金黄色葡萄球菌检验
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所有的毒株产生血浆凝固酶，人和动物来 源的菌株通常可凝固兔、人、马和猪的血 浆。
金黄色葡萄球菌产生磷脂酶、蛋白酶、脂 肪酶和溶菌酶等，大多数菌株可水解天然 的动物蛋白并释放脂肪酸。在BP平板产生 磷脂环。
整理课件
6
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
生物学特性 ——致 病 性
•金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强弱主要取 决于其产生的毒素和侵袭性酶： •a.溶血素：外毒素，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌 体局部缺血和坏死；在血平板培养出现溶血环。 •b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； •c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血 液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬 细胞的吞噬作用。 •d.耐热核酸酶 •e.肠毒素：引起急性胃肠炎。
有毒性，并使菌落产生黑色
✓ 卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环
✓ 甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制 作用。
整理课件
15
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
在BP平板上典型菌落为：圆形,表面光滑、凸起、湿 润、菌落直径为2mm~3mm, 颜色呈灰黑色至黑色,有光泽, 常有浅色(非白色)的边缘,周围绕以不透明圈(沉淀),其外常 有一清晰带。当用接种针触及菌落时具有黄油样黏稠感。
整理课件
7
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
•葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的疾病， 可引发不同程度的急性胃肠炎症状，恶心、呕吐最为突 出而且普遍，腹痛、腹泻次之。 •当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如 牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经8-10 小时即可相当数量的肠毒素。
利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（最高可耐受 15%的氯化钠），用7.5%氯化钠肉汤增菌。
36±1℃培养18h~24h。
整理课件
12
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检验程序 ——分离培养（血平板和BP平板）
血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，因此在血平
板上产生明显的溶血环。
典型菌落：呈金黄色，有时也为白色，大而突起，圆形， 不透明，表面光滑，菌落周围有完全透明溶血环。
25g样品225ml生理盐水选三个连续梯度每个梯度分别取1ml接种之至表面干燥的bp平板如04ml03ml03ml平板计数分别记录每种类型的菌落数3648hr血浆凝固酶试验报告结果bbpp平板计数平板计数梯度稀释25gml样品225ml稀释液均质10倍系列稀释选择3个适宜稀释度的样品匀液各吸取ml分别接种于10氯化钠胰酪胨大豆肉汤接种bairdparker平板血浆凝固酶试验36145h4836145h48查mpn表报告结果第三法金黄色葡萄球菌mpn计数器材准备准备的器材规格名称数量1250ml三角瓶第一天一样品处理
整理课件
8
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
二、检验程序与操作方法
食品安全国家标准GB 4789.10-2016 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验 第一法 金黄色葡萄球菌定性检验
整理课件
9
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检样 25g(ml)样品+225ml7.5%氯化钠肉汤，均质
革兰氏阳性球菌，直径为0.5-1.0微米，镜检时呈单个、成 对、四联或不规则的簇群，如葡萄状，故称为葡萄球菌。
整理课件
3
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
大多数菌株产生类胡萝卜素，使细胞团呈现出深橙色 到浅黄色，色素的产生取决于生长的条件，故称金黄 色葡萄球菌(高盐甘露醇平板：金黄色葡萄球菌为淡黄 色菌落；其他葡萄球菌为白色菌落)。
h～24 h 或45 h～48 h。 挑取Baird-Parker 平板或血平板上可疑菌落至少5个，2010版1
个以上。
整理课件
24
试管法
整理课件
21
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
结果报告
在25g(mL)样品中检出或未检出金黄色葡 萄球菌。
即：检出/ 25g(mL) 或 未检出/ 25g(mL)
整理课件
22
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
小结
了解金黄色葡萄球菌的生物学特性（耐盐， 能产毒素、凝固酶等）
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
金黄色葡萄球菌定性检验
整理课件
1
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
学习目的与要求
1. 了解金黄色葡萄球菌生物学特性。
2. 掌握金黄色葡萄球菌定性检测程序和检 验方法。
整理课件
2
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
一、生物学特性——菌体形态及培养特征
整理课件
4
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
最适生长温度37℃，最适pH为7.4； 兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好； 可在高盐环境下生长，15%氯化钠环境下
还能生长； 一般用含10%氯化钠的胰酪胨大豆肉汤增
菌或7.5%氯化钠肉汤增菌。
整理课件
5
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
如凝固体积大于原体积一半时，判定为阳性。
如结果可疑，从营养琼脂小斜面挑去菌落到BHI肉汤，
重复凝固酶试验。整理课件
19
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
阴性
阳性
不凝固
少量、 零散凝
固
明显的块 状凝固
整理课件
巨大块 凝固
完全凝固， 倒置不流动
20
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
掌握检验流程 知识点：增菌液，BP平板和血平板的典型
菌落特征，凝固） 金色葡萄球菌检验
新旧标准主要差异
增菌液统一改成了7.5%氯化钠肉汤 这个标准主要是因为2008版本参照美国FDA的方法增加了10%
胰胨大豆肉汤以来，发现该增菌液使用效果不好，目标菌生长差。 修改Baird-Parker平板的培养时间为24 h～48 h，原来是18
整理课件
13
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
大而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血环
阳性
整理课件
阴性
14
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检验程序——分离培养
BP（贝尔德- 帕克）平板：
✓ 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素 和矿物元素
✓ 丙酮酸钠是一种生长促进剂 ✓ 亚碲酸盐对除金黄色葡萄球菌外的其他能分解卵黄的菌株
试管法
挑取BP平板或血平板上至少5个可疑菌落（少于5个
全选，分别接种于BHI肉汤和营养琼脂小斜面， 36±1℃
培养18h-24h。
取0.5mL无菌生理盐水加入瓶装冻干兔血浆中至完全
溶解，加入培养后的BHI肉汤培养物0.2-0.3mL，振荡摇匀，
放36±1℃恒温箱或水浴内，每半小时观察一次，观察6h，
整理课件
17
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验 检验程序 ——确证鉴定1.革兰氏染色镜检
革兰氏阳性，球形，葡萄状，无芽孢，无荚膜
整理课件
18
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验 检验程序 ——确证鉴定2.血浆凝固酶试验
金黄色葡萄球菌可以产生血浆凝固酶，因此对其鉴别 的主要试验是测定其凝固酶。
有时可见到不分解脂肪的菌株,除没有不透明圈和清 晰带外,其他外观基本相同。
从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落,其黑色 常较典型菌落浅些, 且外观可能较粗糙,质地较干燥。
整理课件
16
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验 B-P平板
圆形、光滑、黑色有光泽, 周围绕以不透明圈,其外有清晰带
36± 1℃ 18h- 24h
Baird-parker平板，血平板
36± 1℃
BP平板 24h-48h 血平板 18h-24h
涂片染色
观察溶血
BHI肉汤和营养琼脂小斜面
36± 1℃ 18h- 24h
血浆凝固酶试验
报告
整理课件
10
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检验程序 ——样品处理
称取25g（mL）样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉 汤的无菌均质杯内,8000r/min~10000r/min均质 1min~2min,或放入盛有225mL7.5%氯化钠肉汤无菌均 质袋中,用拍击式均质器拍打1 min~2min。
整理课件
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检验程序 ——增菌
金黄色葡萄球菌产生磷脂酶、蛋白酶、脂 肪酶和溶菌酶等，大多数菌株可水解天然 的动物蛋白并释放脂肪酸。在BP平板产生 磷脂环。
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
生物学特性 ——致 病 性
•金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强弱主要取 决于其产生的毒素和侵袭性酶： •a.溶血素：外毒素，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌 体局部缺血和坏死；在血平板培养出现溶血环。 •b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； •c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血 液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬 细胞的吞噬作用。 •d.耐热核酸酶 •e.肠毒素：引起急性胃肠炎。
有毒性，并使菌落产生黑色
✓ 卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环
✓ 甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制 作用。
整理课件
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
在BP平板上典型菌落为：圆形,表面光滑、凸起、湿 润、菌落直径为2mm~3mm, 颜色呈灰黑色至黑色,有光泽, 常有浅色(非白色)的边缘,周围绕以不透明圈(沉淀),其外常 有一清晰带。当用接种针触及菌落时具有黄油样黏稠感。
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
•葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的疾病， 可引发不同程度的急性胃肠炎症状，恶心、呕吐最为突 出而且普遍，腹痛、腹泻次之。 •当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如 牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经8-10 小时即可相当数量的肠毒素。
利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（最高可耐受 15%的氯化钠），用7.5%氯化钠肉汤增菌。
36±1℃培养18h~24h。
整理课件
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检验程序 ——分离培养（血平板和BP平板）
血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，因此在血平
板上产生明显的溶血环。
典型菌落：呈金黄色，有时也为白色，大而突起，圆形， 不透明，表面光滑，菌落周围有完全透明溶血环。
25g样品225ml生理盐水选三个连续梯度每个梯度分别取1ml接种之至表面干燥的bp平板如04ml03ml03ml平板计数分别记录每种类型的菌落数3648hr血浆凝固酶试验报告结果bbpp平板计数平板计数梯度稀释25gml样品225ml稀释液均质10倍系列稀释选择3个适宜稀释度的样品匀液各吸取ml分别接种于10氯化钠胰酪胨大豆肉汤接种bairdparker平板血浆凝固酶试验36145h4836145h48查mpn表报告结果第三法金黄色葡萄球菌mpn计数器材准备准备的器材规格名称数量1250ml三角瓶第一天一样品处理
整理课件
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
二、检验程序与操作方法
食品安全国家标准GB 4789.10-2016 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验 第一法 金黄色葡萄球菌定性检验
整理课件
9
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检样 25g(ml)样品+225ml7.5%氯化钠肉汤，均质
革兰氏阳性球菌，直径为0.5-1.0微米，镜检时呈单个、成 对、四联或不规则的簇群，如葡萄状，故称为葡萄球菌。
整理课件
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
大多数菌株产生类胡萝卜素，使细胞团呈现出深橙色 到浅黄色，色素的产生取决于生长的条件，故称金黄 色葡萄球菌(高盐甘露醇平板：金黄色葡萄球菌为淡黄 色菌落；其他葡萄球菌为白色菌落)。
h～24 h 或45 h～48 h。 挑取Baird-Parker 平板或血平板上可疑菌落至少5个，2010版1
个以上。
整理课件
24
试管法
整理课件
21
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
结果报告
在25g(mL)样品中检出或未检出金黄色葡 萄球菌。
即：检出/ 25g(mL) 或 未检出/ 25g(mL)
整理课件
22
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
小结
了解金黄色葡萄球菌的生物学特性（耐盐， 能产毒素、凝固酶等）
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
金黄色葡萄球菌定性检验
整理课件
1
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
学习目的与要求
1. 了解金黄色葡萄球菌生物学特性。
2. 掌握金黄色葡萄球菌定性检测程序和检 验方法。
整理课件
2
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
一、生物学特性——菌体形态及培养特征
整理课件
4
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
最适生长温度37℃，最适pH为7.4； 兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好； 可在高盐环境下生长，15%氯化钠环境下
还能生长； 一般用含10%氯化钠的胰酪胨大豆肉汤增
菌或7.5%氯化钠肉汤增菌。
整理课件
5
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
如凝固体积大于原体积一半时，判定为阳性。
如结果可疑，从营养琼脂小斜面挑去菌落到BHI肉汤，
重复凝固酶试验。整理课件
19
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
阴性
阳性
不凝固
少量、 零散凝
固
明显的块 状凝固
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巨大块 凝固
完全凝固， 倒置不流动
20
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
掌握检验流程 知识点：增菌液，BP平板和血平板的典型
菌落特征，凝固） 金色葡萄球菌检验
新旧标准主要差异
增菌液统一改成了7.5%氯化钠肉汤 这个标准主要是因为2008版本参照美国FDA的方法增加了10%
胰胨大豆肉汤以来，发现该增菌液使用效果不好，目标菌生长差。 修改Baird-Parker平板的培养时间为24 h～48 h，原来是18
整理课件
13
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
大而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血环
阳性
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阴性
14
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检验程序——分离培养
BP（贝尔德- 帕克）平板：
✓ 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素 和矿物元素
✓ 丙酮酸钠是一种生长促进剂 ✓ 亚碲酸盐对除金黄色葡萄球菌外的其他能分解卵黄的菌株
试管法
挑取BP平板或血平板上至少5个可疑菌落（少于5个
全选，分别接种于BHI肉汤和营养琼脂小斜面， 36±1℃
培养18h-24h。
取0.5mL无菌生理盐水加入瓶装冻干兔血浆中至完全
溶解，加入培养后的BHI肉汤培养物0.2-0.3mL，振荡摇匀，
放36±1℃恒温箱或水浴内，每半小时观察一次，观察6h，
整理课件
17
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验 检验程序 ——确证鉴定1.革兰氏染色镜检
革兰氏阳性，球形，葡萄状，无芽孢，无荚膜
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18
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验 检验程序 ——确证鉴定2.血浆凝固酶试验
金黄色葡萄球菌可以产生血浆凝固酶，因此对其鉴别 的主要试验是测定其凝固酶。
有时可见到不分解脂肪的菌株,除没有不透明圈和清 晰带外,其他外观基本相同。
从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落,其黑色 常较典型菌落浅些, 且外观可能较粗糙,质地较干燥。
整理课件
16
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验 B-P平板
圆形、光滑、黑色有光泽, 周围绕以不透明圈,其外有清晰带
36± 1℃ 18h- 24h
Baird-parker平板，血平板
36± 1℃
BP平板 24h-48h 血平板 18h-24h
涂片染色
观察溶血
BHI肉汤和营养琼脂小斜面
36± 1℃ 18h- 24h
血浆凝固酶试验
报告
整理课件
10
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检验程序 ——样品处理
称取25g（mL）样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉 汤的无菌均质杯内,8000r/min~10000r/min均质 1min~2min,或放入盛有225mL7.5%氯化钠肉汤无菌均 质袋中,用拍击式均质器拍打1 min~2min。
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检验程序 ——增菌