芽孢杆菌的筛选1

实验材料和用具
• 样品
– 含有芽孢杆菌的培养液（1g养鸡场土壤+99ml无菌水）
• 培养基及试剂
– 普通肉汤培养基：
• 配方：蛋白胨20.0g，牛肉膏5.0g，Nacl 5.0g，自来水1000ml， PH 7.2~7.4 • 用法：称取上述用品30.0g，加热溶解于1000ml自来水，并不断 搅拌，煮沸1min，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。
• 倾注分离：
将培养液再经一次热 处理后，可进行适当稀释， 取一吸管以无菌操作法分 别吸取10ˉ4、10ˉ5、10ˉ6 土壤稀释液1ml，加在空 的无菌培养皿中。将淀粉 琼脂培养基，溴钾酚紫培 养基还有酪素培养基融化 冷却至50℃倾入各皿，立 即摇匀，凝固后进行涂布 平板，倒置培养24~48h。
分离淀粉酶菌株时， 可取碘液加在淀粉平 板上的菌落周围，观 察形成透明圈的情况， 未产生淀粉酶的是蓝 色，有淀粉酶产生的 无色。分离产酸菌株 时，可通过观察溴钾 酚紫培养基的颜色变 化。
– 淀粉琼脂培养基
• 配方：可溶性淀粉20.0g，KNO3 1.0g，NaCl 0.5g， K2HPO4.3H2O 0.5g，MgSO4.7H2O 0.5g，FeSO4.7H2O 0.01g，琼脂15~20g，自来水1000ml • 用法：先用少量冷水把可溶性淀粉调成糊状，用文火加热，然后 再加水及其他药品，待各成分溶解后再补水至1000ml
– 酪素培养基：
• 配方:酪素20g、氨水 40ml、自来水1000ml • 用法：取酪素20g溶于 水中，（加氨水以助溶 解）
– 溴钾酚紫培养基：
• 乳糖5g、蛋白胨5g、酵 母膏3g、琼脂15~20g、 0.5%溴钾酚紫溶液 10ml、自来水1000ml • 用法：称取琼脂加热溶 解后，再加入以称取好 的乳糖、蛋白胨、酵母 膏和溴钾酚紫充分溶解， 混匀
芽孢杆菌的筛选
（产淀粉酶，产蛋白酶，产酸）
实验过程
• • • • • • 实验目的 实验原理 实验材料和用具 方法和步骤 实验结果 实验分析
实验目的
• 掌握用选择性培养基从土壤中分离芽孢杆 菌的方法 • 了解芽孢杆菌的特征 • 将我们这一学期所学的微生物的几个基本 实验运用熟练
实验原理
• 在养鸡场的土壤中有可能分布着产淀粉酶，产蛋白酶，产酸的芽 孢杆菌，通过富集培养，加热土样悬液，杀死非芽孢杆菌，分离 可获得细菌的单菌落，经革兰氏染色，可判断分离菌株是否为目 的菌株，凡是具有产蛋白酶能力的芽孢杆菌水解酪素生产酪氨酸， 在酪素平板上菌落周围出现透明的水解圈；具有产淀粉酶能力的 芽孢杆菌，水解淀粉，在淀粉平板上菌落周围也会出现水解圈， 但肉眼难以分辨，可通过滴加碘液鉴别；产酸的芽孢杆菌在溴钾 酚紫培养基上会变黄。
• 染色液： 草酸铵结晶紫染色液、卢歌尔氏碘液、 95%乙醇、0.5%沙黄染色液 材料： 载玻片、香柏油、95%乙醇+乙醚（3： 7）、擦镜纸、吸水纸、培养皿、吸管、三 角瓶、接种环、纱布、棉花、细线、酒精 灯
方法步骤
• 富集培养： 取菌液5ml接入普通肉汤培养基中， 80~90℃水浴加热10~15min，然后振荡培 养24h。
菌Байду номын сангаас保存
实验结果
• 我们总共做了三次，第一次的时候，三种 培养基上都是只有少量的霉菌，没有芽孢 杆菌，跟老师讨论后，知道我们的菌悬液 稀释的太稀了，于是，将菌悬液重新配了 一下：5g养殖场鸡粪+20ml无菌水（也没 有稀释）
• 第二次的结果，淀粉琼脂培养 基上长菌了，经碘液坚定，该 菌能降解淀粉。 • 酪素培养基上面也长菌了，但 是没有降解圈，做了革兰氏染 色，看不到形状，只能确定红 色的，G+菌。 • 溴钾酚紫培养基颜色变了，变 黄了。 • 但是溴钾酚紫培养基由于菌种 没有及时挑出来，培养基颜色 又变成了紫色。 • 分析原因：溴钾酚紫培养基上 除了有产酸的芽孢，还有产碱 的。
• 纯种鉴定（革兰氏染色）：
– 涂片：挑一环水于载玻片中央，再用接种环分 别挑取少量菌与玻片上的水混合并形成薄的菌 膜 – 固定：涂片在空气中干燥，手执玻片一端，有 菌膜的一面朝上，玻片在微火上来回通过3次 （用手背面触摸玻片反面以不烫手为宜），待 冷却后在加染料。
• 染色：
– 初染：将玻片置于玻片搁架上，加草酸铵结 晶紫染色液，染色1min，倾去染色液，用自 来水小心冲洗。 – 媒染：滴加卢哥尔氏碘液，染色1min，倾去 水洗。 – 脱色：滴加95%乙醇摇晃倾去乙醇，重复2~3 次至无颜色即可，立即水洗，终止脱色。 – 复染：滴加沙黄染色液，染色1min，水洗， 吸水纸吸干。
实验过程照片展示