交叉配血试验标准操作规程

交叉配血试验标准操作规程
1目的检测供血者与受血者之间的输血相容性，包括主侧配血与次侧配血，确保输血安全。

2职责血库工作人员负责执行
3适用范围适用于盐水介质法、手工凝聚胺法和手工微柱凝胶法交叉配血全过程。

4操作规程
4.1原理
4.1.1盐水介质法
IgM类抗体可以在室温盐水介质中发生凝集反应，使用手工试管法可以判断供、受者间血液的相容性。

4.1.2凝聚胺法
凝聚胺交叉配血试验就是利用多聚季胺盐类—凝聚胺携带很多正电荷，中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，引起正常红细胞可逆性凝集。

无抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，当加入中和液后，则凝集解散，而抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，则不能解散，以此来判断供、受者间血液的相容性。

4.1.3手工微柱凝胶法
微柱凝胶卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗人球蛋白试剂，红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后，在离心力的作用下不断向管底沉降，并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶上端，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。

4.2 试剂与器材
4.2.1试剂凝聚胺配套试剂、生理盐水、微柱凝胶卡。

4.2.2 器材血清学离心机、卡式专用离心机、光学显微镜、塑料软试管、试管架、一次性塑料滴管、记号笔、玻片、移液器、一次性移液枪头。

4.3 标本要求
4.3.1.患者样本 EDTA抗凝全血或血清，全血量3～5ml，在1760g条件下离心5分钟，离心后无溶血、无凝块、无明显乳糜。

4.3.2.供者标本枸橼酸盐抗凝全血，全血量3～5ml，在1760g条件下离心5分钟，离心后无溶血、无凝块、无明显乳糜。

4.4 操作步骤
4.4.1盐水介质法
4.4.1.1取两支试管，1支标明“主侧”；另一支标明“次侧”。

4.4.1.2按标记“主侧”管加受血者血浆1滴和供血者2%红细胞悬液1滴；“次侧”管加供血者血浆1滴和受血者2%红细胞悬液1滴。

混匀，以1000转/ min离心1分钟，轻轻侧动试管，观察结果。

冬季室温较低，应将试管保温，以防冷凝集素引起的凝集反应影响结果判断。

4.4.2凝聚胺法
4.4.2.1取试管2支，标明主、次侧，主侧管加受血者血浆（血清）2滴，供血者3～5%红细胞悬液（洗涤或不洗涤均可）1滴；次侧管加供血者血浆（血清）2滴，受血者3～5%红细胞悬液（洗涤或不洗涤均可）1滴。

4.4.2.2 每个试管分别加LIM液0.65ml，充分混合均匀后，再各加Polybrene溶液2滴，并混合均匀。

4.4.2.3用离心机3400转/min(相当于1000g离心力)离心10秒，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。

4.4.2.4 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做；
4.4.2.5 最后加入Resuspending2滴，轻轻摇动试管混合并同时观察结果。

4.4.2.6结果判定
如果在60秒内凝集散开，代表是由Polybrene引起的非特异性凝集，配血结果相合；如果凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合。

如反应可疑，可进一步倒在玻片上用显微镜观察。

4.4.3手工微柱凝胶法
4.4.3.1按试验所需取相应张数（反应孔数）的凝胶卡，撕掉卡上的封口锡纸，剩余孔保留锡纸，在反应孔的下方分别标明患者姓名和主次侧。

4.4.3.2主侧孔先加献血者0.8%-1%红细胞盐水悬液50ul，再加受血者血浆（或血清）25ul；次侧孔先加受血者0.8%-1%红细胞盐水悬液50ul，再加献血者血浆（或血清）25ul。

4.4.3.3加样完毕，重新将锡纸盖好，将凝胶卡放入专用的孵育器37℃孵育15分钟。

4.4.3.4放入配套的专用离心机，按要求离心10分钟，观察结果。

4.4.3.5结果判读
若对照管细胞沉淀在管底，检测管凝集块在胶上或胶中判读为阳性。

若对照管和检测管的细胞沉淀均在管底判读为阴性。

若对照管细胞在胶上或胶中说明试验失败，应重新试验。

4.5检验结果可报告区间相合或不相合
4.6 注意事项
4.6.1盐水介质法结果阴性，将原标本接着做凝聚胺法或抗人球蛋白法配血。

4.6.2 凝聚胺法
4.6.2.1离心后，倒掉上清液，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。

4.6.2.2 按照加样顺序进行结果观察，确保每一个反应结果都能在60秒内观察，否则弱凝集散开会出现假阴性。

4.6.2.3若病人血清（血浆）含肝素，如洗肾患者，须多加4～6滴Polybrene溶液以中和肝素。

4.6.2.4 在冬天室温极低的情况下，操作交叉配血试验，某些病人血清中可能含有寒冷凝集等因素，而导致假阳性的结果出现。

若有此怀疑，建议在最后滴入Resuspending时，将试管立即置入37℃水浴中，轻轻摇动试管混合，并在60秒内观察结果。

4.6.3手工微柱凝胶法
4.6.31 操作时，向反应腔内要先加红细胞，后加血清（血浆）。

4.6.3.2 如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论其原因。

4.6.3.3每日试验前，先取出微柱凝胶卡放置至室温。

4.6.3.4红细胞悬液的浓度严格控制在0.8%-1%之间。

4.6.3.5试剂卡若长期放在4℃冰箱，每1-2个月取出，用专用离心机离心一次，以防止干胶或产生气泡。

4.7参考文献
4.7.1 凝聚胺试剂使用说明书。

4.7.2 叶应妩、王毓三、申子瑜.全国临床检验操作规程.中华人民共和国卫生部医政司，2006：262-265
4.7.3 汪德清、于洋.输血相容性检测实验室质量控制与管理.人民军医出版社，2011：218-219。