Bt菌株的分离 - 360文档中心

苏云金芽孢杆菌

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❖ 用苏云金芽孢杆菌防治动物血吸虫病 ❖ 用苏云金芽孢杆菌防治猪蛔虫病 ❖ 用苏云金芽孢杆菌防治绵羊绿铜蝇 ❖ 用苏云金芽孢杆菌防治蚊虫 ❖ 用苏云金芽孢杆菌防治细菌引起的感染性疾病
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苏云金芽孢杆菌在工农业生产中的应用
❖ 用苏云金芽孢杆菌防治酒曲害虫黑菌虫 ❖ 用苏云金芽孢杆菌防治棉铃虫 ❖ 用苏云金芽孢杆菌防治水稻稻纵卷叶螟 ❖ 用苏云金芽孢杆菌防治杨树食叶害虫 ❖ 用苏云金芽孢杆菌防治根结线虫 ❖ 用苏云金芽孢杆菌防治蔬菜害虫 ❖ 用苏云金芽孢杆菌防治春尺蠖
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Bt的发现
1901
日本学者石度繁从患猝倒病的家蚕幼虫中分离到第1个产生晶体的芽孢杆菌。
1911
Berliner从德国苏云金地方一家面粉厂染病的地中海粉螟中分离到一个相似的菌株，并正式定名为苏云金芽孢杆菌（Bt）。
一个叫克林诺的科学家发现，在这种细菌的细胞中可以形成方形或菱形的晶体，可惜这个发现并未被重视。
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❖ 用苏云金芽孢杆菌研制热稳定性禽流感口服疫苗刘梅等(2007)利用苏云金芽孢杆菌具有很强热稳定性及对畜禽无毒性的优点，通过建立苏云金芽孢杆菌细胞表面展示系统，即将AJ基因与S一层蛋白(Surface layer protein)融合后，AI病毒NP蛋白展示到受体菌株表面，从而开发出活菌疫苗。该热稳定性AIV—苏云金芽孢杆菌重组口服疫苗在对小鼠的实验中，表现较强免疫原性。
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苏云金芽孢杆菌
Bacillus thuringiensis

菌种分离法

菌种分离法菌种分离法是一种将混合的微生物菌种分离出来的方法，这种方法可以使用不同的技术和实验室设备。

在微生物学中，分离和纯化微生物菌种是非常重要的，因为只有分离和纯化出的菌种才能进行详细的研究和确定其性质、生命活动及应用价值等。

买提江•买买提教授把菌种分离法分为三类：物理、化学和生物学方法，本文将就这三类方法作一介绍。

（一）物理方法1.离心法离心法是利用离心机将微生物沉淀到离心管的底部，从而将其中的细菌或其他微生物进行分离的方法。

可以根据微生物大小和密度的不同，调整不同的离心机转速，离心时间和离心管容量以将细菌分离出来。

经离心分离后，可以直接在离心管中观察和研究分离后的细菌。

2.筛分法筛分法是利用筛子将微生物按照其大小分离的方法。

这种方法对于细胞大小相对较大的微生物比较实用，比如真菌、酵母等，但对于细胞大小相似的细菌来说，则难以使用。

3.超声波分离法超声波分离法是通过将微生物暴露在高频率的超声波中，使其发生震动、振荡等变化，从而使不同微生物在密度、大小等方面有所不同，通过利用不同的物理性质来分离细菌。

（二）化学方法1.差凝聚法差凝聚法是利用介于酸和碱之间的缓冲液制备好不同浓度和PH值的悬浮液，使细菌在这样的介质中发生电性上的区别，进而可以形成不同尺寸的胶体，即细菌能被分离出来。

2.离子交换法离子交换法是利用离子交换树脂将微生物从混合液中分离出来。

这种方法可以通过离子交换树脂的性质，使不同的离子通过分离液阶跃的过程中被分离出。

当细菌与树脂结合时，其大小、形状、电荷等因素会改变，从而使细菌得到了分离。

单菌分离法是通过微生物最小生长单位，比如说说细菌营养琼脂或含有特定抗生素的平板进行细胞的分离和纯化。

通过在细菌营养琼脂或含有特定抗生素的平板上进行制备，使不同的菌型在不同的营养环境中表现出不同的特征。

由此可以通过不同特征的形态、生理、代谢等特点来分离出不同的细菌群体。

2.厌氧培养法细菌有些可以生长，有些不能生长，其中许多细菌性质分别是厌氧和兼性厌氧。

分离菌种的实验步骤及过程

分离菌种的实验步骤及过程嘿，朋友们！今天咱来聊聊分离菌种的那些事儿。

这可真是个有趣又有点儿神秘的过程呢！首先，你得准备好各种家伙什儿，就像战士上战场得有称手的兵器一样。

什么无菌操作台啦，培养基啦，接种环啦，都得备齐咯。

然后，咱就开始采集菌种样本啦。

这就好比是去寻找宝藏的线索，你得找对地方，小心翼翼地把那带着菌种的宝贝给弄到手。

比如说从土壤里啦，或者从一些特殊的环境里找到它们。

拿到样本后，可不能直接就往上怼啊！得给它们来个精细的处理。

把样本放在合适的溶液里，让那些菌种能乖乖地跑出来。

这就像是把藏在沙子里的金子给淘出来一样。

接下来就是关键的接种环节啦！在无菌操作台上，用接种环轻轻地蘸取一点处理后的样本，然后像画画一样在培养基上轻轻一抹。

嘿，这一下可就有讲究了，不能太重也不能太轻，得恰到好处。

就好像是在给蛋糕裱花，得有那手艺才行。

接种完了，就把培养皿放进合适的环境里培养。

这就像是给小菌种们安了个家，让它们能舒舒服服地长大。

在培养的过程中，你可得时刻关注着它们的变化。

看着那些小小的菌落一点点长出来，就像看着自己种的花儿慢慢开放一样，心里那叫一个美呀！有时候你会发现，哇，怎么会长出这么奇怪的形状啊！哈哈，这就是菌种的奇妙之处。

等菌落长到合适大小了，咱就得把它们挑出来，单独培养。

这可不容易哦，得像个细心的妈妈照顾小宝宝一样，轻手轻脚的。

要是不小心弄伤了它们，那可就前功尽弃啦！整个过程中，你得有足够的耐心和细心，就像对待珍贵的宝贝一样。

要是马虎大意了，那可就没法分离出纯纯的菌种咯！朋友们，分离菌种是不是很有意思呀？这就像是一场小小的探险，每一步都充满了惊喜和挑战。

虽然有时候会遇到困难，但当你看到自己成功分离出的菌种时，那种成就感简直无法用言语来形容！所以呀，大胆去尝试吧，去感受这个神奇的过程，说不定你会发现一个全新的微生物世界呢！。

菌种分离4种常用方法介绍

菌种分离4种常用方法介绍1、纯种分离从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。

在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“纯洁”，防止其他微生物的混入。

纯种分离的目的是将目的菌从混杂的微生物中分离出来，获得纯培养如果样品没有经增殖培养而直接进行分离，那么要得到具有某一特性的纯种，就更该细致、谨慎的操作。

2、纯种分离的常用方法有4种：倾注平板分离法、涂布平板分离法、平板划线分离法和组织分离法。

（1）倾注平板分离法：培养后，在培养基内部及表面形成单菌落。

倾注平板法:将无自生理盐水稀释后的样品加入无茵培养基混合均匀。

待凝固后倒置培养，内部及表面形成单自落。

（2）涂布平板分离法：培养后，在培养基表面形成单菌落。

因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。

用途：一般多用于菌种的纯化；优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离；缺点：不能计数；控制每个平板中微生物的菌落数在一定的范围可获得理想的分离效果，对于细菌和酵母，以每平板10~200菌落为佳，对于丝状菌，则应控制每平板菌落数30~50或更少。

如果分离菌丝呈蔓延性生长的丝状菌如根霉、毛霉等，则可以在培养基中添加0.1%左右的去氧胆酸钠（去氧胆酸钠在低PH下灭菌过程中易形成絮状沉淀，可以通过分别灭菌、倾注平板前混合的方法避免）或山梨糖（在察氏培养基中加山梨糖0.1%，蔗糖0.01%），这样可防止菌丝蔓延，便于挑取。

3、平板划线分离法：能达到纯种分离的目的。

经培养后会得到呈分散状态的单菌落纯培养。

最简单的分离微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。

苏云金芽孢杆菌生物杀虫剂概述

苏云金芽孢杆菌生物杀虫剂概述[摘要]苏云金杆菌是一种在自然界中广泛分布的好气芽孢杆菌，它能产生特异性的杀虫结晶蛋白, 对鳞翅目、双翅目、鞘翅目、膜翅目、螨类和线虫等许多有害的昆虫有毒杀作用。

[关键词]苏云金芽孢杆菌历史杀虫机理苏云金杆菌(Bacillus.thuringiensis.简称Bt)从自然界分离出来的昆虫病原细菌，革兰氏染色阳性，在芽孢形成期间能产生伴胞晶体。

它是一类发展时间最早的生物杀虫剂，在害虫的综合防治中已经成为一种占主导地位的生物农药。

自商品化以来，Bt 产品就以其高效安全、对目标害虫的特异性、生物降解无残毒等优点而倍受亲睐，并逐渐成为研究最深入、应用最广泛的生物杀虫剂。

然而Bt 目前仍然不能完全替代化学农药，因为它在具有绿色、环保等优势的同时也具有一些重大缺陷，主要是产品的稳定性较差、残效期短、杀虫速度慢等，另外货架寿命短也是限制其发展的重要因素。

为此人们不断地对它进行改造。

一、苏云金芽孢杆菌的研究历史1901年，日本学者石渡繁胤(S.Ishiwata)从虫尸体液中分离出一所谓的猝倒细菌(Sott bacteria)。

按现在的分类系统，该菌就是现在苏云金杆菌猝倒变种(Bacillus.thuringiensis var.sott)。

石渡繁胤的发现，成为苏云金杆菌研究的起点[6]。

1911年，Berliner分离出一种杆菌，他详细描述了该菌的形态和培养特征，并定名为苏云金杆菌(Bacillus.thuringiensis)。

他指明苏云金杆菌含伴孢晶体(Paraspora crystl)，但不曾说明伴孢晶体有杀虫的作用。

Berliner所定名的苏云金杆菌按现在的分类系统，应该是苏云金杆菌苏云金变种(Bacillus thuringiensis var. thuringiensis)。

1938年，第一个苏云金杆菌商品制剂Sporeine，在法国问世，并用于防治地中海粉螟。

1953年，Hannay第一次发现苏云金杆菌的杀虫活性与伴孢晶体有关。

生产中常用菌种的分离、选育和保藏

生产中常用菌种的分离、选育和保藏在生产中，分离、选育和保藏常用菌种是非常重要的步骤，这些菌种可以用于各种不同的应用，如发酵过程中的生物转化、抗生素的生产以及食品工业中的乳酸发酵等。

以下是常用菌种的分离、选育和保藏的基本步骤：1. 分离：分离菌种是指从自然环境中分离出纯种菌株的过程。

首先，需要选择合适的样品来源，如土壤、水样或食品样品等。

然后，将样品进行稀释、接种到固体培养基上，培养出菌落。

最后，从菌落中挑选单一菌株，并进行纯化培养，得到纯种菌株。

2. 选育：选育是指对已有菌种进行进一步培养和筛选，选出优良品系。

在选育过程中，可以根据所需特性进行筛选，如产量高、抗性强或代谢产物优良等。

通过连续传代培养和筛选，可以逐步培育出符合要求的优良品系。

3. 保藏：保藏是为了长期储存和保存已经分离和选育得到的菌种。

常用的保藏方法包括冷冻保存和冷冻干燥等。

冷冻保存是将菌种保存在低温 (-80℃或液氮温度下)，可以长期保存并保持菌株的生物学性状。

而冷冻干燥则是在低温下将菌种先冷冻，然后通过真空蒸发使其脱水，最后用密封容器保存。

冷冻干燥具有长期保存时间和较小的储存体积的优点。

在菌种的分离、选育和保藏过程中，需要注意的是严格遵守无菌操作规范，以防止杂菌污染。

另外，应该建立相应的菌种信息管理系统，记录并标注每个菌株的来源、特性以及保藏条件等重要信息，以便日后使用和查询。

菌种的分离、选育和保藏在生产中扮演着极其重要的角色。

下面将进一步探讨这些过程，并介绍一些常用的菌种及其应用领域。

在分离菌种的过程中，重要的是选择适当的样品来源。

不同的环境中存在着各种微生物，如土壤、水体、植物、动物及其制品等。

通过采集不同来源的样品，可以获得不同类型和特性的微生物，从而得到多样性的菌株资源。

在接种前，样品经过稀释，使微生物适当分散。

然后将稀释液均匀接种于固体培养基上，并进行孵育。

在培养过程中，微生物通过分裂繁殖形成菌落，而每个菌落代表一个菌株。

菌种分离纯化的方法

菌种分离纯化的方法以菌种分离纯化的方法为标题，本文将介绍菌种分离纯化的方法及其步骤。

菌种分离纯化是微生物学研究中常用的一种技术手段，通过分离和纯化菌株，可以获得单一的菌种用于后续的研究和应用。

一、菌种分离的基本原理菌种分离的基本原理是将混合的微生物菌群分离成单一的菌株。

菌种分离的方法有很多种，常用的有单菌落分离法、稀释涂布法、稀释液滴法等。

这些方法都是基于微生物菌株的生长特性和培养条件的不同，通过合理设计实验步骤和培养基，使目标菌株能够单独生长并形成可见的菌落。

二、菌种分离纯化的步骤1. 样品采集：首先需要从环境中采集到含有目标菌株的样品。

样品可以是土壤、水样、食品、动植物组织等，根据研究目的和样品特点选择合适的采集方法。

2. 制备培养基：根据目标菌株的特性和需求，选择合适的培养基配方，并进行消毒和制备。

培养基的选择应考虑到菌株的营养需求、生长条件和特殊要求。

3. 稀释涂布法：取少量样品加入到培养基中，经过适当的稀释后，用移液管或铁环在培养基表面均匀涂布，使菌落能够单独生长。

4. 单菌落分离法：根据菌落的形态、颜色和大小等特征，选择单一的菌落转移到新的培养基上。

可以使用鉴别培养基或显微镜观察菌落的特征，以确保分离的菌株纯度。

5. 重复分离：为了确保分离得到的菌株的纯度，可以进行多次的分离操作。

将单一菌落进行二次分离或多次传代培养，直到得到纯种的菌株。

6. 菌种保存：分离纯化后的菌种可以进行保存，常用的保存方法有冷冻保存和冷冻干燥保存。

冷冻保存需要将菌种在液氮中冷冻保存，冷冻干燥保存则是将菌种在低温下干燥保存。

三、菌种分离纯化的注意事项1. 采集样品时要注意卫生和无菌操作，避免外源菌的污染。

2. 制备培养基时要严格按照配方和操作规程进行，确保培养基的质量和无菌性。

3. 分离过程要注意避免交叉污染，使用无菌操作和无菌工具。

4. 分离后的菌株要进行鉴定和鉴别，确保其为目标菌株。

5. 分离纯化后的菌株要进行保存，以备后续使用。

分离菌种的方法范文

分离菌种的方法范文分离菌种是微生物学中的一个重要实验技术，通过该技术可以将混合菌群中的不同菌种分开，单独培养和研究。

本文将介绍几种常用的分离菌种的方法。

1. 稀释平板法（Dilution plate method）稀释平板法是最常用的分离菌种的方法之一、首先将混合菌液用无菌生理盐水或培养基稀释到一定浓度，然后将其均匀涂布在含有固体培养基的平板上，培养一段时间，单个菌落可以形成单菌种的菌落。

然后将单菌种的菌落分离种植到新的培养基上。

2. 悬液均匀法（Spread plate method）悬液均匀法也是一种常用的分离菌种的方法。

首先将混合菌液用无菌生理盐水或培养基进行稀释，然后将其均匀涂布在含有固体培养基的平板上，通过新颖的方案将单个菌种的菌落分离种植到新的培养基上。

3. 筛网过滤法（Mesh filtration method）筛网过滤法适用于一些难以通过稀释平板法和悬液均匀法分离的微生物，如真菌和放线菌等。

该方法使用特制的网状滤膜过滤混合菌液，将微生物困集在滤膜上形成菌落，然后将菌落分离种植到新的培养基上。

4. 琼脂半固体培养法（Semi-solid agar medium method）琼脂半固体培养法适用于一些具有较长延伸子菌丝或芽孢状细胞的微生物，如放线菌等。

该方法在培养基中加入适量的琼脂，并均匀混合，然后将混合菌液转移到琼脂半固体培养基上，等菌落生长后，可通过菌落根部的单菌种分离种植到新的培养基上。

5. 微滴法（Micropipette method）微滴法是一种高效的分离菌种的方法。

该方法使用微量移液器将混合菌液分别吸取并滴入含有固体培养基的小孔板中，每个孔中仅有一个细胞。

随后，孔中细胞生长形成单菌种的菌落，然后将菌落分离种植到新的培养基上。

分离菌种方法的选择取决于待分离菌种的特点和实验目的。

这些方法可以大大提高单个菌种的纯度和分离效率，有助于后续的菌种鉴定和研究。

菌种分离筛选的5个步骤

菌种分离筛选的5个步骤一、样品采集与处理菌种分离筛选的第一个步骤是样品采集与处理。

在进行菌种分离之前，我们需要选择合适的样品进行采集。

样品可以来自不同的环境，如土壤、水体、动植物等。

采集样品时，我们需要注意卫生和安全，避免污染和交叉感染。

采集后，样品需要进行处理，包括样品的细碎、过滤、稀释等步骤，以便于后续的菌种分离工作。

二、菌种分离菌种分离是菌种分离筛选的核心步骤。

在这一步骤中，我们需要将样品中的微生物菌种分离出来，并培养成单菌种。

常用的分离方法有稀释平板法、涂布平板法、过滤法等。

分离时，需要选择适当的培养基和培养条件，以促进菌种的生长和繁殖。

分离出的单菌种需要进行纯化，以确保其纯度和纯种性。

三、菌种鉴定菌种鉴定是确定分离出的菌种种属和种类的步骤。

鉴定菌种的方法有形态学观察、生理生化特性测定、分子生物学方法等。

通过对菌种的形态、生长特征、代谢产物等进行观察和分析，可以初步确定其分类地位。

而通过分子生物学方法，如16S rRNA基因序列分析，可以更准确地确定菌种的种属和种类。

四、菌种筛选菌种筛选是根据特定需求从众多菌种中选择出具有特殊功能或性质的菌株的步骤。

筛选的目标可以是抗菌活性、产酶能力、产生生物活性物质等。

常用的筛选方法有抗菌活性筛选、产酶能力筛选、生物活性物质筛选等。

在进行筛选时，需要设置合适的筛选条件和指标，并利用适当的方法进行评价和选择。

五、菌种保存与应用菌种保存与应用是菌种分离筛选的最后步骤。

在菌种分离筛选过程中，我们通常会得到很多有潜力的菌株。

为了保证这些菌株的长期保存和应用，我们需要采取相应的保存措施，如冷冻保存、冻干保存、液氮保存等。

同时，我们还可以将这些菌株应用于不同的领域，如农业、医药、环境等。

通过进一步的研究和开发，这些菌株可以发挥出更大的应用价值。

通过以上五个步骤，我们可以从自然环境中分离出具有特殊功能或性质的菌株，并进行进一步的研究和应用。

菌种分离筛选是微生物学研究中的重要工作，对于发现新的生物资源和开发新的生物产业具有重要意义。

菌株纯化分离方法

菌株纯化分离方法
菌株纯化分离方法
菌株纯化分离是微生物学、生物技术研究中非常重要的一环。

菌株纯化分离的目的是为了从混合菌群中分离单一纯种菌株，以供后续研究和利用。

下面介绍几种常用的菌株纯化分离方法。

1. 筛选法
筛选法是将混合菌落在含有特定抗生素的培养基上培养，只有对该抗生素产生抗性的菌株才能生长。

这种方法主要适用于筛选抗菌素产生菌株。

2. 稀释涂布法
稀释涂布法是将混合菌落进行逐级的稀释，然后取少量的液体或固体培养基涂布于培养皿上。

经过适当的时间，单一的菌落就会生长并形成纯种菌株。

3. 拉撒氏法
拉撒氏法是将混合菌落均匀涂布于地衣菌素或重金属盐等物质环境下的培养基上。

这种方法能够筛选出对这些环境有耐受性的菌株，从而得到新的菌种。

4. 磁珠分离法
磁珠分离法是利用磁珠表面的特殊功能基于化学互相作用来纯化分离单一菌株。

即特定的抗体或检测物（蛋白质、核酸等）偶联到磁珠表
面上，与需要分离的靶分子结合后用磁铁快速从混合液中分离出目标物，从而获得单一的纯种菌株。

总之，以上介绍的方法虽然各具特点，适合的范围也不同，但都有助于菌株纯化分离。

在实际操作中，根据不同的研究需求选择合适的方法，才能获得理想的效果。

鲜水中Bt菌株的分离及其生物学特性分析

ｒｊａｒｕｕｅａｄＦｒｓｒｎｖｒｉ，Ｆｚｏ，￣ｊａ５０２ｈｎｕｉＡｇｉｈｒｎｏｅｔＵｉｓｙｕｈｕｎｃｙｅｔｉ３００，Ｃｉａｎ
ＡｂｔａｔＦｖａｉｕｔｕｉｇｅｓｓｓｌｔｓｗｒｅｏｅｅｒｍ０ｓｍｐｅｆｆｅｈｗｔｒｃｌｃｅｒｍｓｒｃｉｅＢｌｓｈｒｎｉｎｉｏａｅｅｅｒｃｖｒｄｆｏ３ａｌｓｏｒｓａｅｏｌｔｄｆｏＷｕｉｃｌｉｅｙＭｏｎａｎａｄｈＦｒｓａｋｏｕｈｕｏｌａｎｍｏｅａｏｔｔｅｃａａｔｒｔｓｏｈｓｎｖｌｉｏａｅ，ｐａｅｕｔｉｎｔｅｏｅｔＰｒｆＦｚｏ．Ｔｅｒｒｂｕｈｈｒｃｅｉｉｆｔｅｅｏｅｓｌｔｓｈｓ－ｓｃ
福建农林大学教育部生物农药与化学生物学重点实验室．福建福州３００５０２
摘要以武夷山和福州森林公园采集获得的３０份新鲜水样为材料．分离获得５株苏云金杆菌（ａｉｕＢｃｌｌｓ
ＺＨＡＮＧＬｎｌｇＨＥｅｓｅｇＨＥＮＪａｍｉ，ＨＵＡＮＧｉｎｅ，Ｇｉｇｉ，ＣＮＷｉｈｎ，ＳｎｉｎｎＴａｐｉＵＡＮｏｇＸｉｎ
ＫｙＬｂｒｏｉｅｔｉｎｈｍｃｌｉｏｙＭｉｓｄｃｉ，ｅａｏｔｙｏＢｐｓｅｅａｄＣｅｉｏｇ，ｎｔｏＥｕａｎａｒｆｏｉｄａＢｌｉｒｆｙｔｏ

海南滨海椰林Bt菌株的筛选与鉴定

ｐｏｎｎ．ｃｙ，ｃｌｎｒ２ｔｐｅｅｒｏｎｎｔｅｅｉｏａｅｙＰＲ－Ｌｔｏ，ｂｔｔｅｃｙｇｎ－ｒｍｉｅｔｒｌｒｌａｄｃｙｙｅｇｎｓｗｅｅｆｕｄｉｈｓｓｌｔｓｂＣＲＦＰｍｅｈｄｕｈｒｅｅｙ
ｔｐｓｆｔｒｅｓｌｔｓｙｅｏｈｅｉｏａｅＢＨ１．Ｂ１．ａ（０Ｈ７ｎ１ＢＨ２ｗｒｎｔｎｗｎ１ｅｅｏｋｏ．Ｓ — ＡＧＥｅｕｔｈｗｅｔａｔｅ０ｉＤＳＰｒｓｌｓｏｄｈｔｈ１ｗｌｓｄｉｏａｅｏｌｘｒｓｙｐｏｅｎｉ１０ｋｌｃｌｒｍａｓｎｓｌｔｓｃｕｄｅｐｅｓｂｔ１０ｋｎ０ｓｌｔｓｃｕｄｅｐｅｓＣｒｒｔｉｓｗｔ：Ｄｍｏｅｕａｓ．ａｄ２ｉａｅｏｌｘｒｓｏｈ３Ｄａｄ６ｈ３ｏｋｐｏｅｎＤｒｔｉ．Ｂｉａｓｙｒｓｈｆ１ｓｌｔｓｉｄｃｔｄｔａｉｆｔｅｗｅｅｔｘｃｔｏｔｐｏｇｓｉａｏｓａｅｕｓｏ０ｉｏａｅｎｉａｅｈｔｓｏｈｍｒｏｉｏＢｒｎｉａｌｎｉｓｎ．ｘｓ
热带作物学报２１，３（１：１９２３０１２１）２２ — １２
ＣｈｎｓｏｒａｆＴｏｉａｒｐｉｅｅＪｕｎｌｏｒｐｃｌＣｏｓ
海南滨海椰林Ｂ菌株的筛选与鉴定ｔ

菌株分离——精选推荐

菌株分离（separation）就是将一个混杂着各种微生物的样品通过分离技术区分开，并按照实际要求和菌株的特性采取迅速、准确、有效的方法对他们进行分离、筛选，进而得到所需微生物的过程。

菌株分离、筛选（screening）虽为两个环节，但却不能绝然分开，因为分离中的一些措施本身就具有筛选作用。

工业微生物产生菌的筛选一般包括两大部分：一是从自然界分离所需要的菌株，二是把分离到的野生型菌株进一步纯化并进行代谢产物鉴别。

在实验工作中，为使筛选达到事半功倍的效果，总的说来可从以下几个途径进行收集和筛选：（1）向菌种保藏机构索取有关的菌株，从中筛选所需菌株。

（2）由自然界采集样品，如土壤、水、动植物体等，从中进行分离筛选。

（3）从一些发酵制品中分离目的菌株，如从酱油中分离蛋白酶产生菌，从酒醪中分离淀粉酶或糖化酶的产生菌等。

该类发酵制品经过长期的自然选择，具有悠久的历史，从这些传统产品中容易筛选到理想的菌株。

菌株的分离和筛选一般可分为采样、富集、分离、产物鉴别几个步骤。

第一节含微生物样品的采集自然界含菌样品极其丰富，土壤、水、空气、枯枝烂叶、植物病株、烂水果等都含有众多微生物，种类数量十分可观。

但总体来讲土壤样品的含菌量最多。

一、从土壤中采样土壤由于具备了微生物所需的营养、空气和水分，是微生物最集中的地方。

从土壤中几乎可以分离到任何所需的菌株，空气、水中的微生物也都来源于土壤，所以土壤样品往往是首选的采集目标。

一般情况下，土壤中含细菌数量最多，且每克土壤的含菌量大体有如下的递减规律：细菌（108）>放线菌（107）>霉菌（1 06）>酵母菌（105）>藻类（104）>原生动物（103），其中放线菌和霉菌指其孢子数。

但各种微生物由于生理特性不同，在土壤中的分布也随着地理条件、养分、水分、土质、季节而有很大的变化。

因此，在分离菌株前要根据分离筛选的目的，到相应的环境和地区去采集样品。

菌种分离的方法

菌种分离的方法
菌种分离可是个超级有趣又超级重要的事儿呢！就好像在一个大大的微生物世界里寻宝一样。

你知道吗，我们可以从自然界的各种地方找到菌种，比如土壤啊，水啊，甚至是空气里呢！这就像是在一个巨大的宝藏库中寻找那些珍贵的宝贝。

有一种方法是平板划线分离法。

哇塞，这就像是在一张洁白的画布上用画笔勾勒出独特的图案！我们把含有菌种的样本在平板上划线，通过一次次的操作，就能把不同的菌种逐渐分开，最后得到单个的菌落，就好像是把一颗颗璀璨的星星从浩瀚的宇宙中摘出来一样。

还有稀释涂布平板法呢！这就好像是把颜料均匀地涂抹在画板上，通过稀释样本，然后涂布在平板上，让那些小小的菌种在合适的环境中生长出来。

还有组织分离法哦！就好比从一个大蛋糕上切下一小块，从生物体的组织中分离出菌种。

另外，我们还可以利用选择培养基来分离特定的菌种。

这就像是为那些我们想要的菌种专门打造了一个舒适的家，让它们开开心心地住进去，而其他的菌种就只能望而却步啦！
菌种分离的过程充满了惊喜和挑战，每一次的尝试都可能带来意想不到的收获。

这不就像是一场刺激的冒险吗？我们不知道下一刻会发现什么样的神奇菌种，就如同在未知的森林中探索，可能随时会遇到令人惊叹的美景。

总之，菌种分离的方法多种多样，每一种都有着独特的魅力和作用。

我们可以根据不同的需求和情况选择合适的方法，就像选择不同的工具去开启不同的宝藏箱子一样。

让我们尽情地在这个微生物的世界里遨游，去发现那些神奇的菌种吧！。

菌株分离纯化的方法

菌株分离纯化的方法
嘿，你问菌株分离纯化的方法啊？这菌株分离纯化呢，就像是在一群小伙伴里找出最特别的那一个。

一种方法是平板划线法。

这就像在一块大蛋糕上用刀切出不同的小块。

先把含有各种菌株的混合物涂在平板上，然后用接种环在平板上划来划去。

每次划的时候，就会把一些菌株分开。

经过几次划线，就能在平板上长出一个个单独的菌落，这些菌落就是不同的菌株啦。

就好像一群小朋友在操场上玩，你用绳子把他们分成一个个小圈子，每个圈子里就是一个单独的小朋友。

还有稀释涂布法。

这就像把一大杯果汁倒在很多个小杯子里。

把含有菌株的混合物进行稀释，然后取一点稀释后的液体涂在平板上。

这样每个平板上的菌株就很少，经过培养，也能长出单独的菌落。

就像你把很多糖果撒在地上，然后一个一个地捡起来，每个糖果就是一个单独的菌株。

另外呢，还有单细胞分离法。

这就更厉害了，直接找出一个单独的细胞。

可以用显微镜观察，然后用微吸管把一个细胞吸出来。

这就像在一堆沙子里找出一颗特别的小石子。

举个例子哈，我有个朋友是学生物的。

他们要做一个实验，需要分离纯化一种特殊的菌株。

他们先用平板划线法，在平板上划了好几次，终于看到了一些单独的菌落。

但是还不确定是不是他们要的菌株。

然后他们又用稀释涂布法，在更多的平板上进行培养。

最后，他们用显微镜观察，找到了那个他们要的菌株。

他们可高兴了，说这就像找到了宝藏一样。

总之呢，菌株分离纯化的方法有平板划线法、稀释涂布法、单细胞分离法等等。

这些方法能帮助我们找到我们想要的菌株。

对小菜蛾高毒力Bt菌株的分离、鉴定及菌剂研发

对小菜蛾高毒力Bt菌株的分离、鉴定及菌剂研发苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)是目前世界上用途最广、产量最大的微生物杀虫剂,在世界范围内得到广泛的应用。

同时其编码Bt杀虫毒蛋白基因也作为主要的杀虫基因转入到多种作物中,在害虫防治中成效显著。

室内汰选实验表明大多害虫都具备对Bt制剂及毒蛋白产生抗性的潜能,随着Bt制剂和转Bt基因作物的广泛种植,使得害虫长期处于Bt毒素的选择压力下,目前在田间已经发现对Bt产生抗性的小菜蛾(Plutella xylostella)种群。

为得到对抗Bt小菜蛾具有毒杀活性的Bt菌株,明确小菜蛾对Bt产生抗性的机制。

本文设计对小菜蛾进行室内抗Bt汰选并进行相关研究,借助敏感和抗性小菜蛾进行高活性Bt菌株的分离筛选,同时对分离菌株的生物学特性、cry基因种类及菌剂的制作开展研究。

结果如下：(1)2009-2010连续两年,对黑龙江地区小菜蛾种群消长动态进行了调查,并对11种杀虫剂的毒力进行了比较分析。

结果表明：受日最低气温的影响,2010年田间小菜蛾比2009年晚出现十天,但总体趋势一致,均从5月初田间始见小菜蛾成虫,6、7月份出现高峰,到8月末便逐渐消失。

杀虫剂对小菜蛾幼虫的杀毒力测定结果表明：氟虫腈对小菜蛾幼虫的毒力最高,其LC50为0.58mg/L; Bt粉剂的毒杀活性良好,虽然略有抗性,但抗性水平极低；另外,小菜蛾对Bt粉剂的耐药性最差,对Bt粉剂最不容易产生抗药性。

(2)在室内分别利用Bt粉剂和Cry1Ac毒蛋白汰选小菜蛾,最后得到两个Bt 及毒素的高抗种群,其中上海抗性种群(SH-R)对Bt粉剂的抗性达到844.9倍,而深圳抗性(SZ-R)种群对Cry1Ac毒蛋白的抗性高于1500倍。

(3)利用AFLP技术对小菜蛾抗性与敏感种群对Bt毒素抗药性差异进行研究。

从65对AFLP引物组合中筛选到12对在抗敏小菜蛾间表现多态性的引物组合,共扩增出35条特异表达条带。

bt杀虫晶体蛋白提取流程

bt杀虫晶体蛋白提取流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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分离微生物菌种的具体过程

分离微生物菌种的具体过程嘿，咱今儿就来说说分离微生物菌种的具体过程，这可有意思啦！你想啊，那微生物世界就像一个神秘的大宝藏，咱要把里面的宝贝菌种一个一个给揪出来。

首先呢，咱得准备好合适的材料，就像大厨要准备新鲜食材一样。

比如说各种培养基呀，这可是微生物的美食呢！然后，咱就得去采集样本啦，就像去野外寻宝一样。

可以从土壤里挖一挖，从水里捞一捞，或者从那些你想不到的角落里找一找。

这时候你就得有双敏锐的眼睛，说不定宝贝菌种就在那里偷偷藏着呢！采集回来后，就得把样本接种到培养基上啦。

这就好比给微生物们安排了一个个小房间，让它们能舒舒服服地住下。

然后把它们放在合适的环境里，温度呀、湿度呀都得刚刚好，就像给小宝贝们创造一个温馨的家。

接下来可就是等待啦，等啊等，就像等着小鸡孵出来一样。

慢慢地，你就能看到那些微生物开始生长啦，有的像小点点，有的像小绒毛，各种各样，可神奇啦！等它们长到一定时候，咱就得进行分离纯化啦。

这可有点像挑珍珠呢，要把那些纯纯的、好好的菌种挑出来。

可以用一些巧妙的方法，比如划线呀、稀释呀，把它们一个一个分开。

哎呀，你说这过程是不是很有趣？就像玩一个超级大的拼图游戏，一块一块地把那些微生物菌种给拼出来。

而且每一步都得小心翼翼，就像呵护小婴儿一样。

你想想，要是能成功分离出一个新的微生物菌种，那得多有成就感呀！就好像发现了一个新的宝藏，那种喜悦简直没法形容。

所以呀，分离微生物菌种可不仅仅是一项科学实验，更是一次奇妙的探索之旅呢！咱得有耐心，有细心，还要有满满的好奇心，才能在这个神秘的微生物世界里找到属于我们的宝贝菌种。

你说是不是呀？别小瞧了这小小的微生物，它们的世界可大着呢，等着我们去探索，去发现！咱就好好享受这个过程，说不定还会有意外的惊喜呢！。

某Bt菌株的最适分离条件探究

某Bt菌株最适分离条件的探究一、实验目的及意义：苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis，Bt）为革兰氏阳性土壤杆菌，属于芽孢杆菌属，其菌体为短杆状，生鞭毛，单生或形成短链。

它在芽孢形成过程中产生称为δ-内毒素的杀虫伴胞晶体蛋白(控制合成这种蛋白质的基因在质粒上），这些蛋白具有很高的杀虫活性。

在过去的几十年里，Bt的杀虫晶体蛋白已被广泛的应用于农业生产领域，如制备农药、生产转基因作物等。

作为转基因作物外源抗虫基因的供体，必须不停地寻找新的抗病基因，以应对由于害虫抗性产生而导致的抗性退化。

寻找新的抗病基因的其中一种途径，就是寻找新的菌株，并从中发掘新的基因。

二、地点年限：地点：年限：2011年3月—2011年9月三、处理方案：苏云金芽孢杆菌的分离主要受温度、pH值、抗生素浓度这三种因素的影响。

苏云金芽孢杆菌的芽孢形成过程中，会产生大量DPA-Ca鳌合物，使得芽孢中的生物大分子形成耐热凝胶，在80℃下热处理20 min，苏云金芽孢杆菌芽孢也不会死亡。

而且休眠的芽孢在75℃的亚致死温度下处理15 min，活化效果最好，不但可促其快速萌发，还可提高芽孢的成活率。

因此，培养温度可设计三个水平：70℃、75℃、80℃。

苏云金芽孢杆菌芽孢的萌发，直接受pH值影响：当pH值为7.0时，芽孢萌发率在85％以上；当pH值低于6.5或高于8.5时，芽孢萌发率极低。

于是，pH值的设定可以为6.5、7.0、7.5三个水平。

在分离苏云金芽孢杆菌的过程中所需要的抗生素主要有氨苄青霉素及硫酸庆大霉素，但二者的浓度相同，故可以统称为抗生素，水平设置为0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml。

四、实验设计：本实验有三个因素，三个水平，不考察因素间的交互作用，故采用L9（34）设计实验。

L9（33）正交表设计：处理组合号列号指标1 2 3 重复重复重复平均值1 1 1 12 1 2 23 1 3 34 2 1 25 2 2 36 2 3 17 3 1 38 3 2 19 3 2 1五、分析测定项目：对于不同的培养条件，该实验的测定值会有所不同。