HPLC法同时测定清心莲子饮中黄芩苷及甘草酸铵两种成分的含量

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化学工程师
Chemical Engineer2021年第2期Sum305No.2
分析测试
DOI:10.16247/ki.23-1171/tq.20210214
HPLC法同时测定
清心莲子饮中黄苓昔及
甘草酸铁两种成分的含量*
陈忠新■*,苟鑫宇■*,李强2,解颖|,田明|
(1.黑龙江中医药大学,黑龙江哈尔滨150040;2.哈尔滨维科生物技术开发公司,黑龙江哈尔滨150069)
摘要:建立高效液相色谱方法,以清心莲子饮中黄苓苷以及甘草酸铵两种成分为研究对象,对其进行含量测定;采用Elite C.8色谱柱,以不同的溶剂作为流动相,结果两种成分的R均大于0.9990,测定的含量分别为34.9566和4.6613mg-剂-1;实验仪器及测定方法结果良好,适用于清心莲子饮中黄苓苷以及甘草酸铵的含量测定,为该制剂的质量控制提供了依据。

关键词:HPLC;清心莲子饮;黄苓苷;甘草酸铵;含量测定
中图分类号:R917文献标识码:A
Simultaneous determination of Baicalin and Ammonium Glycyrrhizinate
in Qingxinlianzi decoction by HPLC*
CHEN Zhong-xin1,GOU Xin-yu1,LI Qiang2,XIE Ying1,TIAN Ming1
(1.Heilongjiang University of Traditional Chinese Medicine,Harbin150040,China;
2.Harbin Weike Biotechnology Development Company,Harbin150069,China)
Abstract:To establish an HPLC method for the determination of Baicalin and Ammonium Glycyrrhizinate in qingxinlianzi decoction;Elite C column was used with different solvents as mobile phase,the R2of the two com­ponents were higher than0.9990,and the measured contents were34.9566and4.6613mg"dose-1;This method is suitable for the determination of baicalin and Ammonium Glycyrrhizinate in qingxinlianzi decoction,which provides a basis for the quality control of qingxinlianzi decoction.
Key words:HPLC;Qingxinlianzi decoction;Baicalin;Ammonium Glycyrrhizinate;content determination
清心莲子饮出自《太平惠民和剂局方》。

此方在
历代医籍中多有记载,临床应用广泛,功效显著[1]。

全方由莲子、车前子、黄苓、地骨皮、人参、茯苓、麦冬、炙黄芪、炙甘草9味中药组成,方中黄苓为臣药,奏清肺而退虚热之效,炙甘草补脾和胃并调合诸药为使药。

全方共奏清心火,益气阴,止淋浊之功[2-5]。

黄苓苷和甘草酸铵分别为黄苓和炙甘草的有效成分[67],本研究采用高效液相色谱法对两种成分进行测定,为清心莲子饮的质量评价以及质量控制提供依据。

收稿日期:2020-11-09
基金项目:黑龙江省中医药管理局中医药科研项目(ZHY2020-083);
黑龙江中医药大学校基金资助项目(201733)
作者简介:陈忠新(1982-),女,实验师,009年毕业于黑龙江中医药大学,中药学专业,硕士研究生,主要从事中药学化学成分
研究及药剂学研究。

通信作者:田明(1963-),男,黑龙江中医药大学实验实训中心,教授,硕士研究生导师,主要从事药剂学新药开发与研究。

1仪器及试药
ThermoU3000型高效液相色谱仪(赛默飞世尔科技有限公司);KQ-500D超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司);XJ220A电子分析天平(上海天美天平仪器有限公司);GLZY-0.5B真空冷冻干燥机(上海浦东冷冻干燥设备有限公司)。

色谱甲醇、乙腈(迪马科技有限公司);其他分析纯试剂为天津天大试剂有限公司生产。

黄苓及炙甘草均为内蒙古赤峰市道地药材;标准品均采购自中国药品生物制品检定所,批号为黄苓苷(110715-201720)、甘草酸铵(110731-200615)。

2021年第2期陈忠新等:HPLC法同时测定清心莲子饮中黄苓苷及甘草酸铵两种成分的含量15
2黄苓苷含量测定
2.1色谱条件
选用大连Elite ODS色谱柱,流动相为甲醇-水-磷酸(47:53:0.2),将检测波长定为280nm,柱温设置为25益,将流速设置为1.0mL-min-*o
2.2供试品溶液的制备
称取处方量药材饮片,煎取滤液,制备成冻干粉,精密称取0.07g,于具塞锥形瓶中加入20mL甲醇,超声提取20min,滤过,蒸干,残渣用甲醇定容至10mL,即得。

2.3对照品溶液的制备
黄苓苷对照品12.25mg,精密称取,甲醇溶解并定容至25mL,所制得标准品溶液的浓度为0.49mg・mL-1。

2.4方法学考察
2.4.1线性及相关系数用ThermoU3000型高效液相色谱仪,自动进样量分别为2、4、6、8、10“L,按上述色谱条件测定。

回归方程为Y=5
3.946X-0.191, R2=1o结果表明在0.196~0.98滋g范围内黄苓苷线性关系良好,见图1o
Fig.1Standard curve of Baicalin
2.4.2精密度试验取2.2项下供试品溶液,每次进样量10滋L,于高效液相色谱仪中连续重复测定6次,得黄苓苷峰面积的RSD值为0.76%(RSD< 3%),表明仪器精密度良好。

2.4.3重复性试验按2.2项下方法平行制备6份清心莲子饮供试品溶液,各进样10滋L,测得黄苓苷平均含量为3
3.7934mg•剂-1,RSD值为
4.56%(RSD< 5%),表明方法重复性良好。

2.4.4稳定性试验取配制好的同一供试品溶液,连续12h每隔1h进样10滋L,得黄苓苷峰面积RSD 值为1.12%,表明样品12h内基本稳定。

2.4.5加样回收试验精密称取上述6份冻干粉各0.035g,分别加入0.49mg・mL-1的黄苓苷对照品溶液各1mL,制备成供试品溶液,测定,计算回收率,结果6批供试品回收率均在95%~105%之间,符合加样回收率要求。

2.5样品含量测定
分别精密称取3批次清心莲子饮冻干粉各0.07g,按确定的方法制备供试品溶液。

每批进样10滋L,计算含量,结果见表1o
3甘草酸铵含量测定
3.1色谱条件
同上色谱柱,以乙月青-0.05%磷酸(体积比19寅50:81寅50)为流动相进行梯度洗脱,检测波长为237nm,流速1.0mL・min-1。

3.2供试品溶液的制备
精密量取上述水煎液50mL,用水饱和正丁醇每次50mL萃取3次,蒸干,定容至5mL即得。

3.3对照品溶液的制备
精取甘草酸铵对照品4.2mg,甲醇定容至10mL 容量瓶中,制成浓度为0.42mg-mL-1的甘草酸铵标准品溶液。

3.4方法学考察
3.4.1线性及相关系数甘草酸铵对照品溶液进行高效液相色谱测定,进样量分别为2、4、6、8、10“L,得回归方程为:Y=8.605X-0.0224,R2=0.9992。

结果表明甘草酸铵含量在0.84~4.2滋g范围内呈良好的线性关系,见图2。

图2甘草酸铵标准曲线
Fig.2Standard curve of ammonium glycyrrhizinate
3.4.2重复性试验同2.4.3方法测定,得甘草酸铵平均含量为4.5484mg•剂-1,RSD值为4.05%,表明方法重复性良好。

3.4.3稳定性试验同2.4.4方法测定,得甘草酸铵
16陈忠新等:HPLC法同时测定清心莲子饮中黄苓苷及甘草酸铵两种成分的含量2021年第2期
峰面积RSD值为2.32%,表明在12h内测定该供试
品溶液均是稳定可行的。

3.4.4加样回收试验精密称取上述6份冻干粉各
0.38g,分别加入0.42mg2mL-1的甘草酸铵对照品溶
液各1mL,制备成供试品溶液,测定,计算回收率,结
果6批供试品加样回收率均在95%~105%之间,且
RSD值均小于3%,符合要求。

3.5样品含量测定
同2.5,结果见表1o
表1含量测定结果
Tab.1Content determination results
批次
峰面积/mAu•min含量/mg-剂-1
黄苓苷甘草酸铵黄苓苷甘草酸铵
136.004115.846234.6564 4.5506
236.066216.969435.2479 4.8136
334.874516.001234.9656 4.6198
Mean35.648316.272334.96 4.66
RSD/% 1.88 3.740.85 2.92
4结论
通过建立高效液相色谱法,对清心莲子饮中黄苓苷以及甘草酸铵两种成分的含量进行测定,结果两种有效成分标准曲线线性关系良好,精密度、重复性、稳定性以及加样回收率RSD值均小于5,表明该实验方法灵敏度高,重现性好,可以用于检测两种成分的含量,且样品12h内稳定可靠。

本研究推动了该制剂的质量控制,可以更加科学合理的指导清心莲子饮的临床合理应用。

参考文献
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验[J].河北中医,2014,36(4):489-490.
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[4]胡旭鹏.中西医结合治疗非感染性尿道综合征[J].中国中西医
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[5]曹彦,孙美芳.傅青主五淋散、清心莲子饮治疗慢性前列腺炎临
床观察[J].中华男科学杂志,2016,22(12):1140-1142.
[6]罗燕子.中药黄苓的化学成分及药理作用的相关研究进展[J].
临床合理用药杂志,2018,11(30):180-181.
[7]刘清华.甘草的化学成分和药理作用的概述[J].中国中医药现
代远程教育,2011,9(13):84.
[8]李喜香,张志瑞,毕映燕,等•祛寒逐风颗粒质量标准研究[J].中
国中医药信息杂志,2020,27(2):53-58.
(上接第13页)
3结论
本实验用HPLC法提取落叶松中的二氢槲皮素,实验结果为提取液乙醇浓度为80%、溶剂用量为药材的10倍量、提取时间为120min、提取2次时落叶松中二氢槲皮素含量较高,为163.0mg•mL_1o如若考虑到实际生产Z醇回收问题,在考虑成本情况下,也可将第一次倍量调制10倍量、提取时间120min,第二次提取量8倍量、提取时间90min。

参考文献
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