosis induced by succinate(n=3)密度脂蛋白处理的HUVEC焦亡[15];肠道菌群代谢产物氧化三甲胺通过激活ROS-TXNIP-NLRP3炎症小体轴诱导炎症和内皮功能损伤[16]㊂我们的结果表明琥珀酸类似物DS增加了血管内皮细胞ROS含量,ROS清除剂NAC可降低细胞内ROS含量并下调琥珀酸诱导的血管内皮细胞焦亡相关蛋白NLRP3㊁GSDMD-N㊁Caspase-1㊁IL-1β和IL-18的表达,表明琥珀酸通过ROS途径促血管内皮细胞焦亡㊂细胞内ROS来源于呼吸链以及底物的氧化代谢[17]㊂Li等[18]发现DMM抑制腹膜炎小鼠肿瘤坏死因子的分泌和ROS的产生㊂在本研究中我们采用琥珀酸脱氢酶抑制剂DMM观察琥珀酸氧化代谢对ROS生成的影响,结果发现DMM明显减少ROS 的产生及焦亡相关蛋白NLRP3㊁GSDMD-N㊁Caspase-1㊁IL-1β和IL-18的表达,表明细胞内琥珀酸通过氧化途径增加ROS的生成和蓄积并促焦亡发生㊂多位学者研究发现琥珀酸脱氢酶抑制剂DMM通过抑制琥珀酸的氧化代谢改善缺血后再灌注时心㊁脑㊁肾组织损伤[19-21];Mills等[22]发现DMM抑制脂多糖诱导的IL-1β的产生,抑制炎症反应,提示通过抑制琥珀酸的氧化代谢可以抑制血管内皮细胞焦亡并保护血管内皮细胞功能㊂综上所述,琥珀酸通过氧化代谢途径增加ROS 的生成,促血管内皮细胞焦亡,但琥珀酸在As发生㊁发展中的作用有待于进一步的探讨和验证㊂[参考文献][1]李苗,王丽丽,常冰梅.血管内皮细胞功能损伤机制的研究进展[J].中国动脉硬化杂志,2019,27(8): 730-736.[2]Martinez-Reyes I,Chandel NS.Mitochondrial TCA cycle metabolites control physiology and disease[J].Nat Com-mun,2020,11(1):102.[3]Mills E,O N eill LA.Succinate:a metabolic signal in in-flammation[J].Trends Cell Biol,2014,24(5):313-320.[4]Tannahill GM,Curtis AM,Adamik J,et al.Succinate is an inflammatory signal that induces IL-1beta through HIF-1alpha[J].Nature,2013,496(7444):238-242.[5]Peti-Peterdi J.High glucose and renin release:the role of succinate and GPR91[J].Kidney Int,2010,78(12): 1214-1217.[6]Koenis DS,Medzikovic L,van Loenen PB,et al.Nuclear receptor Nur77limits the macrophage inflammatory response through transcriptional reprogramming of mitochondrial me-tabolism[J].Cell Rep,2018,24(8):2127-2140. [7]Xu YJ,Zheng L,Hu YW,et al.Pyroptosis and its rela-tionship to atherosclerosis[J].Clin Chim Acta,2018, 476:28-37.[8]He Y,Hara H,Nunez G.Mechanism and regulation of NLRP3inflammasome activation[J].Trends Biochem Sci, 2016,41(12):1012-1021.[9]Xi H,Zhang Y,Xu Y,et al.Caspase-1inflammasome acti-vation mediates homocysteine-induced pyrop-apoptosis in en-dothelial cells[J].Circ Res,2016,118(10):1525-1539.[10]Yang L,Yu D,Mo R,et al.The succinate receptor GPR91is involved in pressure overload-induced ventricular hypertro-phy[J].PLoS One,2016,11(1):e0147597. [11]Wu JY,Huang TW,Hsieh YT,et al.Cancer-derivedsuccinate promotes macrophage polarization and cancer metastasis via succinate receptor[J].Mol Cell,2020,77(2):213-227.[12]Li Y,Liu Y,Wang C,et al.Succinate induces synovialangiogenesis in rheumatoid arthritis through metabolic re-modeling and HIF-1alpha/VEGF axis[J].Free Radic Biol Med,2018,126:1-14.[13]Wu X,Zhang H,Qi W,et al.Nicotine promotes athero-sclerosis via ROS-NLRP3-mediated endothelial cell pyrop-tosis[J].Cell Death Dis,2018,9(2):171. [14]Wu LM,Wu SG,Chen F,et al.Atorvastatin inhibits py-roptosis through the lncRNA NEXN-AS1/NEXN pathway in human vascular endothelial cells[J].Atherosclerosis,2020,293:26-34.[15]Zeng Z,Chen J,Wu P,et al.Ox-LDL induces vascularendothelial cell pyroptosis through miR-125a-5p/TET2pathway[J].J Cell Physiol,2019,234(5):7475-7491.[16]Wu P,Chen J,Chen J,et al.Trimethylamine N-oxidepromotes ApoE-/-mice atherosclerosis by inducing vascular endothelial cell pyroptosis via the SDHB/ROS pathway [J].J Cell Physiol,2020,235(10):6582-6591. [17]Jardim-Messeder D,Caverzan A,Rauber R,et al.Succi-nate dehydrogenase(mitochondrial complex II)is a source of reactive oxygen species in plants and regulates development and stress responses[J].New Phytol,2015, 208(3):776-789.[18]Li Y,Jia A,Wang Y,et al.Immune effects of glycolysisor oxidative phosphorylation metabolic pathway in protecting against bacterial infection[J].J Cell Physiol,2019,234(11):20298-20309.[19]Beach TE,Prag HA,Pala L,et al.Targeting succinatedehydrogenase with malonate ester prodrugs decreases renal ischemia reperfusion injury[J].Redox Biol,2020, 36:101640.[20]Kula-Alwar D,Prag HA,Krieg T.Targeting succinate me-tabolism in ischemia/reperfusion injury[J].Circulation, 2019,140(24):1968-1970.[21]Zhang J,Wang YT,Miller JH,et al.Accumulation ofsuccinate in cardiac ischemia primarily occurs via canonical Krebs cycle activity[J].Cell Rep,2018,23(9): 2617-2628.[22]Mills EL,Kelly B,Logan A,et al.Succinate dehydro-genase supports metabolic repurposing of mitochondria to drive inflammatory macrophages[J].Cell,2016,167(2):457-470.(此文编辑㊀曾学清)。
循环肿瘤细胞有丝分裂指数在癌症分层和诊断中的应用[发明专利]
![循环肿瘤细胞有丝分裂指数在癌症分层和诊断中的应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/ae94fabbf01dc281e43af03d.png)
专利名称：循环肿瘤细胞有丝分裂指数在癌症分层和诊断中的应用
专利类型：发明专利
发明人：D·亚当斯,汤家楣
申请号：CN201680043699.7
申请日：20160526
公开号：CN107850587A
公开日：
20180327
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：在患者中，循环肿瘤细胞(CTC)与恶性实体肿瘤的转移有关。
这里给出的证据是CTC表现出细胞周期阶段变异性，在有丝分裂细胞周期阶段CTC的数量与受试者长期存活的前景有很强的相关性，所述细胞来自所述受试者。
本文还介绍了从癌症患者中确定CTC的有丝分裂细胞周期阶段的方法，并利用这些信息对恶性实体肿瘤进行分级，并预测患者存活的可能性。
申请人：创新微技术公司
地址：美国马里兰州
国籍：US
代理机构：深圳市百瑞专利商标事务所(普通合伙)
代理人：金辉
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三维细胞培养技术
在神经科的应用
对机理的研究： A three-dimensional human neural cell culture model of Alzheimer's disease.
Bottom-up 方法
fibronectin(FN) 纤维蛋白 gelatin (G) 明胶 layer-by-layer (LbL)
三维细胞培养技术及应用
干细胞分化、生长 骨髓间充质干细胞又称为骨髓基质干细胞，为
造血干细胞的生长、分化及自我更新提供重要的 微环境，具有多向分化潜能。能分化为造血实质 细胞和基质细胞，以及肌肉细胞、脂肪细胞、骨 细胞、软骨细胞等各种类型细胞。
背景资料
体外建立适合细胞和组织生长的生理微环境对 医学研究至关重要，而传统的单层平面培养的细 胞无论是在形态，结构和功能方面都与在体内自 然生长的细胞相去甚远，由于无基质支持，细胞 仅能贴壁生长，从而失去其原有的形态特征及生 长分化能力。
三维细胞培养技术以其能为细胞和组织创 造一个均衡获取营养物质、进行气体交换 和废物排出的理想生理场所，又易于形成 具有合理形态和生理功能的组织器官等特 点。
三维细胞培养技术也常被应用于药物载体 、药物毒理、药物筛选、肿瘤治疗等方面 的研究。
两种方法
Top-down 方法
可生物降解的支架材料和水凝胶由生物可降解聚 合物组成，例如聚（乳酸），聚（乙醇酸）。
细胞封装在支架能积极成长并聚集。虽然它们的 生长速率可以通过培养基中的生长因子控制，但 是三维设计的 组织具有精确控制的细胞类型，但 是目前 细胞 - 细胞相互作用的机理尚未明确。这 些纳米纤维支架可以向暂定单元格对齐方式或粘 连因 形态，但它难以保持这些效果，因为 纳米纤 维完全覆盖培养的细胞和表达 的ECM的细胞。因 此，使用可生物降解基质如凝胶或纤维支架的常 规做法有若干限制。
利血平美托洛尔医治危重型手足口病患儿的体会
利血平、美托洛尔医治危重型手足口病患儿的体会肠道病毒71型病毒感染后容易显现神经系统并发症，少数中枢神经系统受累严峻的患者，病情可于短时刻内迅速进展，发生肺水肿、肺出血和呼吸循环衰竭等,严峻并发症，死亡率和致残率高。
咱们在2020年桂林手足口病流行时共收治重症、危重症患儿270余例[1]，依照指南医治后绝大部份患者均得以痊愈，小部份手足口病归并神经源性肺水肿患儿在呼吸机通气医治以后，肺部水泡音专门快消失，X 线胸片的大片状阴影消失，但患儿显现顽固性高热，体温达40℃，心率持续超过240～260次，救治无效死亡。
如何提高危重症手足口病患者的抢救成功率？2020年3-7月，我院在诊治重症、危重症EV71感染患儿时，应用利血平、美托洛尔辅助医治EV71感染重症患儿，现报告如下。
病例1：女，8个月，因发烧3天、发觉皮疹、四肢抖动1天，在基层医院查血WBC ×109/L，ECG提示窦性心动过速（心率150次/分），胸片无异。
那时按指南给予甘露醇、速尿、甲基强的松龙、西地兰、米力农等处置病情无好转，显现嗜睡、心率较前加速，复查胸片提示双肺肺水肿急救护车送我院。
那时当即气管插管，随及见大量粉红色泡沫涌出。
接呼吸机辅助通气。
初始参数O2100%，PEEP14，R 30，潮气量95ml。
约30分钟后肺部罗音消失，依照指南用药医治，用甘露醇5ml/kg q3h，IVIG1g/kg，米力农饱和量kg/h，速尿1mg/kg，甲基强的松龙后血气指标得以改善，患儿SaO2大体稳固在98%，但患儿高热，T40℃，心率持续24-260/分，BP 130-140/90以上，双侧瞳孔针头大小,血糖由17上升至23。
双下肢下腹部皮肤发花，肢端发凉。
ECG提示窦性心动过速。
3条静脉管道同时给予生理盐水/3%氯化钠扩容，硝普钠扩血管，胰岛素 u/ ,患儿病情仍无好转。
考虑该病肺水肿的机理是脑干脑炎致交感神通过度兴奋致儿茶酚胺大量释放所致；以为危重型手足口病患儿在呼吸机辅助通气、肺水肿取得操纵后，显现持续性心率增快（>220）、中枢性高热往往预后不佳，大多死亡，且目前对这组临床表现无特殊医治方式。
三维石墨烯及其衍生物在牙源性干细胞成骨中的研究进展
三维石墨烯及其衍生物在牙源性干细胞成骨中的研究进展
叶青;李继遥
【期刊名称】《口腔医学研究》
【年(卷),期】2022(38)3
【摘要】石墨烯是作为一种新兴材料,在生物医学领域的研究近年来逐渐增多。
三维石墨烯是指具有三维结构的二维石墨烯组装体,三维结构提升了石墨烯的多孔性、比表面积等,更适于细胞粘附、生长,使其具有诱导间充质干细胞成骨的能力。
本文
以三维石墨烯及其衍生物的理化性质和生物相容性为基础,对三维石墨烯及其衍生
物诱导牙源性干细胞成骨作用的研究进展作一综述,为在口腔医学领域进一步研究
石墨烯成骨应用提供参考和借鉴。
【总页数】4页(P212-215)
【关键词】石墨烯;牙源性干细胞;骨组织工程
【作者】叶青;李继遥
【作者单位】口腔疾病研究国家重点实验室
【正文语种】中文
【中图分类】TB3
【相关文献】
1.硅酸钙生物材料诱导牙源性干细胞成牙/成骨分化机制的研究进展
2.石墨烯诱导
干细胞成骨分化的研究进展3.牙源性干细胞成骨能力的研究进展4.牙源性间充质
干细胞对成骨前体细胞成骨分化的影响5.石墨烯诱导干细胞成骨分化的研究进展
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“科学家发明新型3D打印系统，可制造人体组织”
“科学家发明新型3D打印系统，可制造人体组织”
佚名
【期刊名称】《《课堂内外：科学Fans》》
【年(卷),期】2016(000)004
【摘要】据巴西媒体2月16日报道，最近美国北卡罗来纳州威克·弗里斯特浸会医疗中心的科学家尝试并指出可能利用新型3D机打印的人体组织来取代患者受损的组织。
研究者指出，已成功用3D打印制造出人耳、肌肉组织和骨骼。
在动物实验中，这些组织与血管连接，成功具有了原组织的功能。
【总页数】1页(P39-39)
【正文语种】中文
【中图分类】G434
【相关文献】
1.浙大发明新型生物3D打印方法,未来或有望自由制造人体“零件” [J], ;
2.科学家发明新型硅芯片快速3D成像成本低廉 [J],
3.科学家研制出新型人体多功能干细胞基因操控制造人体胚胎干细胞将不再困难[J],
4.科学家发明新型硅芯片快速3D成像 [J],
5.科学家用人体组织3D打印出一颗心脏 [J], Tel Aviv University
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3D-SPACE序列在深部浸润型子宫内膜异位症的价值分析
3D-SPACE序列在深部浸润型子宫内膜异位症的价值分析谷守欣;李克;张国福;张燕玉;张鹤;王雪珍【期刊名称】《中国医学计算机成像杂志》【年(卷),期】2017(023)004【摘要】目的:评价3D-SPA CE序列在深部浸润型子宫内膜异位症(DIE)的应用价值.方法:连续收集妇产科医院41例经腹腔镜证实为子宫内膜异位症的病人人组,入组病人均进行前瞻性MRI扫描,包含MRI常规序列和3D-SPACE特殊序列.采用SPSS软件统计分析两名阅片者(R1、R2)对DIE的诊断性评价和一致性评价.结果:两名医师(R1、R2)对深部浸润性子宫内膜异位症各亚型的诊断灵敏度、特异度和正确率分别结果如下:右侧宫骶韧带(R1:0.923、1.000、0.976;R2:0.923、1.000、0.976,K值1.000),左侧宫骶韧带(R1:0.923、0.964、0.951;R2..1.000、0.964、0.976,K值0.945),阴道直肠膈(R1:0.917、1.000、0.951;R2..1.000、1.000、1.000,K值0.901),直乙状结肠(R1:0.929、0.889、0.902;R2:1.000、0.926、0.951,K值0.898),子宫直肠陷凹(POD) (R1.:0.893、0.846、0.878;R2.0.929、0.846、0.902,K值0.945),膀胱和输尿管结果一致均为(R1.1.000、1.000、1.000;R2:1.000、1.000、1.000,K值1.000),且两名医生诊断结果一致性非常好.结论:MRI的3D-SPACE序列作为高分辨率MRI成像技术对深部浸润型子宫内膜异位症的诊断准确性高,建议3D-SPACE序列作为DIE的有效补充序列.【总页数】5页(P347-351)【作者】谷守欣;李克;张国福;张燕玉;张鹤;王雪珍【作者单位】复旦大学附属华山医院放射科;复旦大学附属妇产科医院放射科;复旦大学附属华山医院放射科;复旦大学附属妇产科医院放射科;复旦大学附属妇产科医院放射科;复旦大学附属妇产科医院放射科;复旦大学附属妇产科医院放射科【正文语种】中文【中图分类】R445.2【相关文献】1.1例盆腔深部浸润型子宫内膜异位症术后二便障碍患者的护理 [J], 邵寒梅2.深部浸润型子宫内膜异位症的临床病理特征分析 [J], 唐文娟3.深部浸润型子宫内膜异位症患者自我效能感水平及影响因素分析 [J], 梁冰;李新梅;杨絮;张婷4.经阴道超声诊断深部浸润型子宫内膜异位症的临床价值分析 [J], 张梅芳;涂伟娴;王雪峰;吕小霞5.经阴道超声诊断深部浸润型子宫内膜异位症的临床价值分析 [J], 张梅芳;涂伟娴;王雪峰;吕小霞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
人晶状体上皮细胞内热休克蛋白mRNA的表达(英文)
人晶状体上皮细胞内热休克蛋白mRNA的表达(英文)张雪岩;贾琳琳;刘宏伟【期刊名称】《中国组织工程研究与临床康复》【年(卷),期】2007(11)32【摘要】背景:晶状体独特的解剖的位置使其长期暴露于一种应激的环境中。
所以,晶状体需要持续的保护作用来抵抗微环境诱导的应激,而热休克蛋白则在机体处于应激情况下发挥着自身防御作用。
目的:观察外源性应激条件下晶状体中热休克蛋白mRNA表达的变化。
设计:重复测量,对比观察性实验。
单位:佳木斯大学附属第一医院眼科。
材料:人晶状体上皮细胞系LEC-B3细胞系由中国医科大学附属第一医院的眼科学系提供。
RT-PCR试剂盒购于日本宝生物有限公司。
方法:实验于2003-09/2004-09在中国医科大学卫生部小儿先天畸形实验室完成。
取指数生长的晶状体上皮细胞用于实验,细胞分别在高温(45℃)和氧化(50mmol/LH2O2)条件下培养30min后将细胞于37℃普通培养介质中使其复原,分别暴露0,2,4,6,16和24h。
采用反转录聚合酶链反应检测人晶状体上皮细胞热休克蛋白27、热休克蛋白70的表达。
主要观察指标:人晶状体上皮细胞热休克蛋白27、热休克蛋白70的表达。
结果:生理状态下和应激状态下人晶状体上皮细胞均有热休克蛋白的表达。
热应激和氧化应激后2h热休克蛋白mRNA的水平增加。
但是每种状态下热休克蛋白27和热休克蛋白70的表达到达峰值的时间间隔为2～6h,以后逐渐降低,但是它们全部在16h仍维持较高水平。
结论:应激环境诱导人晶状体上皮细胞中热休克蛋白27mRNA和热休克蛋白70mRNA的过度表达,这可能对晶状体起着重要保护作用。
【总页数】3页(P6494-6496)【关键词】应激;热休克蛋白(HSP);人晶状体上皮细胞【作者】张雪岩;贾琳琳;刘宏伟【作者单位】佳木斯大学附属第一医院眼科;佳木斯大学生理教研室【正文语种】中文【中图分类】R392【相关文献】1.人晶状体上皮细胞内热休克蛋白mRNA的表达 [J], 张雪岩;张劲松;孔玮2.不同损伤条件下热休克蛋白27在人晶状体上皮细胞中的表达 [J], 马立威;张雪岩;许军;张劲松3.高温氧化条件下人晶状体上皮细胞内HSP70mRNA的表达 [J], 刘宏伟;刘远光;张雪岩;关宝生4.风疹病毒感染人胚晶状体上皮细胞对热休克蛋白及其转录因子表达的影响 [J], 邹俊;卢奕;褚仁远5.人晶状体上皮细胞内热休克蛋白mRNA的表达 [J], 张雪岩;贾琳琳;刘宏伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
人体微生物人类的第二基因组
人体微生物：人类第二基因组江海燕钱万强朱庆平《光明日报》（ 2014年01月02日 12 版）人们很少会想到，在我们的身体里，有无数微小的生物时时刻刻与我们同呼吸、共命运。
它们就是存在于人类体表和体腔内的大量微生物群。
人体正常菌群种类约500—1000余种，细菌数量达100万亿个，比人体细胞数量还要多10倍，它们加起来大约有1.5千克重。
除了细菌外，还有大量的病毒、真菌以及一些未知的微生物生活在我们体内。
这样一个数量庞大的微生物群体都是什么？它们和我们的身体究竟有着什么关系？和我们的健康又有什么联系？健康与人体微生物息息相关其实，早在300多年前显微镜发明后不久，科学家已观察到人体内存在微生物。
然而，由于检测、分析技术等的限制，人们无法大规模地获取人体微生物群的构成、功能等详细信息，更无法进一步了解这些数量庞大的微生物群与人体是如何相互作用的。
近些年来，基因测序技术和生物信息学的高速发展，使得科学家能够开始全面、系统地研究人体微生物，包括其基因组、蛋白质组、代谢组以及人体微生物与健康的关系等，也就是人类微生物组研究。
2007年底，美国国立卫生研究院正式启动为期5年的“人类微生物组计划”，共投入经费1.4亿美元。
该计划是继“人类基因组计划”完成之后一项规模更大的D NA测序计划，也被称为“人类第二基因组计划”。
其目标是探索研究人类微生物组的可行性；通过绘制人体不同器官中微生物元基因组图谱（包括细菌、病毒等微生物），解析微生物群结构变化对人类健康的影响；同时为其他科学研究提供信息和技术支持。
我国作为参与者也一直积极推动初期研究工作。
欧盟也有类似的研究项目，例如，作为人类元基因组第七框架项目的子项目，人类肠道宏基因组计划就主要研究人类肠道中的所有微生物群落，进而了解人肠道中细菌的物种分布，最终为后续研究肠道微生物与人的肥胖、肠炎等疾病的关系提供非常重要的理论依据。
三维微环境手性特征调控间充质干细胞线粒体功能
三维微环境手性特征调控间充质干细胞线粒体功能何颖;冯传良;刘进营;郑慧敏;江圣杰【期刊名称】《首都医科大学学报》【年(卷),期】2022(43)3【摘要】目的解析手性微环境介导线粒体功能调控骨髓间充质干细胞成骨分化。
方法体外通过三维手性微环境培养间充质干细胞监测干细胞的线粒体膜电位功能,在体内观察凝胶植入后早期缺损区域关键调控线粒体功能趋化CXCL2因子的表达,体外高通量组学分析相关线粒体与代谢信号通路的差异。
结果免疫荧光染色显示右旋手性基质中线粒体线粒体深红色荧光探针染色比例降低,表明右旋手性基质中的干细胞线粒体膜电位出现损伤。
大鼠颅骨缺损模型发现在早期植入三维手性凝胶后左旋组修复区域的CXCL2明显表达上调。
京都基因和基因组数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析发现线粒体相关基因与多个信号通路发生了明显的差异表达。
差异基因分析发现右旋组中间充质干细胞出现了线粒体降解相关基因的表达上调。
左旋手性基质能上调干细胞线粒体NADH脱氢酶活性,右旋手性基质中间充质干细胞线粒体功能出现明显功能损伤。
结论生物植入材料基质手性具备调控干细胞线粒体功能能力。
【总页数】6页(P440-445)【作者】何颖;冯传良;刘进营;郑慧敏;江圣杰【作者单位】北京大学口腔医院特诊科;上海交通大学材料科学与工程学院;河南大学材料学院特种功能实验室【正文语种】中文【中图分类】Q731【相关文献】1.补肾中药对老化间充质干细胞内外微环境改变及其分化方向调控的影响2.炎症微环境对牙周膜干细胞与脐带间充质干细胞再生功能的影响3.中医药调控缺血缺氧微环境对骨髓间充质干细胞增殖、分化及衰老的影响4.中医药调控缺血缺氧微环境对骨髓间充质干细胞增殖、分化及衰老的影响5.骨髓间充质干细胞来源外泌体对炎症微环境中巨噬细胞表型及软骨细胞的调控作用因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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人类肠病毒71的晶体结构
人类肠道病毒71型是一种引起手足口病的小RNA病毒，会在儿童中引起可能致命的脑肿胀和瘫痪。
据报道，EV71在亚太地区大规模爆发，对公众健康是一种很大的威胁。
我们已经从3.8埃分辨率研究EV71的结构。
有准T = 3的对称性的病毒结构蛋白VP1，VP2，VP3 60份，β夹心“果冻卷”褶皱。
此外，一个小蛋白VP4的60份附于外壳的内表面（图1A）EV71型病毒基因组编码多肽VP1，VP2，VP3，VP4，构成原聚体。
原聚体拼装成具有五聚体样结构的亚单位，60个亚单位连接最终形成病毒的外壳。
VP1，VP2，VP3暴露在病毒外壳的表面，VP4包埋在病毒外壳的内侧与病毒核心紧密连接。
EV的一个普遍特征是在二十面体的五重轴周围有一个洼地叫“canyou”受体，其有一个免疫球样折叠连接到canyou 上。
这导致可稳定病毒粒子的疏水性的“口袋因子”从canyou下面的VP1的口袋里迅速去除。
这种不稳定可能是基因组释放的前奏。
以高亲和力连接在口袋上的抗病毒复合物是潜在的小RNA病毒抑制剂。
EV71电子密度表明口袋因子的存在。
口袋因子被建模成月桂酸。
口袋因子电子密度的高度和周围蛋白残基相当。
小RNA病毒粒子最易变的区域是暴露在病毒粒子表面的环，这也是最重要的中和产生免疫性的位点。
VP1表面的环定位在二十面体五重轴的周围，形成canyou的北边缘（fig1A）。
EV71的canyou比其他EV中的都浅，因为它的VP1环更小（fig1B）。
EV71canyou的开放结构显示它不能为定位在canyou底部的残基提供免疫隔离，因而也不太可能担当受体的结合位点。
因而，已经被认为是EV71受体的分子没有免疫球蛋白样的折叠是很重要的。
在VP2中，最突出的表面环是“puff”，形成canyou的南边缘。
病毒表面最大的突出物是来自VP3的“knob”（fig1A）。
puff和knob区域连接到非免疫球蛋白样受体在一些其他的小RNA病毒中。
Puff中149位Lys被表明和P选择素糖蛋白配基1相互作用。
通过和其他的小RNA病毒类比，（fig1c）EV71中口袋因子的存在显示它调控病毒脱壳过程。
EV71口袋因子有大约40平方埃表面可接近溶剂，而其他EV中的口袋因子完全被埋在溶剂中。
因为EV71口袋因子头部和canyou上面的极性残基相互作用，抗EV71复合物可能需要一个疏水的头部组合，相反，其他小RNA病毒的抑制子完全疏水，并且不和形成canyou floor的残基相互作用。
这个信息使得EV71疗法的药物设计成为可能。
EV71病毒衣壳的结构。
（一）EV71的VP1二十面体的不对称单位显示卡通图（蓝色），VP2，VP3（绿色）（红色），VP4（黄色）钙离子（红色）和口袋因子（橙色）。
其突出的特点是衣壳表面的位置用虚线表示。
（b）EV71和五单位视下二十面体对称五倍轴脊髓灰质炎病毒分子表面。
（C）肠道病毒71口袋因子电子密度（绿色）是由无模型的相位扩展计算（3）。
主要表现为连接链Cα原子线。
侧链显示为“模型。
（d）在肠病毒71型口袋位置的因素（橙色），hrv1a（黄色），牛肠道病毒（绿色），脊髓灰质炎病毒1（红色）。
（C，D）箭头显示的口袋入口
Materials and Methods
材料和方法
病毒生产，结晶和结构测定
my104-9-sar-97 EV71毒株（10）（GenBank登录号：dq341368.1）在横纹肌肉瘤细胞产生。
细胞和病毒上清感染后4天收获。
细胞通过离心分离沉淀在10分钟时贝克曼ja-10转子和溶解的冻结和解冻好几次其次是杜恩斯匀浆。
病毒是通过离心分离沉淀，在45000rpm
在ti50.2转子在4C 2小时。
颗粒病毒悬浮在缓冲液（0.25m HEPES，0.25M NaCl，pH 7.5），
经DNA酶（0.01毫克/毫升）和核糖核酸酶（7.5毫克/毫升）进一步纯化在10-40%酒石酸钾梯度在4C 90min在sw41转子36000rpm。
纯化的病毒颗粒是悬浮在缓冲和病毒的浓度用分光光度计使用7.7毫克吸收系数测量/（毫升×厘米）260nm波长。
使用一个好的溶液含有2.5%悬滴法得到的晶体的EV71（w/w）PEG 800，2.5%（w/w）甘油，600mm 150mm NaCl，CaCl2，100mM Tris pH 8。
通过混合1.5升的井液μ数据收集在缓冲区的10mg／ml病毒液等体积法制备滴，晶体浸泡在含有30%的母亲白酒类1-2分钟（w/w）PEG 400并立即在液氮中冷冻。
数据收集从一个单一的晶体在100K（借用marccd-225探测器通用/ CA猫）在beamline-14-id在先进光子源
EV71病毒结晶的空间群I212121（补充表1）。
马太的系数表明，不对称单位中有2个粒子。
（11）粒子的取向和位置是（ψºφ= 68.8 = 42.8，= 45.9º，κº，x = 0.2501，y = 0.2530，Z = 0.2479）的粒子1和（ψºφ= 87.4 = 24.8，ºκ= 77.4，X = 0.5020，Yº，= 0.4967，Z = 0.5001）的粒子2。
埃可病毒7结构（12）（蛋白质数据银行加入代码2x5i）是用来计算的分辨率低于10Å用CNS程序初始阶段的思考（13）。
通过迭代分辨率3.8Å步骤得到的相位信息（1／C）1遵循Å每次通过三个周期的平均密度（14）。
地图计算的结构振幅的125 2 B因子应用改良Å。
结构使用程序建立（15）进行坐标和温度因子细化用CNS程序。
如果计算，rfree已工作很相似，因为120倍的非晶体学对称性（16）。
基本结构质量指标表 S1上市。
虽然观察到的数据是有效的采样每个倒格点的平均14倍120倍而不完全非晶的冗余结果。
Table S1.
Scaling and refinement statistics
Space group I212121
Unit cell dimensions (Å)
A600.2
B610.6
C851.8 Resolution limits (high resolution bin) (Å)50-3.8 (3.97-3.80) Completeness (%)30.4 (11.5)
R merge*0.24 (0.79) Average redundancy 1.7 (1.1)
<I>/<σI> 2.41 (0.88) Reciprocal space correlation coefficient of F obs and F calc after
convergence of map0.82 (0.47)
R-factor0.279 (0.386) Average B-factor79.2 Ramachandran plot outliers (%) #0.97 Ramachandran plot - most favored regions (%) #87.0
Rotamer outliers (%) #0.85
RMSD - bonds (Å)0.003
RMSD - angles (°)0.93
No. of unique reflections459113
* R merge= ∑h∑j |I hj - <I h>| / ∑∑|I hj|
# according to the criterion of Molprobity。