机能实验学：药物血浆半衰期的测定

动脉取血约 1ml，离心取 上清
混匀
准确移液 100μl
1500转/分 离心5min
7.5%三氯醋 酸2ml
A
B
1.加0.5％亚 硝酸钠0.5ml
准确移 上清液 1.5ml
2.加0.5%麝香草 酚1ml
525nm测光密 度
C 偶氮反应 橙红色
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6. 然后准确吸取100μl加入相应的各B管, 各管以 1500转/分离心5min，分别取离心后的上清液 1.5ml，加0.5%亚硝酸钠溶液0.5 ml，摇匀，再加 0.5%麝香草酚1ml，可见橙红色反应。 以7.5%三氯醋酸2ml、 0.5％亚硝酸钠0.5ml、 0.5%麝香草酚1ml的混合液作空白对照，用722型 分光光度计于525nm波长下进行比色，测定各时间 点的光密度，在标准曲线上查得磺胺钠浓度。
3.取家兔，称重，以25%氨基甲酸乙酯溶液(乌拉坦)1g/kg(4ml/kg) 耳缘静脉注射麻醉，麻醉后将兔背位固定于手术台上，正中切开 颈部皮肤，分离一侧颈总动脉，结扎其远心端，并在近心端夹上 动脉夹，以阻断血流，再将放血导管向心脏方向插入颈总动脉内， 用线打活结固定。
4. 耳缘静脉注入3%磺胺嘧啶钠4ml/kg，记录注完时间（准确到分 钟）。
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操作步骤
⑴MODE 2 屏幕显示LR，进入线性回归计算状态； ⑵INV AC消除储存器内的全部数据； ⑶XoDo自变量输入； DATA因变量数据输入； ⑷INV A（截距），INV B（斜率） INV r（相关系数）； ⑸INV X得期望值。
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1912 2.计算机的操作步骤（以Excel2002为例）
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药物血浆浓度及半衰期测定
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实验目的
以磺胺嘧啶钠为例学习测定药物半
衰期（t1/2）等药动学参数的基本方法。
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实验原理
• 磺胺类药物为对氨基苯磺酰胺类化合物，在酸性溶液中，可与亚硝酸钠起重氮反应， 产生重氮盐。在碱性溶液中，重氮盐可与酚类化合物（麝香草酚）起偶氮反应，形成 橙红色的偶氮化合物。可在525nm波长下进行比色测定。根据Beer-Lamber定律，浓 度与光密度成正比关系。其化学反应式如下：
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实验药品
5%磺胺嘧啶钠溶液 7.5%三氯醋酸溶液 0.5%亚硝酸钠溶液 0.5% 麝香草酚溶液（溶于20％氢氧化钠内） 草酸钾结晶 25%氨基甲酸乙酯溶液 肝素注射液
方法与步骤 1912
1.取试管4只，依次用A1、A2、A3 ， A4标记，各加入草酸钾结晶几 粒(抗凝)。
2.取试管4只，依次用B1，B2，B3 ， B4标记，各加入 7.5%三氯醋 酸2ml备用。
橙红色
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实验动物
健康家兔一只，雌雄不拘 体重2~2.5kg
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实验器材：
试管24只，移液吸管10ml，1只；1ml，2只； 2ml 7只；移液器1支，吸头若干，试管夹，试管 架，离心机，722型分光光度计，手术剪，眼科 剪，止血钳，动脉夹，眼科镊，缝线，药棉，纱 布，捆扎绳，注射器10ml 1支，5ml 1支。
C=583.78A-26.489
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图表标题
磺胺药浓度(ug/ml)
200
150 y = 583.78x - 26.489
100
50
0 0
-50
0.1
0.2
0.3
吸光度
0.4
3%磺胺药标准曲线
线性 (3%磺胺药标 准曲线)
根据吸光度,线性方程 y=583.78x-26.489, 计算浓度,求对数值. (Excel – 常用函数 – log10 – 计算对数值. ) 将给药时间t 与已求得的磺胺药血浆浓度对数值做直线回归, 根据一级消除动力学公式: Ct=Co e -Kt 两边取对数： lgCt=lgCo+ (-K/2.303)t 回归方程的斜率(-K/2.303), 计算K, t1/2=0.693/K
将数据输入Excel中，调用其自带的函数，根据对话框 要求操作即可完成运算。 INTERCEPT（known-y’s，known-x’s）求线性回归拟合 线方程的截距。 CORREL（arrayl，array2）返回两组数值的相关系数。 SLOPE（Known-y’s known- x’s）返回经过给定数据点 的线性回归拟合线方程的斜率。 FORECAST（X，Known-y’s known- x’s）通过一线性回 归拟合线返回一个预测值。
5. 给药后5min、10min、20min、30min ，松开动脉夹，放血约 1ml，分别置于A1 、 A2、A3、A4管，迅速摇匀抗凝，离心取上 清。记录取血标本的准确时间。
注意在取血前先要放掉动脉插管内的残血。
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颈总动脉放血
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A1 5min;A2 10min; A3 20min; A4 30min
b (X X )(Y Y ) lXY (X X )2 lXX
a Y bX
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1912 应用公式t1/2=0.693/K，Vd=D/Co， CL=K·Vd，便可求得t1/2、Vd和 CL。
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1.计算器（Casio 的 fx－180或fx－3600p）
5. 离心所得上清液加入亚硝酸钠充分摇匀后方可加 入麝香草酚。
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分光光度计使用
• 模式－透射比－开盖调零－关盖100％透射 率－模式－吸光度－检测
• 比色杯光面透光
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给药后不同时间点的磺胺钠浓度
管号
1
2
3
4
5
给药时间
光密度值
磺胺钠浓度
磺胺钠对数浓度
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7.计算
根据一级动力学消除公式
C将t 给药C时0间et与kt已求lg得Ct的磺lg胺C血0 浆2浓.3度k03对数t 值lg Ct作
直线回归，即可得回归方程的斜率（- K /2.303）和 截距（lgCo）
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应用公式 t1/2=0.693/K，
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【注意事项】
1. 麻醉药静脉推注速度不宜过快
2. 颈总动脉分离及插管
3. 给药时间及各取血点均要准确记录，加样精确， 减少误差。
4. 在取血样前，要将残留在动脉套管中的血液放掉， 以免影响实验结果。