鸡传染性法氏囊病毒常用检测技术概述
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3 . 2 免疫 荧光检 测技 术
荧光抗体染色技术( F AT ) 是基 于
抗原 抗体反 应原理 ,将荧 光染料  ̄ l f F I T C标 记 到特 异 性 抗
抗 原检测进 行 了详细研 究 ,并指 出非 中和 性单 抗可 以和 I B D V的各 个毒株发 生反应 ,而 中和性单抗 却不具备 这一
统研究 ,证 明单抗技术 不仅具有常规E L I S A方法 的各种优 点 ,而且 能够利 用 中和 单抗 区分不 同 的血 清型 和亚 型 。
日 本 学 者 Na k a mu r a 等[ 6 1 利 用 聚 苯 乙 烯 微 球 联 接 单 抗 对
按常 规 乙醉系列 脱水 ,环氧 丙烷 过滤 ,6 1 8 或8 1 2 树脂 包 埋 ,超 薄切 片 ,醋 酸铀 和 棕檬 酸 铅 染 色 做 常规 电镜 标
位 点。另外 ,Mu n d t 等【 8 ] 利用单抗 技术与其 它方法相 结合
还 从I B D V感 染 细 胞 中 鉴 定 出 该 病 毒 的 一 种 新 蛋 白成 分 V P 5 。T L f i e 等【 】 也 利 用 单 抗 Do t - E L I S A对 不 同毒 株 I B DV
第5 天 出现 明 显 的 细 胞病 变 。
5 单抗技术
2 电子显微镜直接检查鸡传染性法 氏囊病病毒
取 病 死 鸡 法 氏囊 用 4 %戊 二醛 和 l %锇 酸 双 固 定 后 , 再
S n y d e r 等I 5 J 最先对 用 单抗技 术检  ̄ J I I B D V 抗ห้องสมุดไป่ตู้ 进行 系
点 , 因 此 从 抗 原 检 测 的 角 度 看 ,前 者 更 优 于 后 者 。 王 成
体上 ,荧光 抗体 与病料 中病 毒或分 离 的病 毒反应 ,通 过 荧光显微镜观察做 出判 ” ,分为直接免疫荧 光和 间接 免
鸡传 染性法 氏囊病( I B D ) 是 由鸡传染性法 氏囊病病 毒
( I B D V) 引起 的一种主 要危害 雏鸡 的免疫抑 制性传 染病 。
相载 体上利 用标 记酶 反应测 定抗 体或抗 原含量 的一种 检
测方 法 ,该方法 敏感特 异 、操作简 便 、易于重 复 ,是 目 前最常用 的一种 免疫检 测方法。吴红专等标记单抗M2 2 5 4 备 了单抗E L I S A试剂盒 ,大量临床样本 的检测 表明该试剂 盒 检 测准 确 性 与 病 毒 分离 鉴 定 结 果 基本 一 致 。 1 9 8 1 年 Ho wi e 首 次应 用 E L I S A进 行 I B D V的检 测 , 此 法 是 检 测 I B D V的特 异 、 敏 感 、快 速 和 重 复 性 好 的一 种 方 法 。 Ma r q u a r d t 等 和刘源远 建立 了间接E L I S A定量检 ̄ J i I B DV抗 体 。刚松 堂 等 】建 立 了双 抗 体夹 心 法 ,此 法 灵 敏度 是 A GP 的2 0 0 倍 。黄 金海 等[ 3 】 建立 了免疫过氧化物 酶单层试 验(I P MA)来检 测鸡 血清 中I B DV抗体 。伊岚等【 】建立 了 斑 点一 酶 联 免 疫 吸 附试 验 ( D o t . E L I S A)检 测 鸡 血 清 中
3 血清学方法 3 . 1 琼脂扩散试验( AG P ) 琼脂扩散试 验主要 用于检测血
清 中 的 抗 体 或 抗 原 。取 病 死 鸡 的 法 氏 囊 或 肝 脏 , 研 磨 制 备 成 混 悬 液 ,与 I B D V标 准 阳 性 血 清 进 行 A GP 。
等[ 还 利用 中和 单 抗 免 疫 酶 组 化法 直 接 检 测 到 组 织 中 I B DV的抗 原漂 移 ,并鉴别 出了群 特异性和 型特异性 中和
I B D V 抗体 ,检 出的阳性率 为 1 0 0 %,具有特 异性强 、灵
敏性 高、重复性好 、直观性 强等优 点,可用于I B D V母 源 抗体及鸡群接种疫苗后特异性抗体的检测 。
绒毛 尿囊膜 或尿 囊液 与鸡传 染性法 氏囊病 阳性血 清进 行
中和试 验鉴 定,或在V e r o 细 胞上连续传 至第4 代 ,接种 后
山东畜牧兽 医
2 0 1 4年第 3 5卷
鸡传染性法 氏囊病毒 常用检测技术概述
赵青梅 ( 山西 省平遥县畜牧中 心 0 3 1 1 0 0 )
中图分类号:¥ 8 5 8 . 3 1 文献标识码 :A 文章编号 :1 0 0 7 . 1 7 3 3 ( 2 0 1 4 ) 1 0 — 0 0 7 8 . 0 2
本 , 电子 显 微 镜下 观察 ,可 见 晶格 状 排 列 、近 似 六 角
形 、 二 十 面 体 立 体 对 称 的I B D V。
I B DV抗 原进 行检测 ,结果更敏 感、快速 ,室温下用 玻片
作 凝 集 反 应 ,5 mi n 便 出结 果 , 既 可 定 性 又 可 定 量 。S n y d e r
本 病发病 率高 ,发生 本病 的鸡 场 ,常常 出现 新城 疫 、马 立 克 氏病 等疫 苗接种 的免疫失败 ,这种 免疫抑 制现象 常 使 发病率 和死亡 率急 剧上升 。因此 快速准 确地检 测鸡 传 染性法 氏囊病病 毒( I B D V1 ,对正 确诊 断、预 防鸡传 染性 法 氏囊病 , 降低 养殖 户的经 济损 失十分 重要 。本文将 就
鸡传染性法 氏囊病病毒常用 的检测技术进行分类介绍 。
1 鸡传染性法 氏囊病毒 分离
取 病 鸡 的法 氏 囊或 脾 脏 ,研 碎 后 加入 灭 菌 生 理 盐
水 ,制成 混悬液 ,离 心取上清 液 ,加适量 双抗 ,通过 绒
毛尿囊膜 途径接种9 ~ l 1 日龄S P F 鸡胚 。3 ~ 5 d 后鸡胚 出现 死 亡 ,胚体 充血 、 出血 、肝脏 有斑 点状坏死 和 出血斑 。取