激光共聚焦显微镜的样本

1、开机和关机需要管理员来操作 2、换样本的时候需要将物镜降下来， 或点击软件上Escape 3、能用普通荧光显微镜观察拍照的样 本就不要用共聚焦显微镜，节约激光器 寿命。
上转换共聚焦扫描显微镜
OLYMPUS FV1200 放置地点：401-1111 管理员：吴艳 普通共聚焦：400元/小时 上转换共聚焦：1000元/小时
分辨率低，速度快，噪音高
转盘式扫描共聚焦显微镜
性能介于上述两者之间
激光共聚焦扫描显微镜
OLYMPUS FV1200 研究级倒置荧光显微镜 参加过仪器使用培训，通过网上仪 器知识考试，网上提前预约，管理 员审核通过方可使用。

注意事项：
放置地点：401-1312室 管理员：吴安庆老师 收费：200元/小时
（LaserscanningConfocalMicroscopy，LSCM ）
以激光作为光源，采用光源针孔与检测针 孔共轭聚焦技术，对样本进行断层扫描，以 获得高分辨率光学切片的荧光显微镜系统
共聚焦显微镜的类型
点（慢）扫描共聚焦显微镜
分辨率高，图像清晰，采集图像速度慢
线（狭缝）扫描共聚焦显微镜
仪器型号： OLYMPUS IX73 研究级倒置荧光显微镜
显微镜参数
1．主机功能：系统具有明场、相差、微分干涉、荧光观察功能； 2．透射光光源：外置电源供应器100W卤素灯透射光照明装置； 3．物镜：长工作距离万能平场半复消色差相差（荧光）物镜：4×（
数值孔径N.A.≥0.13）、10×（N.A.≥0.3），20×（N.A.≥0.7）、40×（ N.A.≥0.6），60X×（N.A.≥0.7） 4．物镜转盘：6孔以上编码型物镜转盘,与软件连接后能够保存物镜信 息，随物镜转换能够自动校准标尺； 5．载物台：精确定位功能手动载物台；具备XY锁定和复位功能, 可重 现标本位置，游标尺的精度≤100μm； 6．聚光镜：超长工作距离万能聚光镜，孔位数≥5；
双色镜：双色分光镜；反射短波长，透过长波长。
阻断滤镜：吸收和阻挡激发光进入目镜；选择并让特异的荧光透过，表现出专一的荧光色彩。
多为长通滤色镜；LP490
标wk.baidu.com制作要求
（一）载玻片
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载玻片厚度应在0.8～1.2mm之间，太厚的坡片，一方面光吸收多，另一方面 不能使激发光在标本上聚集。载玻片必须光洁，厚度均匀，无明显自发荧光。有时 需用石英玻璃载玻片。 （二）盖玻片
荧光显微镜
Fluorescence microscopy
参加过仪器使用培训，通过 网上仪器知识考试，网上提 前预约，管理员审核通过方 可使用。
注意事项： 汞灯使用时尽量减少启动次 数；灯熄灭后要等待冷却才 能重新启动；点燃灯泡后不 可立即关闭，以免水银蒸发 不完全而损坏电极，一般需 要等15min 放置地点 ：401-1312室 管理员：吴安庆老师
基本原理
高 压 汞 灯
滤镜 分光
被荧光 紫外 激发 探针染 蓝 色的生 绿 物样本
光学 成像
被标记 结构的 荧光光 学图像
激发滤镜：从光源中分滤出一定波长范围的激发光。
（一般有紫外、蓝色和绿色激发滤片） 带通滤色镜(BP)：有宽、窄带之分。如：BP450-490 长、短通滤色镜组合（LP + KP）：LP450 + KP490
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荧光显微镜的不足:
1.无法实现对荧光,透射光的同时采集,无法实现多重荧光的 同时采集及共定位。 2.荧光散射光太强，造成实际分辨率的大大下降。 3.荧光漂白及对细胞组织的照射损伤。 4.无法对样品进行断层扫描,完成3D的工作。 5.只能在二维环境下观察。
6.样品不能太厚。
激光共聚焦扫描显微镜
院内5折，校内8 折
只允许3天后15天内的预约 zhenli@suda.edu.cn 多线氩离子激光器(458 nm, 488 nm, 515 nm) 半导体激光器：405 nm, 559 nm, 635 nm 上转换专用激光器：808 nm,980 nm 活细胞CO2培养系统
普通激光共聚焦显微镜的功能 上转换材料的成像检测
吴艳 分子影像与核医学研究中心 401#1124
荧光显微镜
Fluorescence microscopy
荧光显微镜是用来观察研究样品荧光现象的光 学显微镜，目前主要由光源、滤片系统、光路系统 等组成。
广泛应用在生命科学领域，可对组织和细胞的 结构、形态、蛋白质表达、亚细胞结构等进行定位、 定性观察及分析。
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盖玻片厚度在0.17mm左右，光洁。 （三）标本 组织切片或其他标本不能太厚，如太厚激发光大部分消耗在标本下部，而物镜 直接观察到的上部不充分激发。另外，细胞重迭或杂质掩盖，影响判断。 （四）封裱剂 封裱剂常用甘油，必须无自发荧光，无色透明，荧光的亮度在pH8.5～9.5时较 亮，不易很快褪去。所以，常用甘油和0.5mol/l pH9.0～9.5的碳酸盐缓冲液的等 量混合液作封裱剂。 （五）镜油 一般暗视野荧光显微镜和用油镜观察标本时，必须使用镜油，最好使用特制的 无荧光镜油，也可用上述甘油代替。
显微镜参数
7．荧光照明器：主机反射荧光系统可采用复眼照明技术，平均荧光视


野亮度，便于量化分析； 8. 荧光光源：130W以上长寿命荧光光源, 光导管传输，长度1.5米，符 合RoHS 和WEEE法令要求； 9. 高通透性荧光激发块：紫外， BP340-390, DM410，BA420-IF 蓝色，BP460-495, DM505，BA510-IF 绿色，BP530-550, DM570，BA575-IF； 10．荧光激发块转盘：编码型荧光激发块转盘，≥7孔位设计，便于今 后扩展应用,无需工具即可更换滤色镜组,与软件连接后能够随图片保存 荧光滤色镜组信息； 11．滤色镜：透射用日光平衡滤色片、绿色滤色片，荧光用减光片 ND6/ND25； 12．DIC附件：40X、60X物镜配置微分干涉附件。
仪器参数
IX83
针孔光栏 分光镜 发射荧光单色器及检测器 计算机图像存储与处理及控制系统
多线氩离子激光器(458 nm, 488 nm, 515 nm) 半导体激光器：405 nm, 559 nm, 635 nm 上转换专用激光器：808 nm,980 nm