DNA制片过程

DNA制片过程
制片过程
1.固定（宫颈标本）
医生用宫颈刷刷取标本后，将宫颈刷头取下放入固定液中，使取得的宫颈细胞标本得到及时的固定保存。

2.消化
将固定液瓶放于振荡器上振荡半小时，直至粘液被完全消化，标本呈细颗粒状——细胞分散成细胞悬液止。

3.离心
宫颈刷取物标本或痰标本
消化好的标本液使其细胞均匀分布，另取一支7ml试管，倒入标本液4~5ml，放入离心机中以2500转/分转速离心4分钟。

从离心机中取出后，倒去上清夜。

根据沉淀的标本量加入适量固定液，再用一次性吸管反复抽吸使其混合均匀备用。

浆膜腔积液
1）将标本先摇匀，将浆膜腔积液标本倒入一支50ml或15ml刻度离心管，放入离心机中以3000转/分转速离心5分钟。

2）从离心机中取出后，倒入上清液。

（或用一次性滴管吸除上清液，具体操作可视沉淀物性状而定）
4.制片
宫颈刷取物制片
将转头置入离心涂片机（兰丁高科公司）中备好，吸取混匀的标本液加入转头孔中，以1500转/分的速度离心涂片4分钟，制成薄层细胞片1-2张。

细胞片经充分干燥后，经Feulgen-THionin染色，用DNA细胞自动检测分析仪扫描。

浆膜腔积液
根据标本的性质，合理选择使用离心涂片机制片或者推片。

染色过程
1）将制好的标本片干燥。

2）固定：将标本片置入无水乙醇中固定30分钟，回收无水乙醇。

3）B.S液固定60分钟，回收B.S液。

4）水洗3到5次，尽量控干水分。

5）酸化水解：5N HCL 25摄氏度酸解60分钟。

6）水洗3到5次。

7）DNA染液67分钟（25摄氏度）。

8）水洗6到8次。

9）用漂洗液漂洗3次，第1次1分钟、第2次3分钟、第3次4分钟。

10）水洗3到5次。

11）脱水：分别经95%乙醇、95%乙醇、无水乙醇、无水乙醇各2分钟。

12）吹干、贴条形码，中性树胶封片。